鸡蛋溶菌酶用阳离子交换法

❶ 溶菌酶是从哪儿提取出来的

溶菌酶广泛存在于鸟类、 家禽的蛋清中和哺乳动物的泪液、 唾液、 血浆、 乳汁、 胎盘以及体液、 组织细胞内,其中在蛋清中含量最丰富 (约 0.3% )。在一些植物体如卷心菜、 萝卜、无花果和微生物体内也存在溶菌酶,只是含量差异较大。
现在还没有看到可以从玉米中提取处溶菌酶的文献，最常用的提取原料还是鸡蛋清

❷ 如何从发酵液中分离一个蛋白酶如何测定其表达量和酶活

首先，去除菌体和残余的发酵液，一般高速离心就可以，5000r/min离心1min.取上清。此部要根据蛋白质的特点来做。若果蛋白酶是在细胞内那么要先破碎细胞，如果该酶的分子量过大，那么要减小离心转速。
其次，蛋白酶溶液中根据酶的性质，处理纯化或提取。常用方法是有机溶剂提取法，阴、阳离子交换柱层析发，液相色谱法等。这要根据蛋白质的性质，是否带电荷带什么电荷等。

关于酶活，应该每一步都要测定酶活，可用该酶分解蛋白质的特点，看一定的酶量在单位时间里分解蛋白的量，如果有特殊吸收峰的话可用紫外分光光度计测吸光度。

表达量，一般定量表达，常用方法是基因水平Realtime-PCR，蛋白水平，westen-blot法。也可参考其他相关文献的方法。

❸ 溶菌酶的制备

溶菌酶是采用生物工程技术进行克隆、提取而制取,它是一种天然酶，安全绿色的添加剂，无抗药性。
该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。
溶菌酶在等电点以下较广泛的pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品。蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5～10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，搅拌吸附6h，在0～5℃静置过夜。倾出上层蛋清，树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用0?15mol/L、pH=6?5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵，使最终含硫酸铵量为40%，有白色沉淀生成，冷处放置过夜。虹吸上层清液，沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋，在约5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右，中间换水2～3次。离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8?0～9?0，如有白色沉淀，即离心除去。然后用3mol/L盐酸调pH=5?0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3?5，在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，离心，沉淀用0℃丙酮洗涤，干燥，即得溶菌酶。

