纯水流动相用什么色谱柱

『壹』 高效液相色谱纯化蛋白质一般都用什么柱子

色谱柱在HPLC中是非常关键的部件.一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了.色谱柱是消耗品,有一定寿命,使用中也非常容易出问题.普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年.使用不得当用两、三个月就可能损坏.所以使用中应该非常注意.
1.
在使用一根新的色谱柱之前,一定要看柱说明书,将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚.接触最多的是C18色谱柱,它对试剂应用的范围非常广,甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用.但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求,有的色谱柱只能使用水,不能使用有机试剂,有的色谱柱只能使用有机试剂,而且使用指定是某一种,象GPC色谱柱.这些事情一定搞清楚,如果流动相使用不对,柱子很快会损坏.另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向.当换新柱子时,不要马上就接到检测器上使用.将柱子入口处接在进样器的出口,柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器,按箭头方向垂直朝上,用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右.将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上,否则小气泡跑到检测池里,就很难赶走,检测器产生噪声信号,基线也就走不好.
3.
关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间,生产厂家不同,耐压也不同,从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高,但柱效高低不仅与耐压的高低有关,还有其他因素.从使用中看,在保证柱效的同时,耐压不要太高,仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力,检查柱压力应分段检查.压力过高不仅柱子受不了,其他的部件也会出问题,例如自动进样器.
4.
色谱柱对pH值是有一定的使用范围.以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH.
耐碱性能不太好,流动相的pH大于8会使硅胶溶解.有些分析条件须用碱性流动相,这时一定要选耐碱性好的色谱柱,流动相的PH值过高或过低,流动相使用纯水,使用高浓度磷酸盐缓冲溶液,使用离子对试剂等,均可能造成色谱柱填料被化学破坏,这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的.
5.
色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度.一般使用温度在60℃以下,典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命.
6.
色谱柱使用过程中压力的骤然波动,温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响.进样过程中,进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免.一般说来,在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失.这种问题是不可修复的
7.
色谱柱内存在缓冲盐时,如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱,会导致柱内缓冲盐结晶析出,造成柱压明显升高.出现该问题时,反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱,使柱内的盐全部溶解冲出,再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相.
8.
样品的预处理,许多样品,特别是生物样品与中药材,其组分复杂,样品预处理是影响色谱柱寿命的关键.样品经过常规的前处理后,进样前还需进行以下步骤：a.用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒,以免赌塞柱头筛板及柱内填充床,使柱压升高.b.将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解.
9.
为了保护色谱柱,在色谱柱前接了一个保护柱.保护柱通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质,达到保护色谱柱的目的.保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质.为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱.
10.
色谱柱用合适的溶剂保存,若为C18柱推荐用甲醇保存.在日常分析中,流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中,随着分析时间的延长,吸附量会越多,所以柱子要经常清洗,一般柱子使用一两个星期洗一次,柱子不同清洗的流动相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗这对柱子不好,一般清洗3～4小时,另外色谱柱长时间不用,存放时要将柱子洗干净,脏柱子放置时间越长,柱效会大大降低.存放时,柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈）,两端封死.
近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多,所用色谱柱的种类也越来越多,问题出的也较多,值得注意的是,不论怎样对色谱柱进行处理,一般都很难恢复到原有水平,因此,大家再使用色谱柱之前一定要看说明书,把以上几项问题搞清楚后再使用,尽量避免发生如上问题.

