強陽離子交換柱填料

㈠ 一篇看懂液相色譜柱的分類、選擇及維護！

液相色譜柱的分類及選擇與維護是進行高效液相色譜分析的關鍵。

一、液相色譜柱的分類

按照色譜固定相基質，液相色譜柱可以分為以下幾類：

1. 硅膠基質

1.1 反相色譜柱：使用以硅膠為基礎，表面鍵合有弱極性官能團的鍵合相。流動相通常為水、緩沖液與甲醇、已腈等混合物。樣品流出順序為極性強的先被沖出，極性弱的後被沖出。

1.2 正相色譜：使用硅膠作為固定相，其他具有極性官能團的鍵合相填料。流動相極性相對較低。分離順序依據樣品中各組分極性大小。

1.3 離子交換色譜柱：使用磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，如強陰離子色譜柱(SAX)和強陽離子交換色譜柱(SCX)。

2. 聚合物基質

聚合物調料如聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，優點是在PH值為1～14均可使用，對大分子物質分離有效。

3. 其他無機填料

如石墨化碳、氧化鋁等，具有特殊性質，適用於特定用途。

二、色譜柱的選擇

液相色譜柱的選擇主要依據分析物的性質，如硅膠基質填料用於小分子量物質，聚合物填料用於大分子物質。

三、色譜柱的維護

1. 色譜柱的平衡：使用甲醇或乙腈沖洗色譜柱，確保分析樣品流動相與沖洗溶劑互溶。

2. 色譜柱的再生：長期使用後柱效下降，可進行再生處理。

3. 色譜柱的維護：使用預柱保護分析柱，避免流動相組成及極性的劇烈變化，使用前經脫氣和過濾處理。

㈡ 多肽的合成過程

具體合成由下列幾個循環組成： 分析HPLC使用柱子和泵系統，可以經受傳遞高壓，這樣可以用極細的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鍾內高度被分析。HPLC分兩類：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過可變PH， 離子強度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強度的溶液，以後逐漸加強或一步一步加強，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離。
反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上，用降低離子強度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構成，這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由於洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的， 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實踐中， 這兩類柱互變無多少顯著差別，別類載體由碳水化合物構成， 比如苯基。
典型的操作常由兩綬沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鍾0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那麼大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點：硅反相柱料不能長時間暴露於高pH，甚至微鹼pH， 因為這樣會破壞柱子。
不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%， 而肽含量相關帶電基團（如Arg, Lys ）的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。

㈢ 多肽固相合成法HPLC分析和純化

在多肽固相合成後的HPLC分析和純化過程中，關鍵的步驟是使用高壓液相色譜技術。這種技術依賴於柱子和泵系統，它們能夠承受高壓，允許使用微粒（3-10微米）作為填料。這樣，幾分鍾內，多肽就能得到高度的分析效果。

HPLC主要分為離子交換和反相兩種類型。離子交換HPLC基於多肽和固相之間的電荷相互作用，柱子在特定pH范圍內帶有特定電荷，與帶有相反電荷的多肽或混合物發生分離。通過調整pH值、離子強度或兩者，多肽可以通過洗脫步驟從柱子上分離，通常先用低離子強度溶液，然後逐漸增加強度。一個例子是使用強陽離子交換柱，如sulfoethylaspartimide在酸性環境中進行分離。

反相HPLC則以疏水作用為基礎，多肽通過疏水性連接到柱子上，用降低離子強度的洗脫劑（如增加洗脫劑的疏水性）進行分離。常見的柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構成，鏈長通常在G4-G8個碳原子。分離過程中，疏水性越大，使用短鏈柱子對大疏水肽更有效。盡管如此，離子交換和反相柱在實際應用中區別不大，其他載體如碳水化合物（如苯基）也被廣泛使用。

操作過程中，常用的流動相由0.1% TFA-H2O和80% acetonitrile（0.1% TFA-H2O稀釋的acetonitrile）組成，以線性梯度混合，速度每分鍾0.5%到1.0%。常見的柱子規格為4.6×250mm（3-10μm）和22×250mm（10μm），徑向填柱則為8×100（3-10μm）和25×250mm（10μm）。