❹ 有谁知道鸡蛋提取溶菌酶的合作项目是真是假 多谢

一种用鸡蛋提取溶菌酶的新工艺技术
本发明公开了一种用鸡蛋提取溶菌酶的新工艺。该工艺是在现有工艺中的沉淀步骤中加入氧化锌参与溶菌酶的沉淀，这样就可解决多年来人们单纯使用硫酸铵沉淀溶菌时，沉淀速度慢及沉淀不完全的问题，同时可提高溶菌酶的活性，通过该工艺可使溶菌酶的沉淀速度提高6－12倍。
一种分离溶菌酶的方法
本发明分离溶菌酶的方法，以鸡蛋清为原料，加水适当稀释后，搅拌均匀，加酸调pH值至4．0－5．0，静置、过滤除去沉淀，将滤液升温至75－80℃，冷却至室温，静置不少于10小时，过滤得上清液，加碱调pH值为7．5－8．0，加乙醇至产生白色沉淀，过滤，冲洗，干燥即得产品；本方法工艺步骤简、生产周期短、溶菌酶得率高；所制得的溶菌酶可用作防腐用的食品添加剂。
一种生产基因工程重组人溶菌酶的方法
一种生产基因工程重组人溶菌酶的方法，是运用分子生物学技术和基因工程技术，将人溶菌酶基因克隆入酵母菌体内进行表达，然后通过提取、纯化制出人溶菌酶。本发明由于利用基因工程重组技术，发酵生产人溶菌酶，能够较大批量生产人溶菌酶，又避免了从组织中提取易受病源污染的问题，其产品具有稳定、纯净的特点。
溶菌酶亲和层析凝胶介质的制备方法
溶菌酶亲和层析介质的制备方法。将壳聚糖溶于醋酸或盐酸溶液中，再加入3－6倍体积的甲醇，过滤，于滤液中加入脂肪酸酐让其酰化成凝胶状，捣碎凝胶并用水将其洗至中性，用5－10％的NaOH或KOH溶液处理以脱去非N－位的脂肪酰化，再用水洗至中性，在酸性条件下用亚硝酸盐氧化除去凝胶内未酰化的游离氨基，而后用碱调至中性，用水洗去酸和盐类等残留物抽干即得所需的介质。
萝卜溶菌酶及其制备方法
本发明是以萝卜的根叶为原料，经匀浆浸提过滤，滤液经亲和吸附，装柱洗涤和亲和洗脱、收集酶液、透析、浓缩和冻干成酶制剂。酶活力高达4－7万U／mg。蛋白，酶的活性中心含有Trp、His、Glu和Asp残基，杀菌谱广，不仅对G↑〔＋〕菌有杀灭作用，对G↑〔－〕菌同样有杀灭作用。萝卜溶菌酶的成功提取，将为食品业、农作物的病虫害防治上和药医治疗上开拓了新途径。
从咸蛋清中提取溶菌酶方法
咸蛋黄被广泛应用于食品加工中，而咸蛋（鸭蛋或鸡蛋）取黄后留下的咸蛋清因含有极高浓度的食盐和异味限制了应用而常被废弃。本发明经普查表明咸蛋清中尚含有丰富的溶菌酶含量，可以作为生产溶菌酶的原料；进而采用脱氨酰化壳聚糖凝胶亲和吸附法，直接从咸蛋清中仅经一步便纯化得溶菌酶，所得纯化酶的比活力大于70000U／mg蛋白，回收率可达70％。
一种以溶菌酶为主要成分的外用凝胶剂及其制备方法
本发明是一种以溶菌酶为主要成分的外用凝胶剂及制备方法。该凝胶剂可以是水性凝胶，也可以是油性凝胶。根据需要配方中可以加入少量抗菌剂、抗病毒剂、抗滴虫剂、消毒防腐剂、润滑剂、清凉剂和芳香剂等辅助剂。适用于阴部感染的女性，更年期妇女及已婚妇女日常卫生保健，还可用于旅馆、居家的浴缸、浴盆等洁具的消毒，防止性病传播和预防交叉感染。本发明用于消炎杀菌、清洁阴道、消除瘙痒、清除异味，总有效率达81．58％。动物实验结果表明该产品无毒、无刺激性和致敏性，对使用者卫生、安全、无害。具有预防保健效果好、使用方便、作用维持时间长、副作用小，适用范围广等特点，是一种安全、卫生的新型阴部保健品。
