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超滤管离心的时候为什么炸裂

发布时间:2022-06-15 13:17:35

『壹』 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

『贰』 离心管和离心超滤管

离心管就来是一个简单的可自以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。
离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。

『叁』 超滤离心管浓缩蛋白会损失吗

会有少量损失。取决于缓冲液,滤网的网眼大小和蛋白质的分子量

『肆』 康宁50ml离心管炸裂,是为什么,我的离心速度是20000g,还没有达到最大的30000g。

1、康宁的50ml管子离不到20,000g,一般标准能到8,000-10,000,最高能到12,000就不错了,但不能长时间离心,超过30min肯定会裂。
2、转头和离心管是否匹配?你用的离心机转头是什么底的,如果是圆底的转头,超过10,000g,基本上几分钟离心管底就掉了,因为管底没有有效支撑,要不就加个holder,专门放离尖底离心管的。但也几乎不可能耐受20,000g。
3、20,000g离50ml管的话,建议用eppendorf的白盖离心管(目前只有尖底的),能达到要求,且相对较便宜(大概2块钱一个),或者用beckman的圆底离心管,相对较贵。转速再高的话,长时间离心还是建议采用beckman的超速离心管配合超速离心机使用,注意安全。

『伍』 为什么我的超滤离心管不浓缩

茶叶--抽提--过滤--澄清--浓缩(茶浓缩汁)-调配--加入抗氧化剂等--灭菌灌装成纯茶饮料。但是市场上现在绝大多数都不是纯茶饮料,纯茶饮料是很难喝的,大多数是调味型茶饮料,所以在无菌灌装之前要加甜味剂或者柠檬酸食用香精,果汁,乳制品等。\r\n 茶叶注意不能用变质的绿茶,用粉碎机粉碎,准备浸提。\r\n 浸提:以水作为溶剂浸提,水对茶叶中的多酚类,生物碱,苷,水溶性有机酸等都有很好的溶解性能。影响浸提效果的因素是 1水质的纯度:水中的钙镁铁氯,水质的硬度,影响浸提。2水温越高,时间越长,原料颗粒越小(当然也不能无限制的小),茶水比列越大,萃取率越高,茶汤的苦涩味也越重,成本也高,香味新鲜度都受影响,建议萃取水温在80-90度,这样不至于将苦涩味较重的咖啡碱萃取过多,同时也将茶多酚萃取出来。茶汤在萃取后,立即降温冷却。\r\n 茶叶在萃取冷却后会产生白色乳状沉淀,是由茶叶中的茶多酚及其氧化产物和咖啡碱络和而成,形成茶乳,蛋白质果胶,淀粉等大分子物质也容易出现沉淀,而水中离子又是促进浑浊和沉淀的首要原因。\r\n 目前采用的去除沉淀的方法是:离心法,超滤微滤和RO膜浓缩。或者加入助滤剂,添加钙离子然后将茶汤过滤,或者加入离子螯合剂,加入食品添加剂,如环状糊精,天然胶来抑制茶乳的产生,也可以用单宁酶来破坏茶乳。\r\n 加入添加剂;\r\n 茶饮料的灭菌:用UHT超高温瞬时灭菌,灭菌时间短,有利于保持茶饮料的色香味。

『陆』 求助:第一次使用超滤离心管应该怎么处理

可能不同厂家的产品保存运输条件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。版权
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。

降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。

『柒』 超滤离心管可以灭菌吗

1、可以用70%的酒精消毒
2、如果是高温高压灭菌,要注意灭完菌后,管里面的超滤膜是处于湿润的状态,所以需要立即使用,因为膜湿润后就不能干

『捌』 离心超滤管 millipore 滤膜上好像有孔,离心后发现有大分子蛋白过来,怎么回事该怎么办

离心超滤管是一次性的,原则上不能反复用的,所以滤膜上有孔就要更换了

『玖』 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

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