蛋白溶液超滤后有沉淀

A. 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差，也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了，超滤时保持低温，体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高，选择更合适的缓冲液，添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

B. 如何将蛋白质溶液中的水去掉，从而将蛋白质的浓度提高急~~~

1.可以加入丙酮等有机溶剂，使蛋白析出，然后离心收集沉淀，沉淀用去离子水再溶解，去回离子水答量可根据实际需要添加，从而改变蛋白浓度。但该法可能有损蛋白活性。
2.使用透析袋，外侧加聚乙二醇干粉，使水慢慢渗出，该法可维持蛋白活性，但时间较长。
3.使用旋转蒸发，但针对温度不敏感的蛋白
4.冻干机冻干，但有些极端。

C. 超滤机过滤后，水中为什么还是有沉淀物

目前市场上抄的家用净水器主要分为纯水袭类型净水机和超滤类净水机两大类型。而纯水机由于过滤精度极高（这种机型需要用电），
在过滤掉水中的有害物质以及微量元素都过滤掉了。而超滤类机型在过滤有害物质的同时，保留了水中的钙、镁离子以及微量元素。而水中的钙、镁离子随着温度的不断升高，就会被氧化还原，形成白色的结晶物，这是一种氧化还原现象，而并非水中杂质。（如果用矿泉水烧开水一样会有这种现象发生）。所以楼主大可放心使用。个人建议，一般不泡茶时，最好不要把水烧开，加温到人体体温接近就可以了。（这样水中的钙、镁离子就不会被氧化还原）因为烧开始是中国传统的净水模式，主要目的是为了杀菌，而通过超滤型净水机能把水中细菌过滤掉，是可以直接饮用的。

D. 蛋白质的溶解特性与沉淀原理

蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度，使蛋白质内凝聚而从溶液中容析出。
蛋白质的沉淀（protein
precipitation），沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。

E. 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢

从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度

F. 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办

1、选择合抄适的超滤管，主要考虑袭MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。

注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开
离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。

G. 纯化后的蛋白在含有高浓度nacl的情况下浓缩容易沉淀吗

理由相信，浓度越高，对保存蛋白质越有利。加入 PEG 和更换 缓冲液种类是一种值得试验的方法，但结果如何还在两可之间，没试过就不会知道。

镍柱下来以后，溶液中混有相当多咪唑和议定含量的Ni，都有可能引起蛋白质不稳定变性沉淀。

我在纯化一种蛋白质时，也遇到过相同的情况，虽然蛋白质不同，但是也许能有帮助。

镍柱后，用含 EDTA 的缓冲液透析，除去 Ni ，再过 DEAE 离子交换柱，之后透析再浓缩，分装小管，-80度保存。一次使用一支。
理论上说蛋白质应在高浓度情况下保存，但当缓冲溶液中含有大量盐而且目的蛋白中含有大量输水氨基酸的情况下，高浓度就不利于保存。
在这种情况下，如果你不想太多的稀释蛋白，可以选择适当脱盐，如透析、凝胶过滤、超滤等，但应保持缓冲液具有一定的离子强度（500mM NaCl这个浓度太高，可以降到100），如果还不行的话，可以添加甘油至终浓度5%左右。
Ni纯化最好不要用Tris，可能会影响Ni的结合。

H. 我纯化的蛋白总是有沉淀,该怎么办 已经改过盐浓度,沉淀还是在啊

刚纯化完就有沉淀？那上样的时候应该也有沉淀吧？
复性时出现沉淀是比较难解决，温度不要变化太大、速率降低点、浓度低点、加甘油保护剂等。

I. 为什么蛋白质提取过程须在20摄氏度以下进行

用高浓度的盐溶液变性后的蛋白质一般用透析超滤处理除去盐离子后能够复性，也可以用分子筛层析除去盐，顺便根据分子量进行分离。
从头做分离注意几个问题：
1.查文献或者数据库，确定蛋白分子量大小、等电点等性质。
2.确定该蛋白质在动物体内的各个器官组织中的分布情况，在前处理时期一定要选用富含该蛋白质的动物的相应的器官和组织用作粗分离的原料。
3.确定该蛋白质是不是膜蛋白质，是的话在粉碎组织后的抽提阶段要加入表面活性剂把膜蛋白质从膜上拉下来；不是膜蛋白，一般不必要用表面活性剂，至少不做电泳的话一般不要用表面活性剂增溶。
4.细分离阶段根据蛋白质的特征，安排不同的操作步骤，一般在细分离阶段之前可先使用沉淀浓缩蛋白质，比如盐析、有机试剂沉淀、聚乙二醇沉淀等，获得蛋白质沉淀后要重新溶解，并且用过滤、超滤和透析除去沉淀剂。一般不要用强变性剂和加热引起蛋白质沉淀，以免变性无法逆转。离子交换层析或者疏水层析，然后用凝胶层析，如果用能够获得该种蛋白质的标准品的话，可以制备出抗体，则可用亲和层析，或者能够知道该蛋白的专一性配体的话（可以从数据库获得资料）也可以使用亲和层析，否则亲和层析这步就做不了，只能在检验该蛋白质产品纯度不够的话再做一轮或多轮离子交换层析或者疏水层析，然后用凝胶层析。当然经过了各种层析方法，纯化出来的目地蛋白质的浓度要比上样前的浓度更低不少，不过浓缩到也不难，用超滤即可。
5.检测纯度，可以用溶解法或者MS测定分子量或电泳。理论上电泳方法也可以用于分离提纯，但是因为从凝胶中回收蛋白质的话还要在纯化目的蛋白质，所以我不主张使用电泳方法也可以用于分离提纯，尤其是若用SDS-PAGE要在上样前加热变性蛋白质，能够复性很难说。
6.对于分离提纯的蛋白质的所有操作一般适宜在零度到四度范围内，可以在有空调的房间进行并将空调温度调低，必要的话，须在有关设备周围固着冰块。

J. 请问使蛋白质沉淀的方法有几种

使蛋白质沉淀的方法有3种。

1、盐析法

在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。

2、重金属盐沉淀蛋白质

蛋白质可以与重金属离子如汞、铅、铜、银等结合成盐沉淀。重金属沉淀的蛋白质常是变性的，但若在低温条件下，并控制重金属离子浓度，也可用于分离制备不变性的蛋白质。如临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性质，抢救误服重金属盐中毒的病人，给病人口服大量蛋白质，然后用催吐剂将结合的重金属盐呕吐出来解毒。

3、生物碱试剂以及某些酸类沉淀蛋白质

蛋白质又可与生物碱试剂（如苦味酸、钨酸、鞣酸）以及某些酸（如三氯醋酸、过氯酸、硝酸）结合成不溶性的盐沉淀。如临床血液化学分析时常利用此原理除去血液中的蛋白质，此类沉淀反应也可用于检验尿中蛋白质。

(10)蛋白溶液超滤后有沉淀扩展阅读：

蛋白质的沉淀可分为两类：

1、可逆的沉淀反应：蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

2、不可逆的沉淀反应：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。如加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应。