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等体积浓缩超滤

发布时间:2021-12-14 04:48:41

❶ 纯化的单克隆抗体,超滤浓缩的时候会把磷酸盐离心掉导致抗体的缓冲环境变成水吗

不会的。。。
超滤浓缩对于缓冲液成分不会有任何改变的,因为PBS中的磷酸根离子回也好答,氯离子也好,钠离子也好都是很小的离子,可以在溶液中自由扩散,不会因为超滤离心就被甩到下层滤液中去。
你可以做个简单的实验,取一定体积PBS溶液测一下pH值和电导率值,之后用超滤管去离心。取出上层未被滤完的溶液再测一下pH值和电导率值,会发现pH值和电导率值和之前测的是一样的。即可证明未被滤完的溶液还是PBS溶液,而不是水。

反渗透和超滤有什么区别

1.UF(超滤)

UF能截留0.002~0.1微米之间的颗粒和杂质,UF膜允许小分子物质和溶解性固体(无机盐)等通过,但将有效阻挡住胶体、蛋白质、微生物和大分子有机物,用于表征UF膜的切割分子量一般介于1,000~100,000之间,RO膜两侧的运行压力一般为0.2~7bar。

2.RO(反渗透)

RO是最精密的膜法液体分离技术,它能阻挡所有溶解性盐及分子量大于100的有机物,但允许水分子透过,醋酸纤维素RO膜脱盐率一般可大于95%,RO复合膜脱盐率一般大于98%。它们广泛用于海水及苦成水淡化,锅炉给水、工业纯水及电子级超纯水制备,饮用纯净水生产,废水处理及特种分离等过程,在离子交换前使用RO可大幅度地降低操作费用和废水排放量。RO膜的运行压力,当进水为苦咸水时一般大于5bar,当进水为海水时,一般低于84bar。


一、处理细菌效果不同

由于反渗透膜的孔径更为狭小,能够对水中的杂质和细菌数量得到有效的控制。反渗透膜处理过的水菌落总数比超滤膜净化后的菌落总数少许多,因此反渗透膜处理水中细菌的能力要比超滤膜性能更为优越。

二、净化后的水使用方向不同

常情况下反渗透膜净化后的水分为两种,一种纯水可供饮用,一种浓水可供洗涤使用。使用超滤净水器净化的水通常只能做洗涤用水,其水质不符合饮用水的标准。

三、化学污染物处理效果不同

反渗透膜的孔隙仅超滤膜的百分之一,因此能够有效地去除水中的重金属和农药的化学污染物,不仅能够去除其中的颗粒污染物及较大的杂质,在化学处理方面反渗透膜效果比超滤膜更为突出。


❸ 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢

从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度

❹ 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

❺ 【求助】超滤能否脱盐和浓缩一步完成啊

昨天有个millipore的技术人员就是这样说的~HarveyWang(站内联系TA)本人主要是从发酵液中提取酶,文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥, 这要看你需要做多大的体积了。:) (1)硫酸铵沉淀法:我的观点是,如果你1000 mL的发酵液的话,硫酸铵沉淀可以用,但是这浪费多少硫酸铵啊?!做学术研究可以,如果你的课题是计划做提取酶的工艺和中试的话,这种硫酸铵沉淀并不有太大的实用性。 (2)超滤步骤的选用要看你的酶溶液有多大的体积。 如果发酵液的酶的量并不是很浓的话,例如50 mL 10 mg/L的酶量,用这种超滤膜会损失掉大部分你的目地酶,都粘到膜上去了,很难洗下来(稀的NaOH可以)。不能轻信某品牌销售说的话,用用就知道了。如果你的浓缩液体积比较大,例如100-500 mL,酶的浓度也很高,这是可以用超滤膜的。 (3)对于小体积的脱盐透析,透析袋很好用的。这里是指10 mL-100 mL。从操作方便性上看,这个在小型试验中我最喜欢用。好简单啊。。。。 自己顶一个,解答的详细的有重奖!(金币可以再加) (1)发酵液的酶蛋白浓度大约是多少,纯度是多少?发个SDS-PAGE看看,注明上样量。 (2)硫酸铵沉淀后和透析后可上离子交换,这可以浓缩10-1000倍,还可以有纯化效果,然后再冷冻浓缩啊。HarveyWang(站内联系TA)哈哈哈哈,回帖就有金币拿:Ddaidai0124(站内联系TA)本人现在只是小规模的提取酶,马上要上发酵罐,需要大规模的提取酶液,不是做酶学性质,所以酶的纯度要求不高,和工业用酶的纯度差不多就可以了!希望大家推荐个适合工业化提取酶液的工艺,主要考虑成本问题.请版主帮忙在增加悬赏金币20个lvgl158(站内联系TA)起码知道 它的分子量 才能知道是否可以用同一个膜 如果小于一万可能就有点难度 可以先用少量的硫酸铵澄清 离心后 进行超滤 在超滤前 必须的保证液体 清澈hezhao999(站内联系TA)体积的在200ml以上用超滤仪,200ml以下可以用超滤离心管,如果不知分子量选用1000的膜完全可以了,如果知道分子量,则选择酶分子量1/5的超滤膜。zhaocy8903(站内联系TA)多大规模的发酵 多大规模的发酵

