離子交換色譜柱100水

① 急求~離子交換柱清洗方法

離子交換層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:21:00
材料與儀器

DEAE-32纖維素，pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl，工程菌破碎離心後的上清液；

層析柱

二、 方法與步驟

1） 裝柱：

用水清洗層析柱，柱內留存水距底部約1cm，加入18ml介質（凝膠溶液）。

2） 平衡：

加0.01M,PH8.0,tris-HCl緩沖液，直至流出液PH與緩沖液一致。

3） 上樣：

用量筒量出上清液體積，再加入等體積緩沖液混合，取EP管留1.5ml。待柱中水流出，至剛好覆蓋凝膠表面，靠璧緩慢加樣。

4) 用50ml緩沖液洗滌，用EP管隨機收集樣品穿出液和洗滌穿出液。

5) 洗脫：

將梯度洗滌儀和層析柱連接，洗脫瓶A（混合器）加200µl緩沖液，開口打開至兩瓶液面相平，相通管道出無氣泡，關閉連接，A中加入6gNaCl溶解，把裝置放在梯度混合儀上，開動攪拌器開關，打開A和B的連接通道，層析柱下端連收集器，收集洗脫流出液。

6） 控制流速，約4min/管，2-3ml/管。

分子篩的是凝膠層析
Sephadex G-100凝膠層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:27:00
材料與儀器

Sephadex G-100，0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl，濃縮液

層析柱

二、 方法與步驟

1） Sephadex G-100 凝膠預處理

a) 100ml燒杯，稱取5克sephadex G-100,加入50ml去離子水，浸泡溶脹24小時。

b) 傾去sephadex G-100溶脹後凝膠上層的水，加入凝膠等體積的1.0 mol/L NaOH液處理，用攪棒輕輕攪動，並浸泡1小時處理後傾去。用去離子水洗滌。洗滌過程中，用傾去法除去細顆粒。其方法是用攪棒將凝膠攪勻（注意不要過分用力攪拌，以防止顆粒破碎），放置數分鍾，將未沉澱的細顆粒隨上層水倒掉。浮選3-5次，直至上層沒有細顆粒為止，再浸泡水洗至PH中性。

c) 將Sephadex G-100凝膠水溶液盛放於抽濾瓶中，用洗耳球塞住杯口，減壓抽氣30分鍾，除去凝膠溶液內的氣泡，將脫氣後的凝膠溶液輕輕倒入燒杯中，其中盛有1/2去離子水。

2) 裝柱

a) 層析柱(1.0Î50cm)用水清洗干凈，柱的上、下端聯接塑料管接上小乳膠管，裝上螺旋夾。將層析柱垂直裝好。校直過程用下端綁有鑰匙的繩子掛於鐵架的不同位置，從多角度校正使柱垂直。打開柱上埠，從柱底下出口管朝柱內注入水，使柱底全部充滿水而不留氣泡，關閉柱出口。最終柱內留存有2 cm的水。從出口處接上一根直徑2 mm細塑管，塑管另一端固定在柱的上端部位。

b) 攪動凝膠溶液（切勿攪動太快，以免空氣再逸入），使形成均一的薄膠漿，並立即沿玻棒倒入層析管內，讓加入的凝膠在柱內自然沉降，待柱底面上積起約1-2 cm的凝膠床後，打開柱出口水流。隨著柱內水的流出，上面不斷加入凝膠液，使形成的凝膠床面上有凝膠連續下降（如果凝膠床面上不再有凝膠顆粒下降，應該用攪棒均勻地將凝膠床攪起數厘米高，然後再加凝膠，不然就會形成界面，影響層析效果）。

c) 凝膠沉積到柱內凝膠是否均勻，有否「紋路」或氣泡。若層析柱不均一，必須重新裝柱。

3） 平衡

柱裝好後，使層析床穩定15-20分鍾，然後連接洗脫瓶出口和層析柱頂端，用3-5倍體積地緩沖液平衡層析柱。平衡過程中控制上柱緩沖液地進柱操作壓保持恆定。保持流速每滴/10秒。直至流出液的PH與上柱緩沖液完全相同。

