離子交換層析分離酸性蛋白質

『壹』 離子交換層析的原理是什麼 已解決

離子交換層析法是從復雜的混合物中，分離性質相似大分子的方法之一，依據的原理是物內質的酸鹼性容，極性，所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質，對管柱上的離子交換劑有不同的親和力，改變沖洗液的離子強度和pH值，物質就能依次從層析柱中分離出來。

層析開始前，功能基團與反離子穩定結合，就與反離子發生可逆交換，與層析劑結合被固定下來。因為鹽離子可以與底物競爭功能基團，鹽濃度越高樣品與層析劑結合越不緊密，易被洗脫下來。不同物質與層析劑結合程度不同，洗脫下來的時間不同，因此得以分開。

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離子交換劑的選擇首重保持欲分離物質的生物活性，以及在不同pH值環境中，此物質所帶的電荷和電性強弱，陰陽離子交換劑的選擇若被分離物質帶正電荷，這些鹼性蛋白質，它們在酸性溶液中較穩定，親和力強，故採用陽離子交換劑。

在鹼性溶液中較穩定，則使用陰離子交換劑，如果欲分離的物質是兩性離子，一般考慮在它穩定的pH范圍帶有何種電荷，作為交換劑的選擇。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生，若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌。

『貳』 離子交換層析基本信息

離子交換層析是一種利用物質的電荷特性進行分離和純化的技術。其核心是基質，通常是帶有電荷的樹脂或纖維素。這些基質根據其電荷性質可分為兩類：陰離子交換樹脂，帶有正電荷，和陽離子樹脂，帶有負電荷。

在蛋白質分離純化過程中，離子交換層析的原理基於蛋白質的等電點特性。當蛋白質處於不同的pH環境中，其帶電狀態會發生變化。陰離子交換樹脂會結合帶有負電荷的蛋白質，使得這些蛋白質被吸附在柱子上。要將它們分離出來，可以通過逐步提高洗脫液中的鹽濃度，結合較弱的蛋白質首先會脫落下來。

相反，陽離子交換樹脂結合的是帶有正電荷的蛋白質。這些蛋白質的洗脫則需要採用不同的策略，如增加洗脫液中的鹽濃度或者提高其pH值，這樣結合強度較弱的蛋白質會先被釋放出來。通過這樣的方法，離子交換層析能夠有效地實現蛋白質的分離和純化。

離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。1

『叄』 不同蛋白質的洗脫順序

1.DEAE纖維柱層析是離子抄交換層析（中強鹼型），在PH大於7時，最先洗脫出來的酸性蛋白質（帶負電），依次類推。
2，用sephadex-50凝膠柱層析是根據蛋白質分子量大小來洗脫的，分子量大的最先出來，小的最後。

『肆』 為什麼說離子交換色譜法是分離蛋白質的最佳方法

它是根據蛋白質的組成物質氨基酸的物理性質（基於氨基酸電荷行為）為分離基礎的方法。相對透析和超過濾及凝膠過濾來說，可以針對多種蛋白質中的某一種（前提是知道蛋白質的氨基酸組成及其離子交換樹脂的親和度及洗脫強度）進行分離。（而透析和超過濾還有凝膠過濾方法更大的取決於相對分子質量及其結構 分離出的單一蛋白質純度相對要低 並且凝膠過濾要求凝膠對要求組分不能有吸附作用 適用性較低 ） 相對鹽溶和鹽析來說，分離單一蛋白質的純度要高，且更好的保留其天然理化性（鹽溶要求蛋白質分子吸附某一鹽離子從而改變其溶解性 但有些蛋白質吸附某些鹽離子後其蛋白質構象及理化性會發生改變）。 相對有機溶劑分級分離法，更好的保留其天然理化性（有機溶劑分類法易造成蛋白質不可逆變形 且適用范圍窄） 相對凝膠電泳和等電聚焦來說 更易於實現大量制備分離 且不改變蛋白質結構和功能（電泳會影響蛋白質結構 且操作繁瑣 成本高） 相對親和層析來說 它更加易於實現且成本低廉效果也不錯（親和層析需要制備其配體並與載體交聯 因而制備難且成本較高）
PS: 最好的分離方法不是例子交換色譜法 而是高效液相色譜法 相對離子交換色譜來說有著更高的效率、更高的解析度和過柱速度