半透膜逆向流水透析法

『壹』 透析的原理和目的是什么

生物电透析（Bioelectricity Dialysis），通俗的说法也称之为人体细胞电荷，是把人体细胞内电荷净化技术。其利内用生物容电共振原理，通过输出、对流体内各种有害以及多余的代谢废物和过多的电解质移出体外，达到矫正细胞电荷的目的。

『贰』 血液透析的治疗原理和作用，都有哪些

血液透析是基于半透膜的原理。血液和患者透析液同时进入透析室，在透析室两侧反向流动。利用半透膜两侧的溶解度梯度、渗透梯度和水压梯度，通过分散、对流和吸附去除毒素；

在血液透析之前，我们必须遵循医学委员会的规定，为血液透析准备专门的血管通路。血液透析的血管通路有三种常见形式：自体动静脉瘘，人工动静脉瘘和深静脉置管。前两种方法每次手术都将动脉和静脉本身结合形成血管通路。血液透析被称为肾和人工肾灌洗。它利用半透膜原理，通过扩散和对流，将体内各种有害物质、过量代谢残留物和过量电解质排出体外，达到净化血液的目的，达到纠正电解质水和酸碱平衡的目的。200万ESDP患者。初步估计我国每年需要肾透析的患者约200万，肾脏替代治疗是急慢性肾功能不全血液透析患者最有效的治疗方法之一，血液透析患者应每周治疗2次，每次4-4.5小时。

『叁』 如何提取细胞膜（动物细胞）上的蛋白质

NRC Institute for Biological Sciences
Triton X-114 extraction protocol (Hydrophobic protein preparation)

Ressuspend cells in Solution A (dil 1/8) and add 15 μl of mammalian cocktail proteases inhibitor (Sigma).
Add 1 third of the volume of solution B
Incubate on ice for 1 hour with frequent vortexing.
Centrifuge at 10 000g for 10 minutes at 4°C to pellet unbroken cells and nuclei.
Transfer supernatant in clean eppendorfs then incubate at 30°C for 3 minutes (until sln is cloudy).
Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature.
Transfer Aqueous phase in new eppendorf (but keep detergent phase at room temperature).
Add X volume of triton X-114 to Aqueous phase:

Vol of Aq phase = X vol of triton X-114
24.6
Shake well then incubate 3 minutes at 30°C (until cloudy) then transfer on top of detergent phase slowly.
Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature.
Remove Aqueous phase with pipette down to detergent interphase.
Precipitate hydrophobic protein (detergent phase) with 10X volume of acetone. Place overnight at -20°C.
Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Ressuspend proteins in IEF sln (7M urea, 2M thiourea, 4% CHAPS, 1% DTT) then precipitate protein again with 10 volume of acetone. Place 5-10 min at -20°C.
Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Air dry pellet then dissolve protein in IEF solution
Solution:

Solution A: 80 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 1,2M NaCl

0,63 g Tris-HCl
3,51 g NaCl
Dissolve in 30 ml of water
Adjust pH to 7.4
Adjust volume to 50 ml with water
Solution B: 40 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 600 mM NaCl ; 4% triton X-114