溶菌酶在奶制品中的应用
本发明提供了溶菌酶的一种新的应用领域，即溶菌酶在奶制品中的应用技术，其作法是：在溶菌酶中加入保护剂，混合均匀后成溶菌酶集合物，按常规生产工艺制作奶制品，在生产进行到最后一步－分装工序之前，加入溶菌酶集合物，混匀后再分装出厂，成品奶制品中溶菌酶的活性在60℃－80℃时不失活，且含量可达到人乳的水平，采用本发明应用技术生产的奶制品，其营养成份丰富，具有很好的免疫功能，可取代现有的牛乳制品喂养婴幼儿，增强婴幼儿的免疫、抗病能力。
一种溶菌酶蛋白生产工艺及其应用
本发明涉及一种人溶菌酶蛋白生产工艺。目前市场上的溶菌酶蛋白都来源于其他种属动物机体，对人体而言是异种蛋白，有很强的抗原性，副作用大。本发明的生产的溶菌酶蛋白具有人源的天然氨基酸序列，解决了异源性溶菌酶用于人体内的抗原性问题。更重要的是，人体中的溶菌酶活性最高，本发明提供的蛋白生产工艺与传统工艺相比，分离纯化步骤简单易行，能得到较高的蛋白投入产出比，为人溶菌酶蛋白的工业化生产提供了一个高效的生产工艺。本发明还涉及上述方法及其产物的应用。
人核糖核酸酶U和人溶菌酶的两种进化酶
本发明涉及两种人源酶的分子进化酶。本发明的进化酶分别是以人核糖核酸酶U和人溶菌酶为原料，经过基因钓取，定向进化，表达筛选等步骤，最后制得。本品具有制备工艺简单、生产成本低、酶活力较高、稳定性好、应用价值大等优点，可独自或联合广泛地应用于抗菌药物、抗病毒药物、抗炎症药物、治疗龋齿药物、治疗爱滋病药物等医药工业各领域。
高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产及用途
本发明涉及一种高表达、高纯度、高活性基因重组人溶菌酶的生产方法及其新用途。提供了利用提取纯化的基因工程技术表达的人溶菌酶的溶菌活性，用于临床上细菌和真菌的感染，特别是耐药性细菌感染的治疗方法，以及革兰阴性菌感染治疗后内毒素引发的后遗症的治疗方法。提供了用于各种治疗用途的抗生素和人溶菌酶的药用组合物。
从鸡蛋及鸟类蛋提取溶菌酶的方法
本发明的名称是：从鸡蛋及鸟类蛋提取溶菌酶的方法。属于提取生物活性物质技术领域。本发明的目的在于：提供一种溶菌酶的提取方法，简单、易操作。本发明采用下述步骤：获取蛋清，加入氯化钠溶液并搅拌；加入盐酸溶液，水域加温至40℃；自然冷却至常温，加入乙酸溶液，水域加温至80℃；离心后过滤，在滤清夜中加入氯化钠搅拌后再次加温至60℃；加入丙酮，滤取白色絮状物，自然干燥后，碾粉并包装。
制备溶菌酶的方法
本发明提供一种制备溶菌酶的有效方法，其特征为使用硅藻土、高岭土、沸石或其混合物选择性地吸附蛋白中的溶菌酶，及随后以离子溶液进行洗提。上述硅藻土、高岭土及沸石对溶菌酶具有优异的选择性吸附能力，可提高溶菌酶的纯化倍数。
一种人溶菌酶系列化妆品及其制备方法
本发明涉及一种化妆品及其制备方法，特别是涉及一种人溶菌酶Humanlysozyme系列化妆品及其制备方法。人溶菌酶系列化妆品的主要成分是人溶菌酶Humanlysozyme（HLZ），其工艺过程如下：首先将人溶菌酶制备后备用，先将原料进行搅拌，均质乳化后冷却到45度，将制备好的人溶菌酶到入，经真空脱气搅拌至一定温度即可。积极效果在于原料易得，工艺简单，效果显著，并且易于推广应用。

