用蒸馏水制备琼脂糖凝胶吗

『壹』 1.0%琼脂糖凝胶如何制备

秤一克琼脂糖，加100毫升蒸馏水。
但是，一般跑电泳的时候，需要加TAE缓冲液，50×TAE加2毫升，再加98毫升蒸馏水。
配琼脂糖，差一两毫升没什么影响的，我们实验室用的是百分之二的。

『贰』 如何制备核酸琼脂糖凝胶，操作中应注意什么

琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法，琼脂是最常用的载体支持物，核酸分子具有电荷效应和分子筛效应，利用此特性可达到分离检测的目的。
一、琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由琼脂糖(agarose，约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系
① DNA分子的大小 在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
② 琼脂脂糖的浓度 如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
表 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度/%0.30.60.70.91.21.52.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1
2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA(covalently closed circular，cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=0)，而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进(Rm>0)，由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。
3、电泳方法
① 凝胶类型
用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。
② 缓冲液系统
缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢;相反，高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热，严重时，会造成胶熔化和DNA的变性。
常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸(TEA)，Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等，浓度约为50mmol/L(pH7.5~7.8)。电泳缓冲液一般都配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍数。
TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉淀，为避免此缺点，室温下贮存5×溶液，用时稀释10倍0.5×工作溶液即能提供足够缓冲能力。
③ 凝胶的制备
以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或微波炉配制一定浓度的溶胶，灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷却。
④ 样品配制与加样
DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料，含有10%-15%蔗糖或5%~10%甘油，以增加其比重，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳结果产生U形条带，可改用2.5%Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。
⑤ 电泳
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不宜高于5V/cm。
电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。
⑥ 染色和拍照
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。
注意事项：电泳中所使用的染料EB是致癌物质，一定要小心，避免其接触皮肤等，进行电泳操作的时候一定要带手套，手套要及时更换，现在也除了一些EB的替代物，如Goldview等。

『叁』 琼脂糖凝胶的配制

倒平板一定要缓慢，当然是相对缓慢不能等它凝固了，这样可以避免倒板中出现气泡
另一个，你配凝胶溶液的时候搅拌一定要轻柔缓慢，不然你想不出气泡都难

『肆』 配置琼脂糖胶时,可以用蒸馏水和高浓度的TAE液吗

1.用蒸馏水将制胶工具洗干净 准备好制胶平板 用琼脂将模具边缘封闭 架好梳回子
2.根据要分离的答样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂凝胶 准确的称取一定量的琼脂糖干粉 加入到合适体积的锥形瓶中 加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE） 放入到微波炉内加热融化 冷却片刻（不烫手即可）
3.融化后的琼脂溶液摇晃混匀 倒入电泳槽中 等其凝固
4.室温下凝固30-40min左右 小心的拔出梳子 取出凝固好的凝胶放入电泳槽内 准备上样
5.在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）没过胶面1mm左右 去除胶孔内的气泡
6.上样 5ulDNA样品加入1ul上样缓冲液（loading buffer）和1ul的染料 用抢混匀后加入到凝胶孔内
.上样结束 接通电源 红色正极 黑色负极 DNA样品有负极往正极运动 加样孔侧为负 40-50v电压 电压30敏左右即可（< 40min）
8.电压结束 关闭电源 凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker判断大小

『伍』 剃度稀释都用蒸馏水还是用溶解溶剂

做胶的TAE当然用双蒸水
如果是槽中使用的电泳缓冲液,单蒸水也可以

『陆』 为什么不可以用蒸馏水配置琼脂糖凝胶

因为配置的琼脂胶主要要求是达到无菌。因此普通的蒸馏水就不合适了。要采用无菌水来进行配置。这样可以防止配置好的琼脂中不会产生杂菌。

『柒』 稀释50*TAE溶液到1*TAE是用蒸馏水还是一般的水

做胶的TAE当然用双蒸水

如果是槽中使用的电泳缓冲液，单蒸水也可以

『捌』 琼脂糖凝胶怎么配制

把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，倒入玻璃杯中，冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。

制成的小颗粒用于凝胶过滤，适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶，也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。

(8)用蒸馏水制备琼脂糖凝胶吗扩展阅读：

琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。

琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成：

作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖，是形成凝胶的组分，其大分子链链节着1，3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基 。而琼脂果胶是非凝胶部分，是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖，也是商业提取中力图去掉的部分。

商品琼脂一般带有2%～7%的硫酸酯，0%～3%的丙酮酸醛及1%～3%的甲乙基。在工业上的琼脂 色泽由白到微黄，具有胶质感，无气味或有轻微的特征性气味，琼脂不溶于冷水，易溶于沸水。

琼脂系选用优质天然石花菜、江蓠菜、紫菜等海藻为原料，采用科学方法精炼提纯的天然高分子多糖物质。

琼脂为亲水性胶体，分有条状和粉末状，不溶于冷水，易溶于热水。琼脂在工业上具有独特的重要性，琼脂的浓度即使低至1%仍能形成相当稳定的凝胶，是食品工业、化学工业、医学科研所必需之原料。

『玖』 在进行琼脂糖凝胶电泳前,用什麽溶液来溶解琼脂糖 A蒸馏水 B自来水 C缓冲液 D甘糖溶液

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