5 ml of sln A
Add triton to have a final concentration off 4%

4% x 10 ml = ml
[triton X114]
Adjust volume to 10 ml with water

『肆』 请问使蛋白质沉淀的方法有几种

蛋白质沉淀实质上是蛋白质的分离，提取蛋白质的方法。一般来说若蛋白质存在于各种生物流体如血浆、牛乳、鸡蛋白及尿的溶液中时，不要经过提取。若在组织和细胞里的蛋白质必须经过提取成为蛋白质溶液，再用（1）透析法：有半透膜透析、电透析、超滤析三种。（你是问方法有几种？所以不讲详细过程，下同）上面是蛋白质与非蛋白质的分离。（2）分离后要除去蛋白质水溶液中的溶剂，可用有机溶剂的亲水作用，在低温（负10度或接近溶剂凝固点的温度）将蛋白质水溶液倾入大量酒精或丙酮中，蛋白质就沉淀下来。（3）也可以用冻干法除去蛋白质溶液中的溶剂（通常是水）即将蛋白质溶液迅速冻成薄层，在高度真空中用升华法将溶剂除去。（4）分段分离将干燥后的多种蛋白质混合物采用分阶段分离。用盐析法进行也可用有机溶剂为沉淀剂分离（5）最后用标准试验法：如超离心法、电泳法及相律法等检验蛋白质是否纯净。

『伍』 血液透析原理

透析（dialysis）是通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离技术。 透析疗法是使体液内的成分（溶质或水分）通过半透膜排出体外的治疗方法。

『陆』 人工肾半透膜是什么

问题一：人工肾的人工肾的工作原理 现在临床上使用的人工肾是一种透析治疗设备。透析疗法包括血液透析、血液滤过、血液灌流和腹膜透析，是分别应用血液透析机、血滤机、血液灌流器和腹膜透析管对病人进行治疗的技术。血液透析俗称“人工肾”，即将血液与透析液分置于一人工合成的半透膜两侧，利用各自不同的浓度和渗透压互相进行扩散和渗透的治疗方法。血液透析可将患者体内多余水及代谢废物排出体外，并从透析液中吸收机体缺乏的电解质及碱基，以达到纠正水电解质及酸碱平衡的目的。

问题二：透析是什么意思 是得了尿毒症患者就是肾不好了，除移植外，需要透析把身上毒素清理。

问题三：透析是什么 有什么作用 转载自网络！
透析（dialysis）：通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
透析 dialysis
使体液内的成分（溶质或水分）通过半透膜排出体外的治疗方法。常用于急性或慢性肾功能衰竭、药物或其他毒物在体内蓄积的情况。常用的透析法有血液透析及腹膜透析 。
血液透析疗法 将患者的血液和透析液同时引进透析器（两者的流动方向相反），利用透析器（人工肾）的半透膜，将血中蓄积的过多毒素和过多的水分清出体外，并补充碱基以纠正酸中毒，调整电解质紊乱，替代肾脏的排泄功能。
血液透析器俗称人工肾，有空心纤维型、盘管型及平板型3种 。最常用的是空心纤维型 ，由1～1.5万根空心纤维组成，空心纤维的壁即透析膜，具半透膜性质。血液透析时血液流入每根空心纤维内，而透析液在每根空心纤维外流过 ，血液的流动方向与透析液流动方向相反，通过半透膜原理清除毒物，通过超滤及渗透清除水分。
血液透析的适应症包括：①急性肾功能衰竭。②急性药物或毒物中毒。③慢性肾功能衰竭。④肾移植前的肾功能衰竭或移植后排异反应使移植肾无功能者。⑤其他疾病（肝功能衰竭、精神分裂症、牛皮癣等）。
血液透析的相对禁忌症包括：①病情极危重、低血压 、休克者。②严重感染败血症者。③严重心肌功能不全或冠心病者。④大手术后3日内者。⑤严重出血倾向 、脑出血及严重贫血者。⑥精神病不合作者。⑦恶性肿瘤患者。
一般患者需每周血液透析3次，每次4～5小时 。应尽早开始透析以利纠正由于毒素蓄积过多导致的不可逆性脏器损伤及机体的代谢紊乱，当肌酐清除率下降为10～12mL／min时即应开始透析。15～60岁患者透析效果好且安全，但由于透析技术的不断改进和新透析设备的不断出现，70岁以上的患者亦可获得好疗效。
为保证透析患者的生存质量 ，提高康复率 ，血透患者应保证每日摄入蛋白质 1.0～1.2克／千克及146.3千焦／千克，同时应摄入足够的水溶性维生素及微量元素以补充透析丢失量。透析患者的5年存活率各国报道不一，约为50％～80％，10年存活率超过50％者亦有报道。
腹膜透析疗法 腹膜透析是利用腹膜作半透膜 ，通过腹透管向腹腔注入腹透液，通过弥散原理清除毒素，纠正电解质及酸碱平衡紊乱，通过渗透原理（向腹透液内加葡萄糖以提高腹透液的渗透压）以达到超滤脱水，替代肾脏的排泄功能。
腹膜透析的设备较血液透析简单，可在床边操作，又可避免体液平衡的突然变化。
腹膜透析分为持续性非卧床式腹膜透析（CAPD，患者可随身携带设备自由活动）、持续性循环式腹膜透析（CCPD ，优点同CAPD，夜间依靠腹壁透析机进行透析，白天仍可工作）及间歇性腹膜透析（用于急性患者）。一般每日应进行4～6次腹透，每次灌入2000mL腹透液。腹膜透析无需依赖机器 ，操作简便，无需特殊培训人员，故价格低廉，在基层医疗单位均可开展。虽然腹膜透析和血液透析的适应症相同，但各有利弊，不能互相取代，故应根据患者的原发病因、病情及医疗、经济条件作适当选择，使患者得到最大效益。下述情况应优先考虑腹膜透析：①高龄、心血管系统功能差者。②建立血液透析血管通路困难者。③出血倾向严重不能作血液透析全身肝素化者。④糖尿病肾病尿毒症者，将胰岛素加入腹腔，可使血糖控制较好。下述情况为腹膜透析的禁忌症 ：①腹部大手术后3日内 。②腹膜有粘连或有肠梗阻者 。③腹壁有感染无法殖入腹透管者。④腹腔肿瘤、肠瘘、膈疝等 。
无菌操作不严格可引起腹膜炎，反复发作腹膜炎可使腹壁骇耿粪际荼宦......>>