家用长效除臭剂

本剂是以沸石、氯化镁、氧化镁和安息香酸配制成的家用长效除臭剂。一、特点：（1）除臭力强是。由于沸石和氯化镁、氧化镁相混合，沸石微孔结构中吸附的大气中的水分，能被氧化镁和氯化镁吸附，因而使沸石微孔结构的孔隙得到再生，使沸石的除臭能力牧师以充分发挥；再加氯化镁和氧化镁也都有除臭功能，故作为整体，除臭力强是。（2）有效除臭期长。沸石与氯化镁、氧化镁相配合，使氧化镁包覆于氯化镁的外部表面，从而使氯化镁的吸湿能力得到适当抑制，使氯化镁不致因为吸湿过多而潮解。因此，三者得以长期发挥作用，使有效除臭期大幅度延长。（3）除臭性能稳定。本剂中加有安息香酸，可以防止除臭剂因吸附臭气和水分而受到损害。可保持性能稳定、长期使用效果好。（4）原料价廉易得。二、用途：可用于厕所、居室、病房、鞋箱等除臭。编号35189

L—抗坏血酸—硫酸亚铁多效除臭剂

除臭剂种类虽多。但各有不足。例如，覆盖型除臭剂，只能将臭覆盖掩蔽，不能除去，因而往往要残留异臭；吸附型除臭剂，因吸附容量所限，届时吸附能力必然降低或丧失；酸碱中和型除臭剂，除臭范围只限于能够同酸碱相结合的物质；含枸橼酸和顺丁烯二酸类的除臭剂，不能除去硫醇类臭气等。本剂是以L-抗坏血酸和硫酸亚铁为有效成分配制而成，不存在上述缺点，是能够除去各种恶臭的多效除臭剂。一、特点：（1）原料易得，价格低廉，制造容易，使用方便。（2）本剂中含有的L-抗坏血酸，可使硫酸亚铁经常维持活性状态，使之与氨、胺臭中的胺形成络合物，与含硫恶臭中的硫生成（铁-硫）键，故对于氨类恶臭和含硫恶臭均能有效除去，除臭范围广的。（3）性能稳定，即使长期暴露于空气中或潮湿条件下，除臭效果也无变化。（4）原料都是公认的可食性物质，即使同食品接触，也可以确保安全。（5）可以制成各种形态。使用于各个领域。二、用途：用于厕所、垃圾箱、冷库、冰箱等的除臭，均有良好效果。特别是用于除去氨类、硫醇类的恶臭，效果尤佳。用本剂的液体除臭剂浸渍纸、布等，制成除臭片或除臭纸，直接包裹鱼、肉等食品，贮放于冰箱、冷库、防止其臭味向其他食品转移和串味，或用于去除冰箱、冷库的异味，也有良好效果。编号35191

人体消臭剂

为消除来自人体的恶臭--腋臭、汗臭、脚臭、头发臭、生理臭等，使用的消臭剂，大多是由作为抑汗剂使用的具有收敛作用的羟基氯化铝、杀菌剂六氯酚，或各种季铵化合物及掩蔽剂丁子香酚等，单独或经任意组配制成。然而，这些消臭剂的使用效果并不能完全令人满意。例如，抑汗剂，从生理学看，并不能完全抑制发汗；杀菌剂，因安全性问题，并不能以有效的足够的浓度添加；掩蔽剂同汗臭掺合在一起，又会产生恶臭等等。因而不能得到满意结果。本剂是以合成树脂和金属氧化物制成的复合粉体为消臭活性物质，再根据需要加入各种添加剂配制而成，用于消除人体恶臭，取得了比较满意的结果。一、特点：（1）消除人体恶臭，效果好。（2）使用安全，对人体无害。（3）可以制成各种剂型，例如气溶胶、粉剂、膏剂、棒状等剂型，使用方便。二、用途：适用于消除来自人体的腋臭、汗臭、脚臭、头发臭、生理臭等各种恶臭。编号35198

❺ 关于从蛋清中提取溶菌酶及其结晶观察

溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。

由于鸡蛋清中的溶菌酶为碱性，一般采用酸性树脂进行提取。

得到溶菌酶粗提物后，在不断搅拌下加入研细的硫酸铵固体是为了盐析出溶菌酶。

向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用叫做盐析。这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质。因此，盐析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。

