㈠ 多糖分離純化—離子交換層析和柱層析
多糖,與蛋白質一樣,對生命過程起著關鍵作用,其復雜結構直接決定了其特性和功能。要深入理解多糖,分離純化步驟至關重要。其中,離子交換層析和凝膠層析是常用的手段。
離子交換層析在多糖純化中應用廣泛,其根據多糖特性,選擇合適的陽離子、陰離子或硼砂交換劑,如DEAE cellulose、DEAE Sephadex(葡聚糖)、DEAE Sepharose(瓊脂糖)系列。以DEAE cellulose-52為例,它作為陰離子交換柱,其填料二乙氨乙基纖維素帶有正電荷,能有效分離中性和酸性多糖,如果膠,通過鹽溶液洗脫,中性糖先被洗脫,陰離子多糖隨後。通過檢測洗脫液糖含量,形成洗脫曲線,實現不同多糖的分離。
相比之下,凝膠層析則側重於分子量的分離。其原理是利用分子篩特性,大分子先流出,小分子後流出,如Sephadex G系列填料,如G-15、G-25用於寡糖分離,G-100和G-200則適用於大分子多糖。通過觀察洗脫曲線,可以精確收集不同分子量的樣品。