核酸提取儀對純水的要求

A. 核酸提取儀的主要步驟及方法

1. 環境溫度：5℃～40℃；環境相對濕度；電壓：50%~80%范圍：100～240Vac，50/60 Hz。
2. 將儀器放在水平實驗台上。
3. 放置儀器時應保證儀器周圍10cm內無障礙物；多台儀器同時使用時，每台儀器之間的距離應不小於50cm。
4. 儀器主機通電之前，必須先用六角扳手取下磁棒架固定螺絲，否則通電運行將會損壞儀器。
5. 96孔板和磁力棒套的安裝必須與對應的卡槽完全契合。
6. 請勿將該儀器安放在過度潮濕、高溫或陽光直射等溫度變化劇烈的區域，這可能會影響儀器的性能。
7. 請勿和其它大功率器件如離心機、空調等共用同一電源插座以免電源電壓波動影響系統運行。
8. 請將適配器連接到儀器，把適配器與電源插座相連，並打開儀器開關。
9. 請勿在有潛在有害液體或氣體的環境中操作該儀器。
10. 本儀器詳細操作步驟，請參閱以下的說明。
1.5注意事項
1. 儀器應放在濕度低、灰塵少並遠離水源的地方，室內應通風良好，儀器後方勿緊靠牆壁或堆放其他物品，以免影響散熱。
2. 實驗運行過程中禁止直接關閉電源開關。如果需要提前停止實驗，請先在觸屏軟體上點擊停止運行並確認後再關閉電源。
3. 裂解孔、洗滌孔和洗脫孔的樣本體積應在50μL-1000μL，避免體積過多，溢出孔位。
4. 機器運行及測試進行時，請勿觸摸加熱條，以免燙傷。
5. 紫外燈開啟滅菌時，請勿直視紫外光。
6. 移動儀器之前，請先切斷電源，再用螺釘固定磁棒架。
7. 儀器長期不使用時，請拔掉插頭，並用軟布或塑料袋覆蓋儀器，以防止灰塵進入。
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B. 生化儀純水設備對進水水質有哪些要求

生化儀純水設備根據市場要求及客戶需求，保障生化儀及醫院用水安全，集內合精湛的工藝配置組合設計而成，容最終符合中國葯典GMP認證要求。生化儀純水設備反滲透膜受到污染的主要原因是由金屬氧化物沉積引起的，常見的有氫氧化鐵、氫氧化鋁、氫氧化錳等，還有微生物粘泥、水中的懸浮物與膠體物質在膜表面的沉積，以及碳氫化合物和硅酮基的油及脂類覆蓋膜面，其特徵為產水量增加或鹽透過率增加或壓差降增加。生化儀純水設備對進水水質要求如下：

為了使生化儀純水設備反滲透設備裝置運轉正常，取得預期的效果，在水進入反滲透設備裝置之前，應當進行必要的預處理，以滿足裝置對進水水質的要求。

以上就是小編為大家介紹的全部內容，生化儀純水設備反滲透主機應在以上原水條件下運行，檢查你的原水是否在此限度內是很重要的，不符合此標准將會導致膜組元件的永久性不可恢復的污染和損壞，因此種情況而導致的膜污染和損壞不在系統的保質范圍。

C. 核酸提取儀原理

1. 根據儀器型號大小不同劃分 [1] 
1) 自動液體工作站
自動液體工作站是功能非常強大的設備，液體分液、吸液等自動完成，甚至能通過整合擴增、檢測等功能，實現標本提取、擴增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用，不太適合常規實驗室提取核酸，一般都應用在單一類標本並且一次提取標本量非常大(至少96個，一般幾百個)的實驗需求上。自動工作站的平台建立及平台的運作，需要比較大的資金。
2) 小型自動核酸提取儀
小型的自動化儀器是通過運行結構的特殊性來達到自動提取核酸的目的，可以在任何實驗室得到應用。
2. 根據提取原理不同劃分
1) 採用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要採用離心機和自動移液裝置相結合的方法，通量一般在1-12個樣本，操作時間和手工提取差不多，並不能提高實際工作效率，且價格昂貴，不同型號儀器的耗材也不能通用，僅適合經費充足的大型實驗室使用。
2) 採用磁珠法的儀器
以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高PH值下與核酸分離的原理，再通過移動磁珠或轉移液體來實現核酸的整個提取純化過程。由於其原理的獨特性，所以可設計成很多種通量，既可以單管提取，也可以提取8-96個樣本，且其操作簡單快捷，提取96個樣本僅需30-45min，大大提高了實驗效率，且成本低廉，因而可以在不同實驗室使用，是目前市場上的主流儀器。