4） 樣品洗脫

a) 上樣准備：

i) 上樣前打開層析柱上端，先檢查凝膠床界面是否平整，如果傾斜不平整，可用玻棒將凝膠床界面輕輕攪起後，再使凝膠自然沉降，形成平整狀態的凝膠床界面。用毛細吸管小心吸去大部分清液，然後讓液面自然下降，直至幾乎露出凝膠床界面。

ii) 樣品放入高速離心機，12000r/min、離心5 min。

iii) 上樣前吸取50µl樣品於EP管中，以備走電泳。

b) 樣品上樣：

i) 將樣品由玻棒引流沿管壁加入到凝膠床面上，注意不要將床面凝膠沖起。同時打開層析柱下面流出液開關（控制流速1滴/20秒），保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致，控制凝膠床界面不能脫水，並控制樣品區帶盡量狹窄。

ii) 當1.5ml樣品全部加入後，用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脫液同上樣時一樣地保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致以控制凝膠床界面不能脫水，小心清洗凝膠床界面表面，使黏附著的樣品全部洗入凝膠床。

iii) 然後開始控制上樣的滴速大於層析柱下面流出滴速，使幾乎與凝膠床界面相平的洗脫液液面慢慢提高至凝膠床界面高出2cm左右，封閉層析柱上端。

iv) 保持層析柱上柱洗脫液入口處與層析柱下面流出處有一定勢壓。控制上柱緩沖液的進柱操作壓保持恆定。

c) 洗脫：

用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 緩沖液洗脫，用部分收集器收集，4分鍾/管（約2-3ml/管），收集約1-30管。

5） 酶活、酶濃度測定，參見2.6.2，2.6.3

6） 最高酶活收集管洗脫液留50µl，以備走電泳。

7） 將酶活較高的收集液10~14管合並，測定總體積為7.1 ml，精確測定酶活性。並用考馬思亮藍測定蛋白濃度。測酶活時體系稀釋了200倍，定蛋白時無稀釋。

② 液相色譜柱merck rp18可以用100%水做流動相嗎

一般是嚴禁用純水做流動相的，對柱子傷害比較大
你可以看看你用來檢測什麼物質，然後根據對應的國標看看流動相是什麼
純水容易把填充物沖塌陷

③ 如何有效選擇高效液相色譜柱

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由於被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最後通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用於化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適於分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數，以高壓驅動流動相，使得經典液相色譜需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鍾內完成。

④ t3色譜柱用100%水，會怎麼樣

一般硅膠色譜柱是不能用100%純水的，這樣色譜柱會塌陷。最好要使用經過修飾後的色譜柱，platisil、Spursil等都是經過修飾後的色譜柱，這樣就可以在純水相條件下使用。

⑤ 保護色譜柱誤用成100%水會損壞柱子嗎

只是保留時間改變和拖尾現象，問題不大。 因為用水泡久了，固定相的極性被改變了。用版10%甲醇權-100%甲醇-100%異丙醇-100%甲醇-10%甲醇的順序沖洗一下柱子應該可以恢復使用。注意：我理解的是，你的柱子是反相色譜柱（ODS）

⑥ 液相的柱壓不穩定，總是上下波動且幅度很大，可以怎麼解決

當液相柱壓不穩定時可以進行以下操作：

1、檢查是否脫氣，壓力不穩定很可能是管路中有氣泡。

2、更換密封墊，泵密封墊損壞，會把空氣帶進泵內。

3、打開泵的排氣閥，按purge健排氣，或者以大流速（2ml/m）排氣，流動相真空脫氣或者超聲脫氣。

4、換下雙泵,沖洗閥的過濾芯，將流動相混合均勻後,超聲20min後,真接單泵分析就可。

5、檢查是否是柱子久用引起的柱壓不穩，用異丙醇：甲醇＝10:90沖，流速要調低。

(6)離子交換色譜柱100水擴展閱讀

在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸鹼性、分子量大小等等。

1.樣品是極性的且弱酸性的，就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。

2. 如果樣品極性太強，或酸性太強，可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

（缺點是離子對試劑平衡時間長，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用於其它實驗）。

3. 若樣品是鹼性的，可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質，且硅膠端基封尾）或一些經過修飾的C18柱（如極性嵌入技術或鹼去活技術等）。

