❶ 高效液相色譜純化蛋白質一般都用什麼柱子
色譜柱在HPLC中是非常關鍵的部件.一台色譜儀如果沒有色譜柱幾乎什麼工作也做不了.色譜柱是消耗品,有一定壽命,使用中也非常容易出問題.普通的正相反相色譜柱使用得當可用一、兩年.使用不得當用兩、三個月就可能損壞.所以使用中應該非常注意.
1.
在使用一根新的色譜柱之前,一定要看柱說明書,將柱子的使用壓力、pH值、溫度范圍和所用流動相種類都要弄清楚.接觸最多的是C18色譜柱,它對試劑應用的范圍非常廣,甲醇、水、乙腈、四氫呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各種緩沖鹽都適用.但其他的色譜柱所使用的試劑就有一定的要求,有的色譜柱只能使用水,不能使用有機試劑,有的色譜柱只能使用有機試劑,而且使用指定是某一種,象GPC色譜柱.這些事情一定搞清楚,如果流動相使用不對,柱子很快會損壞.另外在更換柱子時不能讓不能使用的流動相進入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭頭的方向就是流動相流動的方向.當換新柱子時,不要馬上就接到檢測器上使用.將柱子入口處接在進樣器的出口,柱子出口處（即箭頭的一端）先不接檢測器,按箭頭方向垂直朝上,用流動相（甲醇）以1ml/min的流速沖洗1min左右.將柱子里的小氣泡全部趕走以後再接到檢測器上,否則小氣泡跑到檢測池裡,就很難趕走,檢測器產生雜訊信號,基線也就走不好.
3.
關於壓力對色譜柱的影響：常用的正反兩相色譜柱一般耐壓在12～20MPa之間,生產廠家不同,耐壓也不同,從理論上講耐壓高的色譜柱柱效就高,但柱效高低不僅與耐壓的高低有關,還有其他因素.從使用中看,在保證柱效的同時,耐壓不要太高,儀器所顯示的壓力是流路、混合器、自動進樣器、柱壓、流通池總體的壓力,檢查柱壓力應分段檢查.壓力過高不僅柱子受不了,其他的部件也會出問題,例如自動進樣器.
4.
色譜柱對pH值是有一定的使用范圍.以硅膠為擔體的柱子一般使用范圍在2～7pH.
耐鹼性能不太好,流動相的pH大於8會使硅膠溶解.有些分析條件須用鹼性流動相,這時一定要選耐鹼性好的色譜柱,流動相的PH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的.
5.
色譜柱的使用溫度不要超過說明書上規定的溫度.一般使用溫度在60℃以下,典型硅膠基質色譜柱的使用溫度在5℃與60℃之間,高溫使用會縮短柱壽命.
6.
色譜柱使用過程中壓力的驟然波動,溫度的驟然變化或機械撞擊都會對色譜柱床產生影響.進樣過程中,進樣閥轉動太慢引起壓力波動；流速的突然增大都應在日常分析中盡量避免.一般說來,在低柱壓下操作可大大減少由壓力波動造成的柱效損失.這種問題是不可修復的
7.
色譜柱內存在緩沖鹽時,如果用高濃度甲醇或其他有機溶劑沖洗色譜柱,會導致柱內緩沖鹽結晶析出,造成柱壓明顯升高.出現該問題時,反相色譜柱首先應使用20%左右有機溶劑的水溶液低流速沖洗色譜柱,使柱內的鹽全部溶解沖出,再換成高濃度甲醇或其他有機溶劑的流動相.
8.
樣品的預處理,許多樣品,特別是生物樣品與中葯材,其組分復雜,樣品預處理是影響色譜柱壽命的關鍵.樣品經過常規的前處理後,進樣前還需進行以下步驟：a.用微孔過濾膜出除去樣品中的不溶顆粒,以免賭塞柱頭篩板及柱內填充床,使柱壓升高.b.將樣品用流動相溶解或用與流動相互溶的溶劑溶解.
9.
為了保護色譜柱,在色譜柱前接了一個保護柱.保護柱通常是比較短的分析柱,通過吸附可能污染分析柱的強保留雜質,達到保護色譜柱的目的.保護柱的篩板與在線過濾器一樣可以阻擋微粒雜質.為了達到最好的保護效果同時避免導致色譜結果的改變,最好選用與分析柱相同或相似的填料填充保護柱.
10.
色譜柱用合適的溶劑保存,若為C18柱推薦用甲醇保存.在日常分析中,流動相含有的不純物質和樣品中的某些組分會吸附在色譜柱中,隨著分析時間的延長,吸附量會越多,所以柱子要經常清洗,一般柱子使用一兩個星期洗一次,柱子不同清洗的流動相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗這對柱子不好,一般清洗3～4小時,另外色譜柱長時間不用,存放時要將柱子洗干凈,臟柱子放置時間越長,柱效會大大降低.存放時,柱內應充滿溶劑（甲醇或乙腈）,兩端封死.
近幾年化驗室用的液相色譜儀是越來越多,所用色譜柱的種類也越來越多,問題出的也較多,值得注意的是,不論怎樣對色譜柱進行處理,一般都很難恢復到原有水平,因此,大家再使用色譜柱之前一定要看說明書,把以上幾項問題搞清楚後再使用,盡量避免發生如上問題.
❷ 液相色譜能不能用純水沖柱子為什麼
C18柱子不能用純水沖洗,再說本來就堵了,壓力很高應該選擇壓力低的溶劑.如果你確定是回堵塞了,就用純乙腈反沖,先用低答一點的流速,比如01ml/min,看壓力情況,不要超過200bar,再慢慢提高流速,但不要超過1.的流速,如果是真的...
❸ 液相色譜裡面能只用水做流動相嗎
這個得看你的色譜柱。
一般的反相色譜柱不耐純水。如果用的話會特別費。專
我當初做過屬一個實驗，流動相是0.025mol/L的KH2PO4，色譜柱是C18柱，大概半個月換一根吧。
特殊的色譜柱可以耐受純水，但是可能分離效果不好，峰型也不一定好。
另外，純水很 容 易 長微生物。一般純凈水開瓶之後在25℃放置1天，過濾的速度就會緩慢，放三天就渾濁了。如果你的流動相是純水，那麼系統、色譜柱很容易堵塞。所以不建議使用。
❹ 如何有效選擇高效液相色譜柱
使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由於被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最後通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用於化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適於分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數，以高壓驅動流動相，使得經典液相色譜需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鍾內完成。
❺ 純水是否能通過高效液相色譜柱
看是什麼柱子，有一些做糖的柱子就是要求純水做流動相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有機相，以防對色譜柱傷害
❻ 碳十八色譜柱能進水嗎
可以。不知道你說的「進水」是用水做流動相還是用水作為樣品，不過都是可以的。
C18是最常見的回反相色譜答柱。反相的色譜柱都是可以用水作為流動相的。
不過一般來說，至少要有10%的有機相，也就是流動相里最好加入至少10%的甲醇或者乙腈。也有色譜柱的廠家說可以耐受100%的純水相，不過如果用100%的水作為流動相，對色譜柱和的損傷有點大，會減少壽命。
樣品進水溶液就更沒有問題了，流動相那麼大體積的水溶液都可以進柱子，進樣不過幾微升的體積而已，當然也是可以的。
❼ 液相色譜柱merck rp18可以用100%水做流動相嗎
一般是嚴禁用純水做流動相的，對柱子傷害比較大
你可以看看你用來檢測什麼物質，然後根據對應的國標看看流動相是什麼
純水容易把填充物沖塌陷