『壹』 如何正確保存液相色譜柱
1.短期保存色譜柱
反相色譜柱每天實驗後的保養:
使用緩沖液或含緩沖鹽的流動相,實驗完成後應用20-30柱體積的甲醇或乙腈和水的50:50混合物進行沖洗。如需過夜保存,可將流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
其他色譜柱的短期放置,同樣應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗) ,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
2.長期保存色譜柱
如色譜柱要長時間保存,必須存於合適的溶劑下。對於反相柱可以儲存於純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存於嚴格脫水後的純正己烷中,離子交換柱可以儲存於水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,並將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。特殊類型色譜柱的儲存,需參考色譜柱說明書,使用廠商推薦的溶劑。
『貳』 怎樣正確使用磺酸基陽離子交換鍵合硅膠柱
離子交換鍵合柱我們第一次應用時用純水平衡後應用就可以了內,分析完樣品我們容一般將他保存於迭氮鈉中,不過迭氮鈉不好購買哦!!
一般硅膠基的用疊氮化鈉的水溶液,聚合物基的用PH=2左右的硫酸處理。千成別用有機相,用完記得用與柱子購來時裡面充滿的酸濃度相當的酸沖洗 。購買色譜柱應帶有使用說明書,應仔細閱讀後,在使用。磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱不能用純水洗,使用完後應用磷酸鹽緩沖液沖洗短時間保留也可用磷酸鹽緩沖液。
『叄』 磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱,怎樣維護保養及活化
首先在開始使用系統以前檢查柱子有否微生物生長,否則柱子會堵塞,柱壓會升高到無法接受的水平。然後,不接檢測器,正向安裝色譜柱,使用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積。
再連接檢測器,用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
然後使用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
最好再確保連接好保護柱(多使用相應柱製造商針對性提供的保護柱),再用選用的洗脫液以0.6ml/min流速平衡1h以上,進樣檢測。同樣,若洗脫液中含有緩沖鹽類,在用分析洗脫液平衡之前,先用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩沖鹽在分析柱內析出。
特別注意:
①洗脫液要求是新制的緩沖液。對於陽離子交換柱,多用檸檬酸或酒石酸緩沖液(或其混合溶液)、鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5;對於陰離子交換柱,多用磷酸緩沖液、硝酸銨溶液(1mMol/L),鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5。絕對禁止使用水楊酸緩沖液,因水楊酸分解產物會改變固定相的性質。洗脫液在使用以前必須用0.45um濾膜過濾並徹底脫氣,以防止發生檢測和泵送問題。
②提倡在室溫環境使用,為了提高分析的穩定性,可以設置高於室溫5~10℃的柱溫,最好不要在40℃以上使用。
③使用過程中不要超過其耐受最高壓力。
④增加流速或者降低流速要採取小的間隔變化以防止柱床的擾動。更換柱子,必須先降低流量至0,等待洗脫液完全流出柱子,壓力變化到0(約2min)後再更換。
⑤必須防止將來自流動相或者樣品中的疏水性或與流動相極性差別很大的化合物進入色譜柱,特別地,要絕對禁止導入顆粒雜質,以防止操作壓力增高,污染物難以或者不能去除。
(6)分析完畢,凈化程序基本同C18柱,先用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。然後用甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積,純甲醇飽和後密封保存即可。(注意:一定要確保在柱子內沒有緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下保存色譜柱。)
(7)長時間保存後重新使用,重復上述(1)~(6)即可。