问题四：肾功能衰竭会危及生命．人工肾是根据肾脏的工作原理制成的一种机器，可以代替患者已丧失功能的肾．图甲为 （1）图乙2人①是肾小球，②是肾小囊，③肾小管，④是肾静脉．肾单位由肾小体和肾小管组成，肾小体由肾小球和肾小囊组成．（了）半透膜能够将血液2人尿素尿酸等扩散到透析液2，其作用相当于肾小球和肾小囊内壁人滤过作用．尿人形成过程有肾小球人滤过和肾小管人重吸收作用，人工肾没有重吸收过程；（3）肝细胞产生人尿素通过扩散作用扩散到肝周围人毛细血管，从而进入血液，经肝静脉、下腔静脉到达右心房、右心室，再经肺动脉，肺部毛细血管，肺静脉到达左心房、左心室，经主动脉、肾动脉、入球小动脉、肾小球、肾小管、肾盂、输尿管、膀胱和尿道排出体外．故答案为：（1）肾小球；肾小囊；肾小管；（了）肾小球；重吸收（3）右心房；肺静脉．

问题五：渗析和透析有什么区别 渗析与渗透的区别渗析：分子、离子通过半透膜， 而胶体粒子不能通过半透膜的过程。 透析原理同胶体的渗析类似。透析时，病人的血液通过浸在透析液中的透析膜进行。

问题六：把人的血抽出来过滤后又抽还回去的仪器设备叫什么 肾析仪，给肾衰竭患者进行血液透析的仪器，愿楼主只是好奇而问，您与您的亲友与之并没有任何接触。 满意请采纳，谢谢。

『柒』 透析的原理是什么

通过小分来子经过半透自膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。

分类：用于医学上的透析大致分为三大类：血液透析、腹膜透析、结肠透析。

适用范围：使体液内的成分（溶质或水分）通过半透膜排出体外的治疗方法。常用于急性或慢性肾功能衰竭、药物或其他毒物在体内蓄积的情况。常用的透析法有血液透析及腹膜透析。