❻ 科学家将煮熟的鸡蛋重新溶解是怎么实现的

高温下热处理蛋清后蛋清凝固就是一种蛋白质变性的过程。高温条件下蛋白质分子中的氢键断裂，但其一级结构没有发生变化，蛋白的空间结构遭到破坏后，原来在蛋白内部的疏水基团暴露出来，发生疏水互作，蛋白的溶解度降低发生沉淀。
而8M的尿素为什么能重新溶解变性后的蛋清呢？
1、尿素在4M-8M时都能断裂氢键，是蛋白质发生不同程度的变性，因此尿素本身也是一种变性剂。但是高浓度尿素可以使蛋白完全变性，使蛋白以无规则卷曲的状态存在；
2、尿素具有形成氢键的能力，尿素在8M浓度下时，可以破坏水的氢键，降低疏水相互作用，使蛋白质分子内部暴露的疏水基团伸展和溶解性增加。
这一技术已经不新鲜了，实验室中常用的除了尿素还有盐酸胍，它们都是变性蛋白较好的溶解剂。在体外表达蛋白时，大肠杆菌由于缺少蛋白折叠辅助因子或者蛋白表达率过高来不及折叠，此时很容易形成非正常折叠的蛋白造成包涵体的出现。常见的纯化方法是将包涵体分离出来用尿素重新溶解包涵体蛋白后再复性蛋白质。

❼ 鸡蛋能提取溶菌酶吗

溶菌酶 溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。 该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。 溶菌酶的应用过程中的优点 （1）溶菌酶是很稳定的蛋白质，有较强的抗热性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐热的酶； （2）溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复； （3）溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定； （4）溶菌酶适宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐； （5）溶菌酶生产成本较低； （6）溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于G+ 菌，对部分G 菌也有抑制效果； （7）溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。 溶菌酶的应用 1 医学上应用 可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。口服和肌注均有效。口服，3～5片/次(肠溶片含10mg)，3次/日。口含，1片/次(口含片含20mg)，4～6次/日。外用：以1%～2%溶液滴注、涂擦或直接喷粉。肌注，50mg～100mg/次，1～2次/日。滴眼：用2%溶液。 副作用 偶有较轻的过敏反应。氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药. 2食品保藏应用 可作为防腐剂,它的主要功用是水解细菌细胞壁，在细胞内，则对吞噬后的病原菌起破坏作用.该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作用。对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用，其最有效浓度为0.05%。与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。参考资料： http://ke..com/view/39726.htm

❽ 在溶菌酶的粗提取实验中，为什么将蛋清缓冲液PH调到4.7后又调到8.0急急急急！

因为卵清蛋白的等电点是4.7，为了提纯溶菌酶，要将卵清蛋白沉淀，所以要把PH调到4.7，至于8.0，这是溶菌酶的最适PH值。

提取溶菌酶的方法：
树脂预处理：干树脂清水浸泡，使其充分膨胀并除去细小颗粒和较大杂质； 1 mol/L 的HCl浸泡2 h，去离子水洗3次至至近中性；抽滤收集树脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h，去离子水洗3次至近中性；抽滤收集树脂,加0.15 mol/L、pH 值为6．5的磷酸缓冲液平衡过夜待用。
蛋清制备：将3个新鲜鸡蛋洗净干燥，小端敲一个小洞，大端打一个小孔进气，分离得鸡蛋清，用1 mol/L HCl调节PH到7。过滤前称量烧杯重48.7g，缓慢搅拌用灭菌的两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，蛋清与烧杯总重207.5g，蛋清净重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液调pH 值至7.0，量蛋清体积为100 ml。在调节PH时蛋清中出现少量白色沉淀，可能为部分蛋白由于局部过酸而变性。
吸附：蛋清在不断搅拌下加入抽滤好的724树脂25g（相当蛋清四分之一体积的树脂），冰水浴中磁力搅拌器缓慢搅拌（使树脂全部悬浮在鸡蛋清中，搅拌不能起泡）吸附2.5 h，4℃静置1.5h。然后3000r/min离心15min分层，收集树脂，回收蛋清（留样A）。
去除杂蛋白：收集树脂用去离子水振荡水洗直至洗液澄清（至无白沫为止），吸管轻吸去洗液，以去除杂蛋白。（每洗1次，离心1次，总共3次）冰浴中用等体积的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸缓冲液搅拌洗涤15min，抽滤，重复洗三次，注意防止树脂流失。最后一次抽滤滤除树脂水分至干燥。
洗脱溶菌酶：树脂中加入35ml（等体积）的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，抽滤,使溶菌酶从树脂上洗脱下来，重复两次，合并收集洗脱液（留样），洗脱液过滤后，准确量取体积100ml。（留样B）
盐析:每83mL洗脱液加32g磨细的固体（NH4）2SO4，本实验中总量为38.55g。缓慢加入（NH4）2SO4搅拌待完全溶解后保鲜膜封口，置于4℃冰箱盐析过夜。
透析:待白色沉淀析出，3000r/min离心15 min，收集沉淀，用去离子水将沉淀洗下并全部溶解（4.5ml去离子水），装于透析袋中，于去离子水中透析（冰浴），期间2次更换去离子水，直至用BaCl2检测透析完全。透析装置中加入磁子，于磁力搅拌器中搅拌加快透析速度。
去杂质蛋白：取出透析袋中的透析液，用0.1mol/L HCl调整pH4.6，产生少量白色沉淀（留样D），可能为杂蛋白。3000r/min离心10min，收集上清液（留样C 20ul）。
浓缩：用PEG-20000浓缩上清液至1.5ml（留样E，20ul，加loading buffer,出现黄色（可能为浓缩时透析袋中渗入了PEG-20000）。[5][6]