緩沖劑的選擇多種多樣，包含如heptafluorobutyric酸、0.1%磷酸、稀He formic酸（pH 2-4）、10-100mM NH4HCO3、醋酸鈉/氨、TFA/TEA、磷酸鈉或鉀、異戊酚等。通過組合這些試劑，形成不同的緩沖劑，但需要注意的是，硅反相柱材料不能長時間暴露於高pH或微鹼性環境，以免柱子受損。

在Fmoc-氨基酸的制備和側鏈保護階段，Fmoc基團在二氧六環溶液（含有NaHCO3或Na2CO3）中形成，理想的側鏈保護基在鹼性條件下穩定，酸性條件下可脫除。

多肽固相合成法——英文解釋： solid phase peptide synthesis 簡寫為SPPS。在肽合成的技術方面取得了突破性進展的是R.Bruce Merrifield，他設計了一種肽的合成途徑並定名為固相合成途徑。由於R.BruceMerrifield在肽合成方面的貢獻，1984年獲得了諾貝爾獎。

㈣ 怎樣查找usp葯典上使用的色譜柱

根據下面色譜柱系列的編號，就可以在USP葯典上查到需要的色譜柱：
L1：十八烷基鍵合多孔硅膠或無機氧化物微粒固定相，簡稱ODS柱 L2：30～50mm表面多孔薄殼型鍵合十八烷基固定相，簡稱C18柱 L3：多孔硅膠微粒，即一般的硅膠柱 L4：30～50mm表面多孔薄殼型硅膠柱 L5：30～50mm表面多孔薄殼型氧化鋁柱 L6：30～50mm實心微球表麵包覆磺化碳氟聚合物，強陽離子交換柱 L7：全多孔硅膠微粒鍵合C8官能團固定相，簡稱C8柱 L8：全多孔硅膠微粒鍵合非交聯NH2固定相，簡稱NH2柱 L9：強酸性陽離子交換基團鍵合全多孔不規則形硅膠固定相，即SCX柱 L10：多孔硅膠微球鍵合氰基固定相（CN），簡稱CN柱 L11：鍵合苯基多孔硅膠微球固定相，簡稱苯基柱 L12：無孔微球鍵合季胺功能團的強陰離子交換柱 L13：三乙基硅烷化學鍵合全多孔硅膠微球固定相（C1），簡稱C1柱 L14：10mm硅膠化學鍵合強鹼性季銨鹽陰離子交換固定相，簡稱SAX柱 L15：已基硅烷化學鍵合全多孔硅膠微球固定相，簡稱C6柱 L16：二甲基硅烷化學鍵合全多孔硅膠微粒固定相 C2柱 L17：氫型磺化交聯苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,強陽離子交換柱 L18：3～10mm全多孔硅膠化學鍵合胺基（NH2）和氰基（CN）柱 L19：鈣型磺化交聯苯乙烯－二乙烯基苯共聚物，強陽離子交換柱 L20：二羥基丙烷基化學鍵合多孔硅膠微球固定相（Diol），簡稱二醇基柱 L21：剛性苯乙烯－二乙烯基苯共聚物微球填料柱L22：帶有磺酸基團的多孔苯乙烯陽離子交換柱 L23：帶有季胺基團的聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸酯多孔離子交換柱 L24：表面含有大量羥基的半剛性聚乙烯醇親水凝膠柱 L25：聚甲基丙烯酸酯樹脂交聯羥基醚（表面含有殘余羧基功能團）樹脂。能分離分子量100～5000MW范圍的水溶性中性、陽離子型及陰離子型聚合物（用聚氧乙烯測定）的固定相 L26：丁基硅烷化學鍵合全多孔硅膠微球固定相，即C4柱 L27：30～50mm的全多孔硅膠微粒 L28：多功能載體，100Å的高純硅膠加以氨基鍵合以及C8反相鍵合的官能團 L29:氧化鋁,反相鍵合,含碳量低,氧化鋁基聚丁二稀小球,5mm，孔徑80Å L30:全多孔硅膠鍵合乙基硅烷固定相

太多了，沒有一一列舉了～～