磁珠法核酸提取儀的基本原理
磁珠法核酸提取儀一般分為抽吸法和磁棒法兩種 [2]  ：
1. 抽吸法，也叫移液法，是通過固定磁珠、轉移液體來實現核酸的提取，一般通過操作系統控制機械臂來實現轉移。提取過程如下:
1) 裂解：在樣品中加入裂解液，通過機械運動及加熱實現反應液的混勻及充分反應，細胞裂解，釋放核酸。
2) 吸附：在樣品裂解液中加入磁珠，充分混勻，利用磁珠在高鹽低PH值下對核酸具有很強親和力的特點，吸附核酸，在外加磁場作用下，磁珠與溶液分離，利用吸頭將液體移出棄至廢液槽，吸頭棄掉。
3) 洗滌：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗滌緩沖液，充分混勻，去除雜質，在外加磁場作用下，將液體移出。
4) 洗脫：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗脫緩沖液，充分混勻，結合的核酸即與磁珠分離，從而得到純化的核酸。

D. 核酸提取或純化技術主要有哪幾類

核酸提取或純化技術主要有三類：

1、傳統方法（操作復雜，耗時長）

2、離心柱法（試劑盒）

3、磁珠法（可單獨采購磁珠或買成品試劑盒）

其中，磁珠法可實現自動化操作，是目前比較主流的方法。

核酸提取應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

(4)核酸提取儀對純水的要求擴展閱讀：

核酸提取的注意事項：

1、儀器的安裝環境：正常的大氣壓(海拔高度應該低於3000m)、溫度20-35℃、典型使用溫度25℃、相對濕度10%-80%、暢通流入的空氣為35℃或以下。

2、避免將儀器放置在靠近熱源的地方，如電暖爐；同時為防止電子元件的短路，應避免水或者其他液體濺入其中。

3、進風口和排風口均位於儀器背面，同時避免灰塵或纖維在進風口聚集，保持風道的暢通。

4、核酸提取儀離其他豎直面至少10cm。

5、儀器接地：為了避免觸電事故，儀器的輸入電源線必須接地。

6、遠離帶電電路：操作人員不得擅自拆解儀器，更換元件或進行機內調節必須有持證的專業維修人員完成，不要在接通電源的情況下更換元件。

E. 核酸pcr步驟

一、個人三級防護穿戴

帶一次性帽子、佩戴醫用N95、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性隔離衣、防護目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢後應盡快通過專用緩沖間或者走廊，進入核酸提取區（專業核酸提取實驗室）。


二、樣本滅活處理

核酸檢測須有兩名工作人員快速通過進入實驗室，進行滅活實驗操作。生物安全櫃內需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水檯布，對樣本溢灑時進行緊急處理；打開二級容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測樣本管密閉性後進行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，恆溫樣本滅菌儀等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全櫃內。

三、手工核酸提取

操作人員進入試劑配置區或者單獨的潔凈實驗室。

一、試劑區准備

根據說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計入無水乙醇後及時做好標記，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，並顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而後通過傳遞窗傳送到樣本處理區，或者由專人送到核酸提取實驗室中。

二、樣本的裂解

用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已滅活的待提取核酸的待測樣本，渦旋振盪15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。裂解完成後，加入560μl無水乙醇，振盪混勻15s，將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。

向離心柱加入裂解產物630μl，8000轉離心1min，若離心機在生物安全櫃之外，每次使用都需進行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機中小心取出離心柱，將上層離心柱轉移到新收集管中，繼續將剩餘裂解產物630μl加入離心柱中，若樣本體積大於140μl時需重復此步驟，直到全部裂解產物都過柱離心，8000轉離心1min，小心將離心柱轉移到新的收集管中。