❾ 最耐热的蛋白质是什么

科技名词定义

中文名称：

溶菌酶

英文名称：

lysozyme

其他名称：

胞壁酸酶(muramidase)

定义：

编号：EC 3.2.1.17。存在于卵清、唾液等生物分泌液中，催化细菌细胞壁肽聚糖N-乙酰氨基葡糖与N-乙酰胞壁酸之间的1，4-β-糖苷键水解的酶。

应用学科：

生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）

溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

中文名称：溶菌酶

中文同义词：脆壁质酶；鸡蛋白；胞壁质酶(N-乙酰胞壁质聚糖水解酶);溶菌酶(鸡蛋清)

英文名称：Lysozyme,简称LZM

英文同义词：REDUCED LYSOZYME,WATER SOLUBLE;MUCOPEPTIDE-GLYCOHYDROLASE;MUCOPEPTIDE GLYCOLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE III;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE VI: CHLORIDE;MURAMIDASE;MURAMIDASE GRADE III[1]

CAS号：12650-88-3

EINECS号： 235-747-3[2]

分子式：无

分子量：14000左右

EINECS号：235-747-3

相关类别：发酵剂；Enzymes;酶；生化试剂；生物化学品。

分子结构图：

性质

储存条件：2-8°C

form：powder

color：white

危险品标志B

安全说明23-24/25-22

WGK Germany3

RTECS号 OL5989850

F3-10

白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适pH值6.5。

稳定性：酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃， pH值为3条件下，15min后活力保持87%。

抑制剂：有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性剂(十二烷基硫酸钠、醇类和碳链不少于12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm处的吸光系数为26.4。通过水解细菌细胞壁的肽聚糖来溶菌。

酶反应：Micrococcus luteus或Micrococcus lysodeikticus菌悬浮液═溶菌并澄清。

用途：用于生化研究，临床上用于急慢性咽喉炎、扁平苔癣、扁平疣等疾病的治疗。

编辑本段生产

以蛋清为原料，在pH6.5条件下用弱酸性阳离子交换树脂732吸附后，再用硫酸铵洗脱，经透析后冷冻干燥得产品。

编辑本段制备

溶菌酶是采用生物工程技术进行克隆、提取而制取,它是一种天然酶，安全绿色的添加剂，无抗药性。

该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。

溶菌酶在等电点以下较广泛的pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品。蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5～10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，搅拌吸附6h，在0～5℃静置过夜。倾出上层蛋清，树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用0?15mol/L、pH=6?5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵，使最终含硫酸铵量为40%，有白色沉淀生成，冷处放置过夜。虹吸上层清液，沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋，在约5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右，中间换水2～3次。离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8?0～9?0，如有白色沉淀，即离心除去。然后用3mol/L盐酸调pH=5?0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3?5，在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，离心，沉淀用0℃丙酮洗涤，干燥，即得溶菌酶。

