⑴ DEAE纤维素阴离子交换柱,看到很多地方讲到流穿模式,什么叫做流穿模式呢
流穿模式指的是样品没挂柱,都留下来了。
⑵ 急!急!如何装阴离子交换柱,使用时候出现气泡怎么除去谢谢
可以用适量的有机溶剂润洗一下层析柱,柱子体积较小的话就用玻璃棒搅匀排除一下气泡。
不管是干柱和湿柱,都要加层析液,不能要求一开始就没有气泡的。要用洗脱剂不停的洗脱,就是用配置好的试剂一边一边对柱子进行洗脱,这样不但可以消除气泡,还可以使硅胶充分沉降,让层析效果更好。等柱子没有气泡后在上样用洗脱液进行层析。
若柱中留有气泡或各部分松紧不匀(更不能有断层)时,会影响渗透速度和显色的均匀。去除就是用玻璃棒搅拌,赶走气泡。
(2)deae阴离子交换柱扩展阅读:
水溶液中一些阳离子进入了反离子层,而原来的反离子层中的阳离子进入了水溶液。这种在正常浓度下,反离子层与水溶液之间的各向同性离子交换称为离子交换作用。
离子交换主要发生在扩散层与正常水溶液之间。由于粘土颗粒表面通常带有负电荷,离子交换主要是阳离子交换,所以又称阳离子交换。离子交换严格遵循等价定律,即进入反离子层的阳离子等价于从反离子层排开的阳离子等价。
⑶ 如果蛋白质等电点是6.2,用deae柱子,应选用多大ph值上柱子
如果蛋白质等抄电点是6.2,用DEAE柱子袭,应选用8.0左右的pH值上柱子
DEAE是阴离子交换柱,当环境pH高于蛋白质等电点的时候,蛋白质可以结合上阴离子柱。考虑到要稳定的结合一般选择的环境pH要高于等电点值1.5左右。同时考虑维持蛋白质的稳定,环境pH一般选择偏中性的值。
⑷ DEAE CL-6B 阴离子交换层析柱分离 β葡萄糖苷酶,酶一直洗脱不下来怎么办.提高ph有用吗
可以考虑上升洗脱液离子强度,但保证蛋白质不变性
另外让目标蛋白与介质结合的力度小一些; 改变环境的酸碱度,更换介质,更换缓冲液等
⑸ 阴离子交换柱能去除水中的什么
作用是用阴树脂中的氢氧根交换掉水中的其他阴离子。混合物通过阴离子交换柱,阴离子可以被吸附从而与其他物质分开,一般来说,阴离子交换柱的吸附剂应该呈阳性。
⑹ 用过的sephadex G-25层析柱和DEAE纤维素离子交换柱再生的方法为什么不一样
飞秒检测发现sephadex G-25层析柱填料是葡聚糖交联的凝胶柱,G-X, X:(1)交联度。X越小,交联度越大,网孔越小,适用于分离低分子量产品,反之亦然。(2)吸水量。为凝胶得水值的10倍.例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克.凝胶柱使用一次后,必须反冲疏松一次,平衡后再使用。若使用数次,就需要再生处理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡,然后用蒸馏水洗至中性备用。若实验完毕,将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干,再用95%乙醇洗两次,在60℃烘箱中烘干,回收保存。
DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素,是阴离子交换剂。基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂;而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生,也可用乙醇洗涤,其顺序为:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定(洗必泰),阳离子交换剂可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些产品建议用0.02%叠氮钠。
两种填料的抗酸碱性和抗腐蚀性能不同。