他們都會減少鹼性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏鹼的條件下做，因為這樣可增加鹼性樣品的保留。

4.如果鹼性化合物的極性太強，或鹼性太強，可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測（優點是方法開發簡單，缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少，價格也高）。

或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經典的檢測鹼性樣品的方法）選擇強離子交換柱也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

⑦ 液相色譜可以用100%水沖嗎，我的色譜柱不小心用純水沖了10分鍾左右，然後壓力就上不去了，我該怎

如果流動相里本來就有水 短時間內沒問題 切成流動相多沖一會兒就沒事了

⑧ thermo離子交換sax使用方法

Thermo 離子交換色譜柱使用
首先，感謝您選擇性能優越的Thermo色譜柱產品。
為了使您的色譜柱能發揮最大的性能，敬請先閱讀以下說明：
1、適用類型
Thermo離子交換色譜柱包括：BioBasic AX，SCX，Hypersil SAX，Hypersil Gold AX，SAX等。
2、柱體積
色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：
V=0.68 πr2L
V為色譜柱柱體積（mL），r為色譜柱內徑（cm），L為色譜柱長度（cm）。
3、色譜柱柱效測試與保存
離子交換色譜柱出廠時都經過柱效測試，請參考柱效報告。
在條件允許情況下，請對新色譜柱進行柱效測試。
離子交換色譜柱出廠時均保存在乙醇溶液中（如有不同，以柱效報告為准）。
4、溫度
所有硅膠基質色譜柱使用溫度應低於60℃。
5、樣品
最好將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。
樣品溶液不應含有任何顆粒物，最好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。同時建議在色譜系統中使用在線過濾器。
6、流動相
所用溶劑通常為水、乙腈、甲醇等，Thermo的離子交換色譜柱可以100%水為流動相，進行鹽的梯度洗脫。
流動相中含有機相時，請注意降低鹽的濃度，以防止溶劑混合後鹽從流動相中析出。更換流動相時也要注意這一問題，可先用含較高純水的流動相除鹽過渡。
請將流動相的pH值控制在2-8。緩沖鹽濃度在500 mM以下。
所有流動相，最好當日實驗當日配製，並使用2μm濾膜過濾。
7、色譜柱安裝
請小心操作色譜柱。
不要摔、碰色譜柱，這樣會損壞色譜柱床，使色譜柱性能下降。
使用合適的連接管路和接頭，確保色譜柱連接處死體積降到最低（使用不銹鋼接頭時需要尤其注意）。我們建議使用SLIPFREE 接頭，此接頭與Thermo色譜柱以及其他品牌色譜柱均完美匹配。
8、色譜柱平衡
新柱在使用前，請預先用20倍柱體積甲醇/或乙腈沖洗色譜柱，然後以初始流動相（不含鹽）沖洗10倍柱體積。
在進行正式分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。
9、色譜柱保護
對於成分復雜的「臟」樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。
10、色譜柱清洗
常規清洗：
每天完成分析之後，用100% 水沖洗30倍柱體積除鹽，然後用20% 甲醇/或乙腈沖洗20個柱體積，保存在20% 甲醇/或乙腈中。
清洗強保留污染物：
如果發現離子交換色譜柱柱效出現大幅下降，可通過如下方法清洗離子交換色譜柱：首先用高濃度的緩沖鹽溶液清洗（濃度是流動相的5-10倍，但不得超過1M），沖洗30倍柱體積。用100% 水沖洗20倍柱體積以除鹽後，再用100%甲醇/或乙腈清洗30倍柱體積。最後用20%甲醇/或乙腈水溶液（不含鹽）保存。
11、色譜柱保存
用100% 水沖洗30倍柱體積除鹽後，若短期不使用（<1周），用20% 甲醇/或乙腈沖洗20倍柱體積後，保存在20% 甲醇/或乙腈中；若需長期放置（>1周），用50% 甲醇/或乙腈沖洗20倍柱體積後，保存在50% 甲醇/或乙腈中。
注意：如果違反上述規程，可能使色譜柱失去保修。