(7)半透膜逆向流水透析法扩展阅读

需要接受透析治疗的情况：

透析疗法是利用半渗透膜来去除血液中的代谢废物和多余水分并维持酸碱平衡的一种治疗方法。

一般来说，患者血肌酐浓度超过700，或者肾小球滤过率在15ml/min/1.73m2以下时，如果出现了水负荷过重（比如有水肿或腹胀的症状）、严重的营养不良、药物难以纠正的高钾血症、高磷血症等，就需要做好随时做透析的准备。

血透和腹透的区别：

血透更容易达到充分性，但对心血管要求条件高，透析时间相对固定，必须按时到医院进行透析。

腹透禁忌证较少，不受时间限制，可以在家进行操作治疗，但容易因卫生条件不佳或者操作不当诱发腹膜炎。

『捌』 求免疫组化冰冻切片荧光染色具体流程

wifgw
石蜡切片免疫组化染色步骤

石蜡切片免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：
1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES，置通风橱中晾干即可。用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位，并尽量减少气泡的存在，以免影响染色结果。
1.2 HistogripTM：将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的Histogrip液中，停留1~2分钟，然后用双蒸水快速清洗三次，室温干燥或60oC烤箱烘烤一小时，装盒备用。
1.3 Poly-L-Lysine：将洗净、干燥的载玻片放入以1:10比例去离子水稀释的多聚赖氨酸溶液中，浸泡5分钟，60oC烤箱烘烤一小时或室温过夜干燥。装盒备用。试验中使用的器具均为非玻璃制品。 2、常用酶消化： 2.1 胰蛋白酶：一般使用浓度为0.05%~0.1%，消化时间为37℃、10~40分钟，主要用于细胞内抗原的显示。
2.2 胃蛋白酶：一般使用浓度为0.4%，消化时间为37℃、30~180分钟，主要用于细胞间质抗原的显示，如：Laminin（层粘蛋白），Collagen IV（IV型胶原）等。
g/ml的saponin溶液，消化时间为室温孵育30分钟。 2.3 皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10 3、抗原热修复： 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）效果最好。请选用我公司提供的ZLI-9064 枸橼酸盐缓冲液（粉剂）配制，取该粉剂一包溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，其pH值在6.0 0.1，如因蒸馏水本身造成的pH值偏差，请自行调整。
3.1 石蜡切片微波炉抗原修复操作方法：切片脱蜡至水后，3％H2O2处理10分钟，蒸馏水洗2分钟×3。将切片放入盛有枸橼酸盐缓冲液（工作液）的容器中，置微波炉内加热使容器内液体温度保持在92℃~98℃之间并持续10~15分钟（注意：无论是使用医用或家用微波炉，请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求）。取出容器，室温冷却10~20分钟（注意：不可将切片从缓冲液中取出冷却，以便使蛋白能够恢复原有的空间构型）。PBS洗，下接免疫组化染色步骤。
3.2 石蜡切片高压抗原修复操作方法：切片脱蜡至水。将1500ml~3000ml的枸橼酸盐缓冲液（工作液）注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。切片置于金属架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖锅压阀。当压力锅开始慢慢喷气时（约加热5~6分钟后），计时1~2分钟，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，取下气阀，打开锅盖，取出切片，蒸馏水洗后，PBS洗2分钟×3，下接免疫组化染色步骤。
3.3 石蜡切片电炉煮沸抗原修复操作方法：切片脱蜡至水后，放入盛有枸橼酸盐缓冲液（工作液）的容器中，并将此容器置于盛有一定数量自来水的大器皿中，电炉上加热煮沸，从小容器的温度到达92℃~98℃起开始计时15~20分钟，然后端离电炉，室温冷却20~30分钟，蒸馏水冲洗，PBS洗，下接免疫组化染色步骤。 4、免疫组化染色步骤： （以美国ZYMED公司SP试剂盒为例）
石蜡切片脱蜡至水。
3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，(如需采用抗原修复，可在此步后进行)。
5~10％正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
PBS冲洗，5分钟×3次。
滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。
PBS冲洗，5分钟×3次。
滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。
PBS冲洗，5分钟×3次。
显色剂显色（DAB或AEC）。
自来水充分冲洗，复染，封片。
冰冻切片免疫组化染色步骤
m，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。用3％过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟×2。冰冻切片4~8