取500μl AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內壁緩慢加樣），8000轉離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。

取500μl AW2加入離心柱中，14000轉離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置於離心機中使用最大轉速離心1min，以確保將AW2中的殘液完全離心干凈。

取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。

室溫靜止1min，將其放入離心機中8000轉離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標記與登記。

四、用儀器提取核酸

首先按照說明說准備核酸提取試劑，將200μl滅活樣本添加到核酸提取試劑中，根據核酸提取儀的設置程序上機提取核酸，等儀器操作結束，提取核酸完成，回收核酸。

五、PCR體系配置

根據檢測樣本數量配製體系，將配製好的PCR體系充分混勻並離心後，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區，或單獨的樣本加樣實驗室。按照每孔分裝20μL反應體系，進行分裝，在各孔分別加入5μL待測樣本核酸或陰陽對照物（請注意每次檢測器包含1個陽性對照和3個陰性對照且陰性對照需隨機分布），密封PCR管，有條件時模板加樣盡量在單獨的生物安全櫃進行。

工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴增區，或由專人送至PCR擴增實驗室，上機檢測。

六、上機檢測及結果分析

工作人員進入基因擴增分析實驗室，從傳遞窗取出PCR反應管，上機前需混勻並離心反應體系，按試劑盒說明說設置擴增參數並分析判讀結果。分析結果時，嚴格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學局限性等綜合判讀實驗結果。

為防止擴增污染，反應結束後的PCR擴增管嚴禁開蓋並裝入密封帶中裝入指定的垃圾桶中。

七、檢測後的消毒處理

樣本處理完成後，工作人員應用75%的酒精消毒處理外層手套並脫下外層手套，放入生物安全櫃中的生物垃圾桶中。檢測完成後，生物安全櫃檯面和地面應用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進行擦拭。將安全櫃內產生的醫療垃圾用三層垃圾袋密封，並將其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需標記醫療垃圾信息。實驗結束後，生物安全櫃以及實驗室均要進行紫外燈照射消毒，時間至少30min。

實驗操作人員，應有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對一次性隔離衣均勻噴霧消毒處理，而後脫去隔離衣將檢測醫用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級實驗室後，應在緩沖區或走廊按順序摘脫個人三級防護用品，首先應帶新的外層手套，摘掉護目鏡並置於75%乙醇中消毒，自上而下、自內向外翻轉脫掉一次性防護服，脫去外層手套，摘除、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，病毒防護服均需進行高壓滅菌處理。高壓前後醫療垃圾嚴格區分。

病毒相關垃圾需在120度，30min條件進行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而後作為普通醫療垃圾處理。