⑨ 液相色譜C18色譜柱特點及相關參數

GP-C18 Bio-C18 Amethyst(紫晶) 色譜柱-美國賽分-sepax-北京康農興牧
常規用途分析型液相色譜柱 >> 反相液相色譜柱（RPLC）介紹：

GP-C18色譜柱(GP-C8,GP-C4詳見產品手冊) •方法開發的首選柱，
•高度可控的單分子層形成和封尾技術
•高的柱間重現性
•高的選擇性和分離效率
•適合分離酸性、中性和鹼性化合物，以及許多葯物、多肽等
•推薦使用有機溶劑或有機溶劑/水體系的流動相

可替代Symmetry C18、LunaTMC18、Symmetry Shield RP18、LunaTMDiscoveryTMC18、Zorbax Eclipse XDB C18、Inertsil ODS-2 ODS-3、SupelcosilTMLC-18-DB、Kromasil C18、lTSKgel ODS-100Z
GP-C18以全覆蓋的鍵合硅膠為填料，具有優異的穩定性。獨特的單官能團化學鍵合技術可避免形成復合的C18分子層。均勻的塗層確保了固定相具有高選擇性和高效率的分離特點。
GP-C18填料技術參數
硅膠：球形,高純度(<10ppm金屬雜質)
孔徑：120Å
粒徑：1.8、2.2、3、4、5、7和10µm
孔體積：1.0mL/g
比表面積：300m²/g
固定相結構：單層全封尾
碳載量：17%
PH值范圍：2-11
HP-C18色譜 柱
•可使用100%的水相做流動相
•高度可控的單分子層形成和封尾技術
•高的柱間重現性
•高的選擇性和分離效率
•適合分離酸性、中性和鹼性化合物，以及許多葯物、多肽等
可替代AquasilC18、ArlantisTM、Zorbax SB-Aq SynergiHydro-RP、HydroBondPS C18、HydroBond AQ、UltraAqueous C18、ProntoSIL C18 AQ、YMC-Pack ODS-AQ、EliteSino ChromODSBP TSKgelODS100V HP-C18填料技術參數
硅膠：球形,高純度(<10ppm金屬雜質)
孔徑：120Å / 200Å（用於大分子）
粒徑：3、4、5、7、10µm / 3、5、10µm
孔體積：1.0mL/g
比表面積：300m²/g /200m²/g
固定相結構：單層全封尾
碳載量：17% / 10%
PH值范圍：2.0-9.0
BR-C18色譜柱
•高度可控的單分子層形成和封尾技術
•高的柱間重現性
•高的選擇性和分離效率
•寬的pH適用范圍1.5-10.5
•適合分離酸性、中性和鹼性化合物，以及許多多肽和蛋白等