免疫组化非特异性染色的消除方法
一、非特异性染色的主要因素
组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：
（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去
。
（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。
（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。
（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体，以致容易混淆。
（5）抗体分子上标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。
（6）荧光素不纯，标本固定不当等。 二、消除非特异性染色的方法
消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法，常用的方法有以下几种：
（一）动物脏器粉末吸收法
常用肝粉（猪、大白鼠或小白鼠），其次是骨髓粉、鼠脑粉和鸡胚粉等。每毫升荧光抗体中加入肝粉50～100mg,在离心管中充分混匀，在室温中振动2h，4℃中过夜，再搅拌10min，高速离心（3000～15000r/min）30min，1～2次后，即可使用其上清液。吸收一般应在临用前进行，吸收后之荧光抗体保存冰箱中勿超过2周。染色应作吸收前后之比较，吸收时可先用缓冲盐水将组织干粉浸湿，离心（3000～15000r/min）30min，除去上清液，再加入荧光抗体进行吸收，以免消耗过多的抗体。
肝粉或新鲜细胞吸收是一种非特异性的消除方法，对荧光抗体的荧光色素和蛋白都有吸附作用。如检查组织中的病毒抗原时，也可用相同的组织干粉或匀浆沉淀物吸收之。
用脏器肝粉吸收对荧光抗体损失较多，如果根据Hiramotos氏等的方法将组织的20%生理盐水匀浆液，用生理盐水洗2～3次，12000r/min
10min离心沉淀，用其沉淀物吸收其荧光抗体即能完全达到目的，京极方久氏认为这样吸收对荧光抗体几乎没有损失，他们常用此法，效果甚佳，吸收后放置一周左右，用时有必要再吸收一次。
【肝粉的制法】
（1）将若干只小白鼠或大白鼠放血杀死，取出肝脏，用生理盐水洗2～3次，除去血液，剥掉表面的结缔组织的脂肪。
（2）剪碎，用生理盐水反复洗涤至无血色止，然后再加生理盐水少许，用组织捣碎机或匀浆器作成匀浆。
（3）将肝匀浆装入离心管内（1/3左右），交换地用2～3倍量生理盐水和丙酮反复洗涤各三次，至上清无血色止，每次完毕先用2000r/min离心沉淀15 min后，再除去上清液。
（4）最后用丙酮洗涤肝浆，再用布氏漏斗过滤，或离心沉淀，将沉淀物平铺在洁净的玻璃板上，37℃烤干（过夜）。
（5）在乳钵中充分研磨，用120目铜筛筛选过后，分装，密封，低温干燥保存。
2006-12-22 13:24 wifgw
二）透析法
荧光素如FITC分子可以通过半透膜，而蛋白质大分子不能透过，可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。
（1）将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内，液面稍留空隙，紧扎。
（2）浸入0.02mol/pH
7.1～7.4的PBS中（悬于大于标记物体积约50～100倍的PBS内），在4℃中透析，每日更换3～4次PBS，约5～7天，透析液中无荧即可（在荧光光源照射下）。
（三）葡聚糖凝胶G-50柱层析法
除游离荧光素可用2×46cm柱层析法，详细方法参阅第二章。加入荧光抗体15～18ml（按床体积的5%～10%加样），使其缓慢渗入柱内，待即将全部入柱时，加入PBS少许，关闭下口，停留30～40min ，使游离荧光充分进入细筛孔中，然后再接通洗脱瓶开始滴入洗脱液。加入洗脱液一定量后，荧光抗体即向下移行，逐渐与存留于上端的游离荧光素之间拉开明显的界线，随着大量洗脱液的不断加入，二者分离距离越来越大，荧光抗体最先流出，分前、中、后三部分收集，测F/P比值，合格者合并，浓缩，分装。洗脱液用20%磺基水杨酸测定蛋白（发生沉淀反应），继续洗脱，游离荧光素则相继被洗脱下来，至洗脱液中无蛋白和荧光素后，此层析柱即可再用。