F. 基因測序，pcr對純水有什麼要求

PCR產物直接測序技術現已成為分子生物學和基因組學研究中的一個重要技術,廣泛用於基因突變檢測、遺傳性疾病診斷、單核苷酸多態性研究、基因組重疊序列群等.與傳統克隆測序技術相比較,直接對PCR擴增的DNA進行測序,省去了耗時的克隆步驟,避免了傳統的細菌培養,模板提取等重復性操作,可以從少量的原始樣品中得到正確的DNA序列信息.PCR產物直接測序技術具有快速、簡便、穩定經濟的優點. 試驗試劑 PCR擴增的雙鏈DNA模板長約20個核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶測序膠 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 測序反應緩沖液：40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 終止緩沖液：95% 甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚藍,0.05% 二甲苯腈試驗步驟： 1、 4個微量離心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC溫浴5min,備用. 2、 在一個空的微量離心管中加入1pmol的PCR擴增雙鏈DNA,10pmol測序引物,2μl 5×測序緩沖液,加雙蒸水至總體積10μl,96OC加熱8min,冰浴泠卻1min,4OC 10000g離心10s. 3、 加入2μl預冷的標記混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,測序酶2U,加水至15μl,混勻後置冰上2min,標記新合成的DNA鏈. 4、 在第1步驟的4個管中各加入3.5μl標記反應混合物,37OC溫浴5min.每管各加入4μl終止液. 5、 樣品在80OC的水浴中熱變性5min,每一泳道加2μl 加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1.?PCR產物要有一定的長度(>200bp),因為測序結果兩端20-30bp的電泳峰圖的准確性較低. 2.?純化PCR產物可通過離子交換層析使擴增的DNA段與反應剩餘的dNTP及引物分離；也可通過瓊脂糖凝膠電泳,將PCR產物與非特異性擴增產物和引物分離開來；如果擴增的特異性較高時,可直接通過酚：氯仿抽提,乙醇沉澱的方法來純化. 3.?測序引物設計原則類似於PCR引物設計,可在DNA合成儀上合成20個左右的核苷酸作為引物,經過高壓液相層析或聚丙烯醯胺凝膠電泳純化後,即可用作測序引物. PCR循環測序法 PCR循環測序法是將PCR擴增和核酸序列分析技術相結合,從而形成的一種測定核苷酸序列的研究方法,也稱作線性擴增測序.該方法採用PCR儀加熱使DNA模板變性,在TaqDNA聚合酶作用下,以溫度循環模式在模板上進行多輪的雙脫氧核苷酸測序反應,線性擴增標記的DNA分子. PCR循環測序法與以往的測序方法相比,其優點在於：大大減少所需的模板量；能提高測序反應產生的信號,降低了操作的復雜性,且聚合酶的用量減少；可在小量制備的模板上進行篩選反應；高溫下進行的測序反應使DNA聚合酶催化的聚合反應能夠通過模板二級結構的區域；雙鏈閉環DNA可以直接作為反應模板應用,不用作預先鹼變性處理.由於PCR循環測序法能夠簡單、快速地檢測特定序列,因此, PCR循環測序法在核酸序列分析研究中受到廣泛的重視. 試驗試劑： DNA測序試劑盒 dNTP ddNTP 丙烯醯胺雙丙烯醯胺尿素 TEMED(N,N,N『,N』-四甲基乙二胺) 過硫酸銨 6%測序膠：6%丙烯醯胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×測序緩沖液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明膠,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 終止混合液：ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 終止緩沖液：95%甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚藍,0.05%二甲苯腈試驗步驟 1、 4個小離心管,每個小管加入3μl的終止混合液,將管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×測序緩沖液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加雙蒸水到30μl徹底混勻,每管7μl加入上面4個小管中. 3、 反應液上加30μl的石蠟油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30個循環,可根據具體的情況進行適當的調整循環條件及循環次數. 5、 反應結束後在油層下加入5μl的終止緩沖液並用加樣槍混勻. 6、 上樣前將樣品在大於80OC的水浴中熱變性5min,每一道加2μl加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1、 制備測序模板：PCR 擴增的產物可以經過低熔點的瓊脂糖凝膠電泳純化回收後,用於序列分析；可經過柱層析純化,去除PCR 反應後剩餘的dNTP和引物後,用於序列分析.PCR 產物也可不經純化直接用於測序,但是這種測序產生的結果較差,建議測序之前應進行PCR產物的純化.各種標準的質粒制備方法所純化出的質粒均可作為測序模板使用.用標准方法制備的M13噬菌體、粘粒、λDNA都適合用作測序模板用.但要注意的是反應體系中不應有與引物互補的非目的基因序列,否則將會導致測序實驗的失敗. 2、 測序引物：測序引物是指合成的與測序模板鏈特異性互補的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶對引物的5『端進行標記,反應體系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的標記引物；也可用α-32P-dATP標記新合成的DNA鏈.引物的濃度不宜高,否則容易形成引物二聚體,或產生非特異性的擴增引物. 3、 酶：各種缺乏3『—5『端外切活性的耐熱DNA聚合酶都可以用於循環測序,其中TaqDNA聚合酶在DNA測序中最為常用.雖然應用PCR循環測序法能夠簡單、快速的進行基因序列的測定,但仍未能適應大規模DNA序列測定的需要,而PCR循環測序法、熒游標記和自動測序儀的聯合使用成為大規模基因組測序的主要技術.該技術是採用熒游標記引物或雙脫氧核苷三磷酸,反應產物經聚丙烯醯胺凝膠電泳後,經特定的DNA序列分析儀和分析系統處理待測的DNA序列.它的應用減輕了DNA序列測定的工作量,提高了測序的效率.