可替代Zorbax Extend C18 Vydac218TP C18; ;Jupite300 C18 BR-C18填料技術參數
硅膠：球形，高純度(<10ppm金屬雜質)
孔徑：120Å
粒徑：3、5和10µm
孔體積：1.0mL/g
比表面積：350m²/g
固定相結構：單層全封尾
碳載量：19.5%
PH值范圍：1.5-10.5
Bio-C18色譜柱
Bio-C18填料有200和300Å兩種孔徑規格，適合於肽段的指紋圖譜識別，天然和人工合成多肽以及低分子量蛋白等的分離。所採用的化學鍵合技術可以確保ODS單分子層不會在純水溶液中發生塌陷。
•高度可控的單分子層形成和封尾技術
•高的柱間重現性
•高的選擇性和分離效率
•可使用純水作為流動相
•適合分離多肽、蛋白以及許多葯物等
可替代XterraC18;XbridgeC18 Bio-C18填料技術參數
硅膠：球形,高純度(<10ppm金屬雜質)
孔徑：200Å / 300Å
粒徑：3、4、5和10µm / 3和5µm
孔體積：1.0mL/g / 0.95mL/g
比表面積：200m²/g / 105m²/g
固定相結構：單層全封尾
碳載量：10% / 7%
PH值范圍：2.0-9.0
Amethyst(紫晶) P分析型液相色譜柱
通用型C18，推薦中葯分離選擇此柱。
• 採用高度可控的單官能團鍵合和封尾技術
• 高的柱間重現性
• 高的選擇性和分離效率
• 可在pH 1.5-9.0范圍內使用
• 適合分離許多葯物分子以及多肽等
• 可用100%水作為流動相

Amethyst C18-P填料技術參數
硅膠：球形,高純度(金屬雜質<10ppm)
孔徑：120Å
粒徑：3、5和10µm
孔體積：1.0mL/g
比表面積：300m²/g
固定相結構：單官能團全封尾
碳載量：20.0%
pH值范圍： 1.5-9.0
Amethyst(紫晶) H分析型液相色譜柱
Amethyst C18-H 一般用途C18 ，推薦西葯如抗生素葯的分離選擇此柱。
• 採用高度可控的單分子層形成和封尾技術
• 高的柱間重現性
• 高的選擇性和分離效率
• 最高可耐受pH值至11
• 可在pH 1.5-10..5范圍內使用
• 適合分離酸性、中性和鹼性化合物，以及多肽和蛋白等 Amethyst C18-H填料技術參數
硅膠：球形,高純度(金屬雜質<10ppm)
孔徑：120Å
粒徑：3、5和10µm
孔體積：1.0mL/g
比表面積：350m²/g
固定相結構：三官能團單分子層全封尾
碳載量：19.0%
pH值范圍： 1.5-10.5
Sapphire(寶石)分析型液相色譜柱
Sapphire C18 復雜樣品的分離
• 採用高度可控的單分子層形成和封尾技術
• 高的柱間重現性
• 對疏水和親水化合物都具有高選擇性和分離效率
• 與其它C18填料相比具有更大的比表面積，更長的樣品保留時間，以及更高的上樣量
• 特為鹼性化合物如胺類等的分離而設計
• 可用純水作為流動相
• 適合分離酸性、中性和鹼性化合物，以及許多葯物分子和多肽等 Sapphire C18填料技術參數
硅膠： 球形,高純度(金屬雜質<10ppm)
孔徑：100Å
粒徑：3、5和10µm
孔體積：1.05mL/g
比表面積：450m²/g
固定相結構：單官能團全封尾
碳載量：17.0%
pH值范圍： 1.5-9.0
體積排阻柱 SRT-SEC SRT-SEC 可完全替代TSK 凝膠柱。
SRT SEC固定相是以高純度具有良好機械穩定性的硅膠為基質，表面化學鍵合有一層均一、親水、納米厚度的中性聚合物薄膜。該固定相的合成採用賽分公司獨有的表面化學鍵合技術，可確保柱與柱之間的高度重現性。SRT SEC固定相具有高的化學和機械穩定性，與生物分子等之間的非特異性相互作用也很小。孔徑規格有100、150、300、500、1000和2000Å，可確保高分離容量解析度
Nanofilm-SEC Nanofilm-SEC 針對柱容性蛋白，解決TSK 壽命問題的色譜柱，使用壽命更長。
Nanofilm SEC固定相是以高純度具有良好機械穩定性的硅膠為基質，表面化學鍵合有一層均一、親水、納米厚度的中性聚合物薄膜。該固定相的一個特點是可使用低鹽濃度，或含有機溶劑的緩沖液作為流動相進行生物樣品的分離，並具有高的解析度和樣品回收率。該色譜填料為窄粒徑分布的球形硅膠顆粒。孔徑規格有150、250、450和950Å。
離子交換柱 硅膠基質 HP-SCX 推薦用於鹽酸二甲雙胍的分析新康泰克葯物的分析
HP-SAX 推薦用於核苷類物質的分析草柑膦的分析
聚合物基質 Proteomix離子交換色譜柱
推薦用於蛋白質、低聚核苷酸和多肽的分離而設計，具有高解析度、高效率和高回收率的特點。
Sepax 首創1μm顆粒製造技術。專利技術的表面修飾，不但消除固定相與提高了生物分子之間的非特異性互相作用同時有效的無孔填料的吸附容量，從而使色譜柱在應用中具有極高的柱效和回收率

