❶ 为什么DNA在纯水中易变性
DNA在纯水中易变性原因：每一个核苷酸的磷酸基上都带有一个负电荷回。如果这些负电荷没有被中答和，双链之间的这种强有力的静电排斥作用将驱使两条链分开(在同一条链内虽然也存在着这种静电斥力，但由于链内的共价键，这种静电斥力并不重要)。但是当有盐类加入时，这些带负电荷的磷酸基团可以被正离子(如Na+)所中和，也就是正离子围绕在磷酸基周围形成了"离子云"，有效地屏蔽了磷酸基之间的静电斥力。这就是Debye-Hvckel 离子屏蔽理论。
❷ DNA制品为什么应保存在浓度较高的溶液或缓冲溶液中
为了
不使dna降解，溶液中必须含有edta螯合剂
以便螯合dna水解酶的辅酶，此外，dna在酸性条件下易降解，因此
需要给予碱性环境。随意buffer
都是含有edta的碱性溶液。
至于为什么用溶液而不用干粉，是为了方便使用而已（免去了溶解过程，也避免了非专业溶解造成的dna水解）
❸ 艾弗里转化实验为什么使用DNA酶
DNA酶可以水解DNA，这一组可以从反面证明DNA是促使R型细胞转化的物质。
❹ 核酸的保存,小为什么RNA可以放在纯水里DNA却不能
你问反了抄吧,做质粒DNA纯化,用试剂袭盒最后一步洗脱就可以用热的纯水,然后冷冻就OK了
而对于大多数RNA,由于是单链,而且环境中有菌,存在大量的 RNA酶 ,一般不容易保存,有些RNA酶热灭菌都不能失活
❺ 在分离纯化酶的过程中为什么要不断测定酶活力和酶蛋白含量
一方面,防止酶变性失活.一旦活力明显下降,就要考虑换一种纯化方法；
另一方面,计算纯化效率.通过总活力和比活,评估纯化效率,寻找最佳方法.
❻ DNA在纯水中为何易变性
DNA的骨架磷酸根带负电，在纯水中没有阳离子来中和它的电性，所以无法维持双螺旋结构，易变性。
❼ 细菌提质粒最后一步为什么要加入无rna酶得水.
只要是纯水就可以了，在无金属离子辅助下，DNA酶一般不起作用。
要没RNA酶，可能是为了之后的实验考虑吧。。。
❽ 在分离纯化蛋白酶过程中，为什么要不断的测定蛋白酶的活力和蛋白含量
蛋白酶最终的功能和活性挂钩的，也就是说在分离纯化的过程中需要保证蛋白酶的活性收率。而不断的测定蛋白酶的活力和蛋白含量可以知道每一步分离纯化后蛋白酶的比活，通过比活的变化来确定活性收率，最终摸索出活性收率最高的分离纯化工艺。
❾ 纯化dna的滤液成分
（2）①洗涤剂是一些离子去污剂，它能溶解细胞膜，有利于DNA的释放。 ②食盐的主要成分是NaCl，适度的食盐溶液有利于DNA的溶解。 ③研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，影响实验效果，导致看不到丝状沉淀物，用二苯胺鉴定不显示蓝色。 ④可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 （3）①根据DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，蛋白酶对DNA没有影响，DNA对高温的耐受性强等特性，可以设计不同的DNA纯化方案。 ②方案1：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2 mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14 mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再利用2 mol/L的NaCl溶液溶解DNA。依据原理：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同。 方案2：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能分解蛋白质。 依据原理：利用蛋白酶分解蛋白质，而对DNA无影响，从而使提取的DNA与蛋白质分开。 方案3：将滤液放在60～75 ℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟，注意严格控制温度范围。依据原理：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性与DNA分离。 （4）①一是抑制DNA水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。 ②二苯胺法、紫外灯照射法、电泳法等。 考查DNA的粗提取过程和DNA的鉴定。用植物组织提取DNA时与动物细胞不同，需要用洗涤剂溶解细胞膜，其他操作都是相同的。DNA粗提取过程中，去除滤液中的杂质，有三种不同的方案，原理不同。
❿ 基因测序，pcr对纯水有什么要求
PCR产物直接测序技术现已成为分子生物学和基因组学研究中的一个重要技术,广泛用于基因突变检测、遗传性疾病诊断、单核苷酸多态性研究、基因组重叠序列群等.与传统克隆测序技术相比较,直接对PCR扩增的DNA进行测序,省去了耗时的克隆步骤,避免了传统的细菌培养,模板提取等重复性操作,可以从少量的原始样品中得到正确的DNA序列信息.PCR产物直接测序技术具有快速、简便、稳定经济的优点. 试验试剂 PCR扩增的双链DNA模板长约20个核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶测序胶 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 测序反应缓冲液：40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 终止缓冲液：95% 甲酰胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚蓝,0.05% 二甲苯腈试验步骤： 1、 4个微量离心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC温浴5min,备用. 2、 在一个空的微量离心管中加入1pmol的PCR扩增双链DNA,10pmol测序引物,2μl 5×测序缓冲液,加双蒸水至总体积10μl,96OC加热8min,冰浴泠却1min,4OC 10000g离心10s. 3、 加入2μl预冷的标记混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,测序酶2U,加水至15μl,混匀后置冰上2min,标记新合成的DNA链. 