G. PCR實驗室的都需要什麼設備

PCR實驗室可分為樣品制備、核酸擴散、產物分析3大區域，每個區域所用的設備不同，下面就給大家詳細介紹一下PCR實驗室每個區域都需要什麼設備？

樣品制備區：

生物安全櫃 ：防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散

樣本低溫冰箱：零下20攝氏度，-80℃ 保存樣本及DNA

高速台式冷凍離心機：收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉澱物。 有些樣品由於在常溫下不太穩定，需要低溫環境

水浴鍋或者金屬浴：用於DNA雜交過程中水浴控溫

移液器：准確量取特定體積溶液

紫外燈或者消毒車：空間環境消毒

混勻儀：移取樣本前需要混勻

超凈工作台：涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成

低溫搖床：用於大腸桿菌和酵母菌的振盪培養

磁力攪拌器：加速溶解固體內容物

核酸擴散區：

基因擴增儀：基因檢測DNA/RNA擴增

熒光定量PCR儀：核酸定量分析

核酸提取儀：樣品DNA/RNA提取

移液器：准確量取特定體積溶液

紫外燈或者消毒車：空間環境消毒

超凈工作台：涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成

純水裝置：用於PCR,DNA測序需要超純水

產物分析區：

電泳儀：水平電泳用於核酸DNA/RNA檢測，垂直電泳用於蛋白檢測，轉印電泳用於將蛋白轉移到膜上做weatern檢測

凝膠成像系統/紫外檢測儀：用於核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙醯胺的觀察和拍照；紫外分析儀用於染色後核酸瓊脂電泳膠觀察，不能連接電腦

電爐：電泳瓊脂凝膠加熱融化

H. 核酸檢測實驗室主要儀器有哪些

1、核酸提取儀
核酸提取儀是實驗室的必備儀器，應用配套的核酸提取試劑能夠自動完成樣本核酸的提取工作。核酸提取儀是通過磁珠提取法研製出來的一種高通量、高靈敏度的自動核酸純化提取設備。可以利用機器磁棒架上的磁棒，將吸附有核酸的磁珠移動至不同試劑孔內，經過細胞裂解、核酸吸附、清洗與洗脫等處理，即可得到高純度的核酸。

2、離心機
離心機也是實驗室最基本的儀器，主要是血液離心和DNA、RNA樣品核酸提取時用。這里推薦湖南可成離心機。

迷你離心機可使用可成Super MiniStar迷你離心機，微型離心機外觀新穎獨特，靈巧多用，配備兩種離心轉子和多種試管套，適用於1.5ml、0.5ml、0.2ml離心管和PCR用0.2ml,8連排離心管。
台式高速離心機使用可成台式高速離心機1-16K，該機型體積小，佔用空間小，微機控制，配微量轉子，離心速度上升快，離心效率高，常用於DNA樣品核酸提取。
台式低溫高速離心機可用可成台式高速冷凍離心機 1-16KR，此機型體積小巧，設計緊湊，進口高能效環保製冷系統，具有優良的溫度控制性能，製冷快，是RNA樣品核酸提取的理想選擇。
台式低速離心機推薦使用可成台式低速離心機4-5N，此機型採用無碳刷變頻電機，操作寧靜噪音低，可快速分離血清。且離心腔內設有獨立紫外線滅菌裝置，能使細菌、病毒喪失生存力及繁殖力進而消滅細菌、病毒，達到消毒滅菌成效。

I. 全自動核酸提取儀介紹.

全自動核酸提取儀介紹：全自動核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

上海旦鼎國際貿易有限公司是實驗室配套儀器和生命科學儀器的專業提供商。公司NP968全自動核酸提取儀是使用通用磁珠法提取核酸的高科技產品，具有自動化程度高，提取速度快，結果穩定，操作簡便的優點。利用一般生化專用的96孔反應盤，可同時操作1-32個樣品，可廣泛應用於常規科研、基因組學、疾控系統、食品安全、法醫等領域。使用本儀器只需加入樣品與以磁珠為載體的全自動核酸提取試劑於96孔專用反應盤中，選擇或編輯適當程序後執行即可。搭配不同種類的磁珠核酸試劑組，可以快速提取動植物組織、血液、體液、刑事檢體等樣品中的DNA和RNA。