細胞培養基濃縮需要超濾離心管

㈠ 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。

㈡ 病毒純化，這些方法簡單快捷一篇就懂

新型冠狀病毒感染的肺炎疫情持續嚴峻，科研工作者致力於病毒分離與抗病毒葯物的開發。病毒純化是研究工作的關鍵步驟之一，以下介紹簡便快速的病毒純化流程，旨在為病毒研究提供幫助。

首先，破碎被病毒感染的細胞釋放病毒。方法有冷凍-融化、勻漿、超聲破碎或酶解，其中，需去除宿主核酸以保持病毒得率。Benzonase®核酸酶能夠高效降解DNA和RNA，降低病毒損失。

其次，通過膜過濾澄清上清液，去除細胞碎片等雜質。默克的Millex®針頭式濾器配備PVDF或PES膜，適用於病毒純化，避免病毒損失。另外，Steriflip®過濾器的使用能夠簡化操作流程，提升安全性與效率。

對於病毒的後續純化，採用離子交換或凝膠過濾等方法去除殘余雜質，離子交換法操作簡便，而凝膠過濾條件溫和、回收率高，適合特異性強、雜質含量不高的病毒。

濃縮病毒的步驟中，超濾法成為首選，可同時實現濃縮與換液，操作簡便快捷。默克提供包括Amicon® Ultra、Centricon® Plus-70與Amicon® stirred cells在內的一系列設備，滿足不同需求。

最終，病毒樣品通過0.22μm孔徑微濾去除細菌，推薦Ultrafree® 系列微濾離心管，減少損失，操作簡便，樣本回收率高。

這些流程涵蓋了病毒純化的關鍵步驟，旨在助力病毒研究與抗病毒葯物的開發，加速疫情對策的步伐。

更多產品信息與應用實例，敬請訪問默克官方網站或關注益啟生物公眾號了解更多。

㈢ 超濾離心管可以滅菌嗎

1、可以用70%的酒精消毒
2、如果是高溫高壓滅菌,要注意滅完菌後,管裡面的超濾膜是處於濕潤的狀態,所以需要立即使用,因為膜濕潤後就不能幹

㈣ 怎樣提取上清液用western blot測定上清液中細胞分泌的蛋白

這個還是有難度的，一般上清里分泌的目的蛋白很少。所以首先建議您用無血清培養基培養你的細胞。 收集上清比較簡單，直接把上清收到離心管里，離心一下去掉細胞什麼的，再用超濾管濃縮一下上清，不然的話上清還是太稀了。。

㈤ 超濾管分子量怎麼算

1/3。超濾管為了得到高收率，所選濾膜的截留分子量MWCO選擇所需截留分子大小的1/3，不超過目標分子量的一半。因此超濾管分子量所需截留分子大小的1/3這樣來計算。超濾離心管常用於悶鄭做細胞培養上清的蛋白濃縮的實驗，它會有內管和外管的兩個部拍罩或分，內管中是帶有一定分子量的膜，當高速離心時，分子量襲伍比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了，分子量比它大的就截留在上面（即內管中），這就是超濾的原理。

㈥ 如何用蛋白濃縮管

選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。

通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

(6)細胞培養基濃縮需要超濾離心管擴展閱讀：

超濾濃縮離心管，最新推出專利產品Hydrosart膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。

備有四種材質的超濾膜：聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取並回收，又可將離心管放入離心機反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收；

㈦ 超濾離心管如何選擇以及使用方法

超濾離心管在蛋白質、DNA和生物分子的濃縮、純化和脫鹽過程中被廣泛應用。選擇和使用超濾離心管時，需要理解其與微濾的區別。

微濾（Microfiltration）利用微孔膜介質去除溶液中尺寸為0.1 μm至10.0 μm的顆粒或生物體，廣泛應用於生物制葯預過濾和除菌過濾。微濾在細胞實驗中常用於樣品和培養基滅菌，以及從細胞裂解物中去除完整細胞和碎片，確保下游應用結果准確性。

超濾（Ultrafiltration）通過壓力或濃度梯度使料液通過半透膜進行分離，能截留尺寸范圍為1-1000kDa的分子，並允許鹽和水等小分子通過。它廣泛應用於蛋白質溶液的分離和純化，以及核酸樣品制備，如分子克隆和質粒純化。與沉澱法相比，超濾更為溫和，避免生物大分子失活。

超濾離心管是一種利用離心力驅動溶液通過超濾膜進行快速濃縮、滲濾和緩沖液置換的裝置，由蓋子、過濾裝置和離心管組成。通過選擇適合的膜孔徑，可進行除熱源、澄清和分離大分子污染物，或濃縮和脫鹽目標分子。

選擇超濾離心管時，需考慮樣品起始量及超濾膜的截留分子量（MWCO）。樣品體積決定離心管尺寸，而截留分子量則需根據目標大分子的分子量選擇，通常選擇比目標分子小2-3倍的膜。

使用超濾離心管涉及准備、加樣、離心和回收步驟。准備階段需沖洗設備以消除甘油殘留，然後在離心前加入適量純水或緩沖溶液。離心前確保離心機轉子平衡，以保持穩定。回收時，從過濾裝置或離心管中輕輕提取樣品，注意不要接觸或損壞超濾膜。

遵循上述步驟，正確選擇和使用超濾離心管，將有效實現蛋白質、DNA和生物分子的高效濃縮、純化和脫鹽，為科學研究和工業應用提供可靠支持。