『贰』 如何有效选择高效液相色谱柱

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。

『叁』 纯水是否能通过高效液相色谱柱

看是什么柱子，有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有机相，以防对色谱柱伤害

『肆』 高效液相色谱仪是以什么为流动相

甲醇或乙腈和水按比例混合，也有用纯甲醇、纯乙腈、纯水这样的单一成分的流动相，当然有些还会加一些微量的缓冲剂。
对应不同的色谱柱，用不同的流动相。

『伍』 液相色谱流动相用什么ph的磷酸盐缓冲液调ph

注意冲洗系统
注意冲洗色谱柱；
注意冲洗进样口；
注意清洗泵头
所有的目的都是为了不让无极盐析出。
因为磷酸盐的水溶性还不错，不过在有机物当中的溶解度就不好了。它遇到甲醇、乙腈容易析出。然后就会把液相管路堵住。
比如，你的流动相是0.05mol/L的KH2PO4-乙腈，每天早上开始使用仪器前，还有每天使用完仪器之后要用10%的乙腈水冲洗。如果流动相是甲醇，要用甲醇水。
如果系统里面是流动相，不可以直接冲甲醇、乙腈等纯有机相，需要用10%的甲醇（乙腈）水缓冲。也是防止盐析出。
色谱柱也是一样的意思。一般来说250mm*4.6mm的色谱柱，1.0ml/min至少冲洗30min，最好40min。然后如果需要封存的话，再用纯甲醇或者纯乙腈封上。
进样口，这个其实不太重要。主要看你的溶剂。如果你使用流动相溶解的。那么不管是手动进样，还是自动进样，每天实验结束之后，打一针纯水。进样量尽量大一点。
泵头。这个如果是老实验员都知道，如果你的流动相里面含有大量的盐，尤其是有机相还是乙腈的时候，单向阀
特
别
容易堵住。如果有在线清洗泵头的装置的话一定记得使用。如果是手动的就没办法了。坏了的话就拿下来超声吧。

『陆』 液相色谱柱merck rp18可以用100%水做流动相吗

一般是严禁用纯水做流动相的，对柱子伤害比较大
你可以看看你用来检测什么物质，然后根据对应的国标看看流动相是什么
纯水容易把填充物冲塌陷

『柒』 碳十八色谱柱能进水吗

可以。不知道你说的“进水”是用水做流动相还是用水作为样品，不过都是可以的。
C18是最常见的回反相色谱答柱。反相的色谱柱都是可以用水作为流动相的。
不过一般来说，至少要有10%的有机相，也就是流动相里最好加入至少10%的甲醇或者乙腈。也有色谱柱的厂家说可以耐受100%的纯水相，不过如果用100%的水作为流动相，对色谱柱和的损伤有点大，会减少寿命。
样品进水溶液就更没有问题了，流动相那么大体积的水溶液都可以进柱子，进样不过几微升的体积而已，当然也是可以的。

『捌』 液相色谱柱应该如何使用和维护

一、使用前准备

1、使用前认真阅读色谱柱的说明书，了解色谱柱的种类，选用合适的色谱柱。

在选用色谱柱时，应充分考虑所分析样品的极性大小、化合物的种类数量、结构特征。根据化合物的性质，选择合适的色谱柱和分析条件。不同类型的色谱柱使用的流动相不同，使用错误的流动相会降低柱效，损伤柱子。如分析极性较大的多糖类成分，应当采用亲水性的反相填料。对于首次使用的色谱柱，还应按照厂家的出厂说明对色谱柱进行低流速的冲洗活化，活化后的色谱填料共价键键合力增强，柱效提高，寿命延长。

2、样品的准备与预处理

我们的经验是样品纯化得越干净，色谱柱的使用寿命越长。许多样品，尤其是生物样品，组份非常复杂，对色谱柱的损伤性较大，不经预处理的样品直接分析，会严重缩短色谱柱的使用寿命。因此，在样品的准备时需对样品进行预处理，包括准备溶剂的选择、样品过滤等。

2.1 制样溶剂的选择

制样溶剂通常需要考虑样品的溶解性、与流动相的相溶性、色谱填料的适用性等方面。这类溶剂需对样品有较大的溶解性，而且与流动相溶，洗脱强度最好低于流动相或梯度洗脱中的起始流动相，以免影响样品分离。目前许多手性色谱柱都禁止使用DMSO、四氢呋喃、氯仿等溶解样品，这些溶剂会破坏固定相的结构，从而缩短色谱柱的使用寿命。此外，制样溶剂还应与色谱系统其他部件如高压泵、进样器等相适用。

