1. 色譜柱能否用純水沖洗沖洗後會有什麼樣的影響
如果流動相里本來就有水 短時間內沒問題 切成流動相多沖一會兒就沒事了
2. waters c18 5u 250*4.6,純乙睛、10%乙睛、甲醇、純水各作為流動相流量為1ml時,壓力多少正常
一般說來,衡量色譜柱的柱壓高低主要以甲醇為流動相時的柱壓為准。不同的液專相儀柱壓也略有差異。屬
你所提供的色譜柱,一般情況下,以甲醇為流動相,流速為1ml/min時,柱壓在700-900psi,壓差在50psi以下均為正常。
10%乙腈我沒用過,30%乙腈的一般在1500psi左右,10%乙腈應該比它低。
純水可能損壞色譜柱,純乙腈可能堵塞單向閥,不建議使用上述流動相。
3. 離子色譜柱能用純水沖洗嗎,這樣是否會影響柱子的性能。
按看說明書或咨詢色譜柱廠商,防止損害色譜柱,離子柱都不便宜,小心為上。
用純水短時間內沖洗色譜柱,通常不會對色譜柱造成較大的損傷,但如果長時間用水沖洗色譜柱則
可能引起固定相流失和相塌陷現象,所以若非必要請盡量避免用純水沖洗色譜柱,建議在水中加入一定
量的甲醇或乙腈進行沖洗,通常水的含量<90%不會對色譜柱造成任何影響。
原因分析:
首先,由於目前所用的色譜柱大多以硅膠為基質,硅膠的溶解特點是在純水中的溶解度比在含有一
定濃度有機溶劑的流動相中要大得多,所以長時間的用純水沖洗會導致固定相的流失,引起柱效下降。
其次,對於常規的 C18 柱而言,由於C18 長鏈與水是不互溶的,C18 長鏈之間的相互作用力大於
C18 與水分子的作用力,長時間的用水沖洗,使得C18 長鏈之間相互靠近,水流的沖刷,導致相互聯結
的C18 長鏈倒伏在硅膠基質的表面,對疏水性物質的保留能力下降,即相塌陷。針對用純水沖洗容易出
現相塌陷的現象,有些廠家推出了純水柱(如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱),這種純水柱可以用純
水作流動相而不會產生相塌陷,這對只溶於純水的樣品的分析提供了一個很好的選擇。
第三,如使用過含緩沖鹽的流動相的色譜柱,用純水沖洗,並一定能將緩沖鹽完全洗去。因為,由
於緩沖鹽難溶於有機溶劑,C18 反相柱中用的填料是在硅膠表面上接上許許多多的C18 長鏈,相當於一
個疏水的有機相,而硅膠基體被有機物質包裹著,所以用純緩沖鹽水溶液做流動相時也許緩沖鹽不容易
到達硅膠基質,不至損害基體。但所用的流動相通常會含一部分有機溶劑,而且這些有機溶劑與C18
長鏈是互溶的,因此有機溶劑的加入增強了流動相滲入硅膠基質的能力,能使部分緩沖鹽達到硅膠基質。
同樣的道理,用純水沖洗只能洗掉表面的緩沖鹽,而滲入深處的緩沖鹽則仍然殘留在那裡。所以最好在
水中加入部分有機溶劑進行沖洗,一般的C18 柱通常用含水20%~90%都可以,含水的比例要視分析
時使用的流動相來定,原則上,用於沖洗的流動相中水的比例應該等於或高於(緩沖鹽用後清洗的情況,
推薦使用「等於」)分析時所用流動相中水的比例。
4. 在做高效液相時流動相用完,有氣體進入會產生什麼後果
系統的流路中存在氣泡。
由於氣泡的存在,會造成色譜圖上出現尖銳的雜訊峰,嚴重時會造成分析靈敏度下降;氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定,使基線起伏。
造成上述現象的主要原因有三條:一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈;三是在注入樣品時不注意混入了空氣。
為了避免這類問題的出現,液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。
常用的脫氣方法有以下幾種:
1. 吹氦脫氣法 使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣,在0.1Mpa壓力下,以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅除溶解的氣體。此法使用於所有的溶劑,脫氣效果較好,但在國內因氦氣價格較貴,本法使用較少;
2. 加熱迴流法 此法的脫氣效果較好;
3. 抽真空脫氣法 此時可使用微型真空泵,降壓至0.05-0.07MPa即可除區溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質和脫氣的雙重任務。由於抽真空會引起混合溶劑組成的變化,故此法適用於單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣後再進行混合,以保證混合後的比例不變。
4. 超聲波脫氣法 它是目前實驗室使用最廣泛的脫氣方法,將配製好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便,基本能滿足日常分析的要求。
5. 在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串聯到儲液系統中,並結合膜過濾器,實現了流動相在進入輸液泵前的連續真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優於上述幾種方法,並適用於多元溶劑體系。
其二,在液相色譜系統開始工作前,可以用注射器連接恆流泵的排空閥,抽入流動相,將流路中的空氣驅趕干凈。
其三,在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
5. 使用液相色譜進行物質的定性定量分析時,使用流動相時有哪些注意事項
流動相溶劑使用的注意事項 1.