❻ 溶液中含有3%的金属离子,能否通过反渗透将溶液浓缩到5%以上的金属离子的溶液,再者前段是否需要用超滤

反渗透又称逆渗透,一种以压力差为推动力,从溶液中分离出溶剂的膜分离操作。对膜一侧的回料液施加答压力,当压力超过它的渗透压时,溶剂会逆着自然渗透的方向作反向渗透。从而在膜的低压侧得到透过的溶剂,即渗透液;高压侧得到浓缩的溶液,即浓缩液。若用反渗透处理海水,在膜的低压侧得到淡水,在高压侧得到卤水。
因此,反渗透就是阻碍溶液由高浓度向低浓度扩散,可起到浓缩的作用
反渗透通常使用非对称膜和复合膜。反渗透所用的设备,主要是中空纤维式或卷式的膜分离设备
反渗透过程所用的半透膜,只能透过水分子而不能透过盐分子。
超滤是一种加压膜分离技术,即在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜,超滤膜过滤示意图而使大分子溶质不能透过,留在膜的一边,从而使大分子物质得到了部分的纯化。超滤的原理与反渗透是不同的

❼ 超滤的工作原理是什么

超滤的工作抄原理

超滤属于袭一种分离技术,将压力专为动力膜分离的过程,过滤的精度在0.01-0.005um的范围之内。它可高效的去除水中的细菌、病毒、悬浮物、胶体等颗粒状物质,已经广泛应用于物质的分离、浓缩、提纯等,效果非常好。同时在PH值为2-11的条件下能够连续的使用。

超滤膜一种孔径规格一致,额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜。采用超滤膜以压力差为推动动力的膜过滤方法为超滤膜过滤。超滤膜大多由醋酯纤维或与其性能类似的高分子材料制得。最适于处理溶液中溶质的分离和增浓,也常用于其他分离技术难以完成的胶状悬浮液的分离,其应用领域在不断扩大。

❽ 膜过滤是按大小筛选分子,为什么超滤是说分子量筛选,而微滤则是体积筛选

你这个问题算是找对人了。
1.“膜过滤是按大小筛选分子”这句话说的是不完全对版的。因为膜按照分离权物质的大小来分为微滤(0.1um以上,通常指0.2um以上)、超滤(0.1um一下)、纳滤和反渗透(离子级别,通常是10nm以下)。
2.“超滤”通常是用于分离和浓缩蛋白质\胶体。微滤通常用于细菌(0.2um膜)或者过滤微小颗粒(0.45um)。细菌和微小颗粒不是分子级别的,蛋白质的可以说是分子级别的。
换句话说吧,其实上面所说的超滤和微滤的孔径是用物理孔径来分的,这对于微滤来说是没有问题的,但是对于超滤来说,但说孔径是多少um是不合适的。因为在电镜下分析超滤的孔径是很困难的(即使是能观察到膜表面孔径也不能证明这个孔是通透的),现在在学术界通常用蛋白质\葡聚糖\聚乙二醇等来评价膜的过滤效果。这些评价物质是用分子量来标定的,比如对于牛血清蛋白(64000)的截留率为90%,那么就说这个超滤膜是6.4w。但是这个和孔径的具体关系并没有完全建立起来,这个问题比较复杂,就不细说了。
微滤就是小孔截住大颗粒物质,孔大小就用直径或者半径来表示,这个就没有必要多说了。

❾ 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

❿ 什么是超滤,超滤是如何工作的

超滤是一种膜分离技术,(UItrafil-tration 简称UF)。能够将溶液净化,分离或者浓缩。超滤是介于微专滤与纳滤之间,属且三者之间无明显的分界线。一般来说,超滤膜的孔径在0.05 um–1 nm之间,操作压力为0.1–0.5 Mpa。主要用于截留去除水中的悬浮物、胶体、微粒、细菌和病毒等大分子物质。超滤膜根据膜材料,可分为有机膜和无机膜。按膜的外型,又可分为:平板式、管式、毛细管式、中空纤维和多孔式。

超滤是如何工作的?

超滤膜的工作以筛分机理为主,以工作压力和膜的孔径大小来进行水的净化处理。以中空纤维为例,以进水方式可分为外压式:原水从膜丝外进入,净水从膜丝内制取。反之则为内压式。内压式的工作压力较外压式要低。超滤膜在饮用水深度处理,工业用超纯水和溶液浓缩分离等许多领域中,得到了广泛应用。

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