若用以除去荧光抗体中的游离荧光素和硫酸铵等盐类，可先在过柱前透析一夜，否则，NH4+太浓，在蛋白未完全洗脱时即出现NH4+，因而影响提纯与回收蛋白，一般待洗脱液出现蛋白时，即进行收集，之后出现SO4++（用1%BaCl2检查发生白色沉淀）。最后是NH4+，（用纳氏试剂检查呈黄棕色沉淀），待洗脱液无SO4++及NH4+后可再用。
如仅用小量荧光抗体，可用1×20cm的柱层析柱，取2g Sephadex G-50装柱，即可过滤2～3.5ml荧光抗体。
（四）DEAE纤维素柱层析法
标记过多或过少荧光素的抗体分子可用DEAE-纤维素柱层析法除去。方法如下： DEAE-纤维素柱的装柱，洗脱、再生方法等与提纯IgG方法相同。装柱所需DEAE-纤维素量以干重每克交换20～50mg标记蛋白量为宜
。常用梯度洗脱法如下：
（1）层析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，标记物上柱后，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脱，洗出无色或淡绿色液体，洗脱液量（根据床体积大小每梯度乘3），然后依下列各种离子强度洗脱液，
分别洗脱和收集：
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脱部分1。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脱部分2。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脱部分3。
将此三部分收集液（每管5ml）分别测定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脱液280nm光密度高峰管合并，浓缩保存备用。因这部分非特异性染色荧光最少，是比较好的荧光抗体。其他两部分可以废弃。
（2）柱上吸附的过度标记蛋白可继续增加NaCl的浓度至
2.0mol/L洗脱完。
经过DEAE-纤维素层析后的标记抗体，其抗体量一般约损失50%，因此有些要求不太高的抗体，如抗细菌荧光抗体，不一定要这样处理，可用染色效价测定的稀释法除去非特异性染色。
（五）荧光抗体稀释法
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价，若二者效价相差较大，则可将荧光抗体稀释至一临界浓度，使特异性染色呈阳性，而使非特异性染色保持阴性，稀释方法和染色效价测定方法相同。
（六）纯化抗原法
用各种方法提纯单一成分的抗原是产生单价特异性抗体的最主要条件。近代免疫化学技术（免疫吸收法）和柱层析法等提供了很大的可能性，可参考有关专著。
（七）纯化抗体法---免疫吸收法
例如抗IgA血清的纯化方法---免疫吸收法。如分泌型IgA（ SIgA）抗原纯度不高，所制的抗血清常与IgG呈交叉反应，为此需要吸收，常采用纯化的人IgG戊二醛聚合物加以吸收纯化。方法如下：
1．人IgG聚合物的制备 在5ml含40mg/ml人IgG的0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲溶液中，加入2.5%戊二醛溶液1ml，边加边搅，5min即出现混浊，逐现大块胶块，放置30min后，用研钵将凝胶磨细，继用1.0mol/L pH7.0磷酸缓冲溶液反复洗涤3次，末次加蒸馏水至20ml，即为人IgG聚合物悬液。
2．免疫吸收法 将待吸收的抗SIgG血清加入待量IgG聚合物悬液，置室温搅拌60min,离心沉淀，上清液即稀释1倍的纯化抗SIgA血清。如用IgG聚合物作少量分次吸收，其效果更好。
（八）伊文氏蓝（Evans blue）衬染法
用0.01%伊文氏蓝的0.01mol/L pH7.2PBS稀释荧光抗体，可将背景细胞和组织染色，呈红色荧光，与特异性黄绿色荧光形成鲜明的对比，减少了非特异性荧光，宜作常规应用。伊文氏蓝一般先配成1%溶液，保存于4℃，用前再稀释至0.01%用以
和然释荧光抗体。
此外，还可以用胰酶消化组织切片或用10%牛血清蛋白封闭法等消除非特异性染色，提高特异性染色。