⑩ 柱壓升太高，如何處理能使柱壓降低請大家幫幫忙

如果是管路堵了的話，按樓上說的可以排查一下。不過我覺得你應該能看出管路賭不賭，所以很可能是平時用時不大注意，沖的不徹底，柱子堵了，比如用了鹽的流動相，沖的不夠，鹽在柱子里結晶了。處理一下就好了。另外不是所有柱子 都能倒沖的，最好問問生產商。不了解的話，還是按下面的方法處理一下試試。
常規處理:硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一次用完後用低流速長時間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗;鍵合相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗,再用甲醇沖洗,然後用甲醇與蒸餾水以一定比例混合的溶液沖洗後過夜。
對於已使用一段時間後柱效下降的色譜柱可按以下方法進行再生。再生處理包括活化(右→左)和凈化(左→右)兩種。硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下列順序沖洗:三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。鍵合相硅膠柱:蒸餾水←→甲醇(沖洗過程中可加入少量二甲基甲醯胺)。離子交換樹脂柱:高濃度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分樹脂再生,油脂等少數與樹脂緊密結合的物質可用低濃度鹼溶液(如0.1molL的NaOH溶液)沖洗,酸性有機物吸附在固定相的用低pH緩沖液沖洗,鹼性有機物用高pH緩沖液沖洗,然後再用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水沖洗。凝膠色譜柱:由於凝膠色譜柱是根據被分離物質的分子量大小而分離物質,通常用稀的氫氧化鈉或非離子型去垢劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)沖洗可除去大部分的結合物質,如果一些污染物仍然不能清除時,用24%或30%乙腈沖洗過夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去親水蛋白,用蛋白水解酶處理可分解凝膠中剩餘的痕量胃蛋白酶,然後再用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
已污染的色譜柱的處理:因保留強的物質污染,流動相或樣品中不溶物沉積於柱頭,可用下列方法洗滌:去除脂類可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;去除蛋白質可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸進行梯度洗脫;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脫,同時反復注入100-200ml的四氫呋喃。
柱頭處理:對於柱頭堵塞污染嚴重的情況而且用溶劑沖洗無效的色譜柱,只有打開柱子去除柱頂的填料重裝:先拆下不銹鋼燒結過濾器,檢查柱床,常見凹陷或受污染的帶色填料,剔去不規則床層和帶色填料,使柱床顯白色並完全水平,再用甲醇作糊狀填料勻漿液,將糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復直到填料水平。

柱子的貯存:首先柱子必須清洗干凈後才能貯存,柱子不能貯存在水或水性溶劑中,否則會引起微生物的滋生。極性色譜柱可用適當溶劑如二氯甲烷沖洗;鍵合相色譜柱用甲醇沖洗;陰離子交換色譜柱用0.002%洗必泰(雙氯苯雙胍己烷)的緩沖液沖洗,陽離子交換色譜柱用0.005%硫柳汞緩沖液沖洗;凝膠色譜柱用緩沖液中加0.02%疊氮化鈉或用20%乙醇沖洗。再將柱子兩頭密封,以防止溶劑蒸發使柱子乾燥而引起柱子結構的幾何學改變。