2.2 制样溶剂过滤

在进样前需过滤样品溶液，如采用0.22μm的微孔滤膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱头滤片及柱内填充床。在条件允许的情况下，最好采用与色谱柱同种填料的固相萃取柱过滤进样溶液，可以减少在色谱柱上死吸附的物质或易堵塞的大分子样品。如生物样品中的小极性的油脂类易于沉淀死吸附在C18反相色谱柱中，导致柱效降低、柱压升高。采用SPE柱过滤后，可以有效减少在色谱柱中附着沉积的死吸附成分，保护色谱柱不被污染，保证其使用寿命。

2.3 其他，如溶液浓度、进样量等

分析物的某些性质同样能影响色谱柱的使用寿命。强酸、强碱性物质和蛋白质类生物大分子，它们能与固定相填料作用，或生成不可逆吸附层，改变填料表面特征，使色谱柱性能发生变化，最终导致分离失效。此外样品的进样量过大、超载都会影响色谱柱的分离性能和使用寿命。

二、使用过程中的维护

1、流动相的使用和分析方法的选择

流动相的纯度、溶剂的选择、适当分析方法的使用与色谱柱的性能和寿命密切相关。

1.1 流动相的选择

所选用的流动相应与色谱柱、待分析样品相兼容，即样品、样品溶液和流动相是互溶的。流动相能够溶解样品，避免样品沉淀析出；同时还要求流动相与样品不发生化学反应，并且要求与色谱柱不能发生溶解或化学反应。

色谱分析应选择色谱级的流动相。通常分析纯的溶剂含有微量杂质，如有机溶剂中的聚乙二醇、无机铁离子（Fe+）等，作为流动相大量使用后会引起色谱柱性能变化。最好是使用色谱纯级或者更高纯度的试剂，尽量降低溶剂中杂质带来的损伤。

1.2 流动相过滤

使用色谱纯试剂配制流动相，使用前需经0.45μm或者更小孔径的滤膜过滤和超声脱气处理，减少灰尘、微生物等杂质堵塞色谱柱，尤其是水溶性流动相易引起微生物生长而造成色谱柱阻塞。流动相最好是现配现用，放置时间最好不要超过2天。

1.3 流动相的pH和缓冲盐的选择

极端pH的流动相会破坏填料内的共价键，“溶解”硅胶，使固定相流失，从而降低柱效，缩短使用寿命。以硅胶作基质的固定相一般要求pH在2.5~7范围内使用。长期在pH>7或pH<2使用环境中，硅胶会逐渐溶解或者表面键合的官能团会逐渐流失。如果一定要用高或低pH的流动相，最好是选用相适应的色谱填料。

1.4 流速的控制

目前粒径为1.8μm的UPLC的流速常设为0.3~0.5mL/min，粒径为5μm的HPLC分析流速不大于1.5mL/min，粒径为10μm半制备柱流速控制在3mL/min。流速过大，压力升高，会引起色谱填料冲垮、塌陷。

2、色谱仪器的操作

每次开机使用分析仪器时，泵启动太快，流速和柱压的瞬间升高，柱床受到冲击，引起紊乱，产生空隙，影响色谱柱的使用寿命。因此，在操作实验开始时，应当将流速和柱压逐渐增加。

3、保护柱的使用

“保护柱”是与所使用液相色谱柱相同填料的短型色谱柱，可以有效地阻拦容易损坏色谱柱的大分子和不溶性颗粒，过滤易沉着色谱柱上产生死吸附的物质，从而延长色谱柱使用寿命。

4、柱温的控制

不同类型的色谱柱耐受的温度各有差别。通常色谱柱温维持在10～40℃之间，能够充分、最优的发挥色谱柱的性能。超出色谱柱温度范围，尤其高于柱温范围，会增加对流动相中化学物质的吸附，引起色谱柱固定相结构的改变；此外，还可能引起柱床塌陷，改变峰形，降低柱效，产生不可逆性的损伤。

三、使用后的清洗与保存

柱子使用一段时间后，总会有一些杂质累积在柱内，保留值较弱的物质，一般能快速从色谱柱冲洗出来，不产生干扰；中等保留强度的杂质能被缓慢冲洗出来，但对分析产生一定的干扰；强保留杂质通常聚集在柱头或色谱柱中，难以被洗脱，甚至可能与填料发生相互作用，形成新的伪固定相，改变色谱柱的分离性能。通常表现为柱压升高、基线不平、色谱双峰、分离性能降低等。这些被污染的色谱柱经清洗后，可恢复部分甚至大部分离能力。因此使用后认真、定期清洗，不仅能延长色谱柱的使用寿命，节省资源，还能大大降低分析的成本。以我们常用的硅胶基质色谱柱为例，简要阐述常用色谱柱的清洗与再生。