『玖』 简要说明蛋白质电泳法·透析法·超速离心法和盐析法的基本原理

电泳法： 在外加电场的羡型告作用下，带电颗粒将向着与其电性相反的 电极移动的现象，称为电泳。
透析法： 通过小分子经半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
超速离心法：利用离心力使水和其他小分子通过半透膜租哗，而蛋白质留在膜内。
盐析法：低浓度的中性盐可以增加蛋白质的溶解度而高浓度的中性盐可以降低蛋白质的溶解度是的蛋白质发生沉淀，在兄明蛋白质溶液中逐渐增大盐浓度，不同蛋白质就会先后析出。

『拾』 有谁知道关于透析的相关常识

定义：穿过膜的选择性扩散过程。可用于分离分子量大小不同的溶质，低于膜所截留阈值分子量的物质可扩散穿过膜，高于膜截留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另一侧。
透析分类
用于医学上的透析大致分为两类：血液透析、腹膜透析
血液透析
血液透析（Hemodialysis），简称血透，通俗的说法也称之为人工肾、洗肾，是血液净化技术的一种。其利用半透膜原理，通过扩散、对流体内各种有害以及多余的代谢废物和过多的电解质移出体外，达到净化血液的目的，并吸达到纠正水电解质及酸碱平衡的目的。
腹膜透析
腹膜透析是利用腹膜作为半渗透膜，利用重力作用将配制好的透析液经导管灌入患者的腹膜腔，这样，在腹膜两侧存在溶质的浓度梯度差，高浓度一侧的溶质向低浓度一侧移动（弥散作用）；水分则从低渗一侧向高渗一侧移动（渗透作用）。通过腹腔透析液不断地更换，以达到清除体内代谢产物、毒性物质及纠正水、电解质平衡紊乱的目的。
医学术语
名词解释
通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
适用范围
使体液内的成分（溶质或水分）通过半透膜排出体外的治疗方法。常用于急性或慢性肾功能衰竭、药物或其他毒物在体内蓄积的情况。常用的透析法有血液透析及腹膜透析 。 血液透析疗法 将患者的血液和透析液同时引进透析器（两者的流动方向相反），利用透析器（人工肾）的半透膜，将血中蓄积的过多毒素和过多的水分清出体外，并补充碱基以纠正酸中毒，调整电解质紊乱，替代肾脏的排泄功能。 血液透析器俗称人工肾，有空心纤维型、盘管型及平板型3种 。最常用的是空心纤维型 ，由1～1.5万根空心纤维组成，空心纤维的壁即透析膜，具半透膜性质。血液透析时血液流入每根空心纤维内，而透析液在每根空心纤维外流过 ，血液的流动方向与透析液流动方向相反，通过半透膜原理清除毒物，通过超滤及渗透清除水分。
适应症和禁忌症
血液透析的适应症包括：①急性肾功能衰竭。②急性药物或毒物中毒。③慢性肾功能衰竭。④肾移植前的肾功能衰竭或移植后排异反应使移植肾无功能者。⑤其他疾病（肝功能衰竭、精神分裂症、牛皮癣等）。 血液透析的相对禁忌症包括：①病情极危重、低血压 、休克者。②严重感染败血症者。③严重心肌功能不全或冠心病者。④大手术后3日内者。⑤严重出血倾向 、脑出血及严重贫血者。⑥精神病不合作者。⑦恶性肿瘤患者。