4、 在第1步骤的4个管中各加入3.5μl标记反应混合物,37OC温浴5min.每管各加入4μl终止液. 5、 样品在80OC的水浴中热变性5min,每一泳道加2μl 加到测序胶上,电泳分离这些片段. 注意事项： 1.?PCR产物要有一定的长度(>200bp),因为测序结果两端20-30bp的电泳峰图的准确性较低. 2.?纯化PCR产物可通过离子交换层析使扩增的DNA段与反应剩余的dNTP及引物分离；也可通过琼脂糖凝胶电泳,将PCR产物与非特异性扩增产物和引物分离开来；如果扩增的特异性较高时,可直接通过酚：氯仿抽提,乙醇沉淀的方法来纯化. 3.?测序引物设计原则类似于PCR引物设计,可在DNA合成仪上合成20个左右的核苷酸作为引物,经过高压液相层析或聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后,即可用作测序引物. PCR循环测序法 PCR循环测序法是将PCR扩增和核酸序列分析技术相结合,从而形成的一种测定核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增测序.该方法采用PCR仪加热使DNA模板变性,在TaqDNA聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增标记的DNA分子. PCR循环测序法与以往的测序方法相比,其优点在于：大大减少所需的模板量；能提高测序反应产生的信号,降低了操作的复杂性,且聚合酶的用量减少；可在小量制备的模板上进行筛选反应；高温下进行的测序反应使DNA聚合酶催化的聚合反应能够通过模板二级结构的区域；双链闭环DNA可以直接作为反应模板应用,不用作预先碱变性处理.由于PCR循环测序法能够简单、快速地检测特定序列,因此, PCR循环测序法在核酸序列分析研究中受到广泛的重视. 试验试剂： DNA测序试剂盒 dNTP ddNTP 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素 TEMED(N,N,N‘,N’-四甲基乙二胺) 过硫酸铵 6%测序胶：6%丙烯酰胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×测序缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明胶,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 终止混合液：ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 终止缓冲液：95%甲酰胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚蓝,0.05%二甲苯腈试验步骤 1、 4个小离心管,每个小管加入3μl的终止混合液,将管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×测序缓冲液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加双蒸水到30μl彻底混匀,每管7μl加入上面4个小管中. 3、 反应液上加30μl的石蜡油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30个循环,可根据具体的情况进行适当的调整循环条件及循环次数. 5、 反应结束后在油层下加入5μl的终止缓冲液并用加样枪混匀. 6、 上样前将样品在大于80OC的水浴中热变性5min,每一道加2μl加到测序胶上,电泳分离这些片段. 注意事项： 1、 制备测序模板：PCR 扩增的产物可以经过低熔点的琼脂糖凝胶电泳纯化回收后,用于序列分析；可经过柱层析纯化,去除PCR 反应后剩余的dNTP和引物后,用于序列分析.PCR 产物也可不经纯化直接用于测序,但是这种测序产生的结果较差,建议测序之前应进行PCR产物的纯化.各种标准的质粒制备方法所纯化出的质粒均可作为测序模板使用.用标准方法制备的M13噬菌体、粘粒、λDNA都适合用作测序模板用.但要注意的是反应体系中不应有与引物互补的非目的基因序列,否则将会导致测序实验的失败. 2、 测序引物：测序引物是指合成的与测序模板链特异性互补的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶对引物的5‘端进行标记,反应体系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的标记引物；也可用α-32P-dATP标记新合成的DNA链.引物的浓度不宜高,否则容易形成引物二聚体,或产生非特异性的扩增引物. 3、 酶：各种缺乏3‘—5‘端外切活性的耐热DNA聚合酶都可以用于循环测序,其中TaqDNA聚合酶在DNA测序中最为常用.虽然应用PCR循环测序法能够简单、快速的进行基因序列的测定,但仍未能适应大规模DNA序列测定的需要,而PCR循环测序法、荧光标记和自动测序仪的联合使用成为大规模基因组测序的主要技术.该技术是采用荧光标记引物或双脱氧核苷三磷酸,反应产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,经特定的DNA序列分析仪和分析系统处理待测的DNA序列.它的应用减轻了DNA序列测定的工作量,提高了测序的效率.