二抗用蒸馏水配

Ⅰ 求封闭液中1%的BSA是怎么配制

取1g BSA，加蒸馏水，定容到100ml就行了。

最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA，封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。

一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。

特别是用单抗腹水直接包被，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。

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判断封闭条件，要考虑在此条件下是否能达到试验要求，即棋盘滴定要满足：阳性样品OD=0.8、阴性样品OD<=0.1，而不是看你待测样品OD变化趋势;

过低封闭浓度势必造成本底过高，但过高又会使灵敏度降低，因此只要选择能够满足你试验要求的最低BSA浓度就可以了。

另外提醒，洗涤一定要彻底，很重要的。

包被后封闭前一般要洗涤一遍，以便于洗掉结合不牢固的包被物，防止在实验中影响实验结果;封闭后一定不要洗涤，封闭的目的就是要靠蛋白填补未被包被物占领的空间，另外封闭液一般也具有保护作用。

如果不是用biotin-avidin系统的话，用5%脱脂奶粉做封闭液就可以了，廉价，效果也很好。

封闭液一般是用5%的BSA或者是用5%的脱脂奶粉，溶剂一般使用TBST。做实验的时候，我一直强调这样的一个原理，那就是在了解原理的基础之上，我们完全可以不拘泥于书本，进行创造。就拿这个封闭液来讲，要是单纯的一种封闭效果仍然不好的话，我们完全可以两种合用，我就试过1%的BSA和5%的脱脂奶粉合用进行封闭的事例。所以，搞科学研究是需要我们进行再创造的。

D、BSA交联抗原注射到兔子体内得到一抗，我们Elisa的二抗用的是羊抗兔HRP标记的二抗。请问，在封闭时，用什么样的封闭液比较好呢?是无蛋白封闭液，还是羊的免疫前血清?