编辑本段优点

1．溶菌酶是很稳定的蛋白质，有较强的抗热性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐热的酶；

2．溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复；

3．溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定；

4．溶菌酶适宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐；

5．溶菌酶生产成本较低；

6．溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于G+ 菌，对部分G­ 菌也有抑制效果；

7．溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。

编辑本段应用

医学应用

可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。口服和肌注均有效。口服，3～5片/次(肠溶片含10mg)，3次/日。口含，1片/次(口含片含20mg)，4～6次/日。外用：以1%～2%溶液滴注、涂擦或直接喷粉。肌注，50mg～100mg/次，1～2次/日。滴眼：用2%溶液。

副作用

偶有较轻的过敏反应。氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药.

食品应用

可作为防腐剂，它的主要功用是水解细菌细胞壁，在细胞内，则对吞噬后的病原菌起破坏作用.该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作用。对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用，其最有效浓度为0.05%。与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。

应用领域

1． 溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作天然的食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐；还可以添入乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制肠道中腐败微生物的生存，同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。

2． 溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素，具有多种药理作用，它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效，目前医用溶菌酶其适应症为出血、血尿、血痰和鼻炎等。

3． 溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，以此酶处理G+细菌得到原生质体，因此，溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。

编辑本段机理

溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的β-1.4糖苷键。肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成，NAM与NAG通过β-1.4糖苷键相连，肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架，上述结构中的任何化学键断裂，皆能导致细菌细胞壁的损伤。对于革兰氏阳性菌（G+），如藤黄微球菌、枯草杆菌或溶壁微球菌等，与革兰氏阴性菌(G-)，如大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌等，其细胞壁中肽聚糖含量不同，G+细菌细胞壁几乎全部由肽聚糖组成，而G-细菌只有内壁层为肽聚糖，因此，溶菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。

编辑本段使用

鸡蛋清溶菌酶作为溶菌酶类的典型代表，是一种稳定的蛋白质，其最适pH为4-6.5，最适温度为35℃，酶的最适添加量必须按照具体生产情况而定。

编辑本段储存

建议在阴凉干燥的环境下避光保存，储存温度：零度以下。

贮藏过久或贮藏条件不利，会使酶活不同程度的降低；如温度湿度过高，则需要在使用时适当的增加使用量。

编辑本段举例

尿液中含量

尿溶菌酶原理

溶菌酶来自单核细胞、中性粒细胞，是一种能溶解某些细菌的酶类。可酵解革兰阳性球菌壁上的乙酰氨基多糖成分，使细胞壁破裂。其分子量为14000万～15000，可从肾小球基底膜滤出，90%以上可被肾小管重吸收，所以尿液中很少或无溶菌酶。用一种细菌悬液作为基质，加入待测标本后保温一定时间，如标本中含溶菌酶，则细菌被溶解，细菌悬液浊度下降或变清，可用光电比浊法测其浊度变化，或用平皿法测定其溶菌圈的大小。

尿溶菌酶参考值

尿液中浓度为0～2mg/L。

临床意义

①肾小管疾病：如炎症、中毒时，因肾小管损害，重吸收减少，尿溶菌酶升高；

②判断预后：急性肾小管坏死时，尿溶菌酶升高，若逐渐升高并持续不下降，小管功能恢复较差。慢性肾炎、慢性肾衰竭时，尿溶菌酶也升高；

③急性单核细胞白血病时，血清溶菌酶含量增加，超过肾小管重吸收的能力，尿内溶菌酶可升高。[3]

❿ 溶菌酶的生产

以蛋清为原料，在pH6.5条件下用弱酸性阳离子交换树脂732吸附后，再用硫酸铵洗脱，经透析后冷冻干燥得产品。