1，色谱柱的清洗与再生

色谱柱的使用前后都需经较强的流动相冲洗。通常情况下，在使用硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱时，每次用完后可先用二氯甲烷或正己烷等溶剂低流速长时间的冲洗；键合反相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱可先用高比例的水（甲醇水混合溶剂）冲洗，再用100%甲醇冲洗。此外，色谱柱低流速的反相冲洗能够有效除去堵塞在柱头或筛板上的杂质，以及清洗聚集在柱头部位的较强吸附物质。有些色谱柱在许多方法处理污染失效后，反过来使用，不仅柱压降变小，柱效也可恢复如，延长了色谱柱的使用时间。

若上述常规清洗法无法清除污染物，则有必要采用更强的洗脱剂清洗，如反相材料的冲洗顺序为：100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶异丙醇(75∶25，V/V)→100%异丙醇。或者可以采用较低浓度的稀酸或稀碱可将有机溶剂不能洗脱的污染物除去。例如采用0.05mol/L的硫酸和流动相溶液冲洗色谱柱，可取得良好效果；或者采用1%氢氧化铵或50%二甲基甲酰胺水溶液，对聚集在柱头的污染物具有良好的清洗效果。

如果分析时流动相中含有缓冲液（通常为盐溶液），冲洗时宜用水取代缓冲液与有机相混合冲洗色谱柱（20倍柱体积）；再用100%有机溶剂冲洗。若直接用100%有机溶剂冲洗，可造成缓冲液沉积析出，从而损坏柱子品质。同样的，若流动相中加入酸、碱溶液时，也应当按照上述方法，先采用高比例的水（水：甲醇10:90）冲洗20倍柱体积，防止强酸强碱溶液导致硅胶基质填料的溶解。

蛋白质对反相色谱柱的污染已成为常见问题，尤其在分离未经处理的动物组织等生物样品。一般情况下，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色谱柱，因而需要一些特殊的清洗方法。首先尝试用高比例强极性溶剂的流动相进行冲洗，如乙腈∶异丙醇（1:2,V/V）；或使用0.1%的三氟乙酸水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外，还可以采用1%十二烷基硫酸钠 (SDS)，然后用5%～95%乙腈/水（含0.1%TFA）梯度冲洗，去除蛋白污染物效果也较好。

若采用上述的条件清洗后色谱柱仍不能达到理想的效果，有必要将固定相从色谱柱内取出，进行清洗再生后重新装填。具体操作是：将色谱固定相从色谱柱内打出后，用甲醇浮选，去除其中细小的破碎颗粒；然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超声清洗；最后干燥固定相，重新装填色谱柱。经该方法处理的色谱柱，性能可得到显著提高。

2、色谱柱的保存

色谱柱的保存应按照使用说明书中所指明的溶剂进行填充，尽可能的贮存于100%有机溶剂。色谱柱不能贮存在水或含水量高的溶剂中，会引起微生物的滋生，影响色谱柱寿命。如反相色谱柱长期不用，最好采用90%~95%的有机溶剂混合水溶液保存，防止色谱柱因密封不严造成色谱柱两头干涸、断层引起的寿命缩短。

此外，色谱柱还应当轻拿轻放，避免剧烈碰撞引起的色谱柱填料产生塌陷、断层，缩短使用寿命。答案来自

『玖』 色谱柱的分类

1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。 1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。 1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。 1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。然后用用100%乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生：
用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲。冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇。

『拾』 那些HPLC色谱柱可以用纯水

你问的应该是反相
色谱柱
，因为
凝胶过滤
用
纯水
相是司空见惯的。
Agilent的Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做纯水相的。
但你如果只是考虑
梯度
起点的高
水相
比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用纯水相短时间冲洗，不超过10个
柱体积
，是没什么问题的。