流動相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,清除微粒和灰塵。 在送液泵內,為了防止雜物(固體)進入流路,裝有吸濾器,但網孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過,這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此,建議常用0.45μm濾膜過濾。流動相溶劑須經脫氣,如不脫氣,在溶劑混合時,或壓力溫度變化時容易產生大量氣泡,會導致泵誤動作和輸液不暢,檢測器產生雜訊信號等。 2.
流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時,流動相在恢復到室溫前,基線水平很難穩定,特別是發生漂移,也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時,混合液變化大,往往會與室溫相差很大,務必注意。 3.
做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水,水相流動相需經常更換,防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水(炊用)並不合適、尤其是做梯度洗脫時,水中的不純物會成為鬼峰,從而干擾分析結果。 4.
流動相的pH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的 5.
用緩沖鹽做流動相時,在使用前和使用後都要用水清洗流路,絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時間。 6.
若需要使用含鹽的流動相,使用前請務必過濾。並且使用該含鹽流動相前,色譜柱需先用低比例有機相(有機相含量應不低於10%)的溶液沖洗,以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液,建議現用現配,以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。
6. 那些HPLC色譜柱可以用純水
你問的應該是反相色譜柱,因為凝膠過濾用純水相是司空見慣的。
Agilent的Bonus系列,Aichorm的Aqua系列,都是回可以做純水答相的。
但你如果只是考慮梯度起點的高水相比例,那就不必了,普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗,不超過10個柱體積,是沒什麼問題的。
7. 液相色譜所用流動相使用時應注意哪些問題
1、流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時,流動相在恢復到室溫前,基線水平很難穩定,特別是發生漂移,也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時,混合液變化大,往往會與室溫相差很大,務必注意。
2、做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水,水相流動相需經常更換,防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水(炊用)並不合適、尤其是做梯度洗脫時,水中的不純物會成為鬼峰,從而干擾分析結果。
3、流動相的pH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的。
4、用緩沖鹽做流動相時,在使用前和使用後都要用水清洗流路,絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。
5、在更換兩種互不相容的流動相時,中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如:先用甲醇水做流動相,然後再用正己烷做流動相時,一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水,然後用正己烷沖洗異丙醇,反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。
8. 液相色譜裡面能只用水做流動相嗎
這個得看你的色譜柱。
一般的反相色譜柱不耐純水。如果用的話會特別費。專
我當初做過屬一個實驗,流動相是0.025mol/L的KH2PO4,色譜柱是C18柱,大概半個月換一根吧。
特殊的色譜柱可以耐受純水,但是可能分離效果不好,峰型也不一定好。
另外,純水很 容 易 長微生物。一般純凈水開瓶之後在25℃放置1天,過濾的速度就會緩慢,放三天就渾濁了。如果你的流動相是純水,那麼系統、色譜柱很容易堵塞。所以不建議使用。
9. 液相色譜柱merck rp18可以用100%水做流動相嗎
一般是嚴禁用純水做流動相的,對柱子傷害比較大
你可以看看你用來檢測什麼物質,然後根據對應的國標看看流動相是什麼
純水容易把填充物沖塌陷
10. 純水是否能通過高效液相色譜柱
看是什麼柱子,有一些做糖的柱子就是要求純水做流動相的。但一般的C8或C18柱子不行,要求最少5%有機相,以防對色譜柱傷害