deae離子交換柱預處理

Ⅰ 酶分離純化離子交換柱預裝柱怎麼使用

如果不限定純化方法，可以考慮親和層析或離子交換，但根據你問題的意思，是內選定離子交換。
此時容就要考慮你蛋白的等電點了，如果等電點在你穩定pH之上，就用陽離子交換柱：
設計陽離子交換層析：將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running buffer。同時裝柱，平衡，然後上樣，平衡，洗脫（因為你的pH不穩定，建議鹽洗脫），收峰。得你的蛋白；
如果你的等電點在穩定pH之下，就用陰離子交換柱，其步驟如上，只是改變柱子類型。

Ⅱ DEAE纖維素柱的原理

DEAE纖維素柱原理，基於離子交換層析：離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。

陰離子答交換基質結合，帶有負電荷的蛋白質，然後這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。

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基本信息：

性狀：乾燥纖維狀。

用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料。

保存：常溫乾燥封袋保存。

DEAE—纖維素的使用方法：

稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過夜，觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜，其間換幾次水，每次除去細小顆粒。

抽干，改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡後使用。

Ⅲ 急！急！如何裝陰離子交換柱，使用時候出現氣泡怎麼除去謝謝

可以用適量的有機溶劑潤洗一下層析柱，柱子體積較小的話就用玻璃棒攪勻排除一下氣泡。

不管是干柱和濕柱，都要加層析液，不能要求一開始就沒有氣泡的。要用洗脫劑不停的洗脫，就是用配置好的試劑一邊一邊對柱子進行洗脫，這樣不但可以消除氣泡，還可以使硅膠充分沉降，讓層析效果更好。等柱子沒有氣泡後在上樣用洗脫液進行層析。

若柱中留有氣泡或各部分松緊不勻（更不能有斷層）時，會影響滲透速度和顯色的均勻。去除就是用玻璃棒攪拌，趕走氣泡。

(3)deae離子交換柱預處理擴展閱讀：

水溶液中一些陽離子進入了反離子層，而原來的反離子層中的陽離子進入了水溶液。這種在正常濃度下，反離子層與水溶液之間的各向同性離子交換稱為離子交換作用。

離子交換主要發生在擴散層與正常水溶液之間。由於粘土顆粒表面通常帶有負電荷，離子交換主要是陽離子交換，所以又稱陽離子交換。離子交換嚴格遵循等價定律，即進入反離子層的陽離子等價於從反離子層排開的陽離子等價。

Ⅳ 離子交換柱的陽，陰離子交換樹脂順序，哪個前哪個後

廣州華膜--樹脂產品的貯存：
離子交換樹脂內含一定量的水份，在運輸及貯存過程中應盡量保持這部分水份，如貯存過
程中樹脂脫了水應先用濃食鹽水（10%）浸泡，再逐漸稀釋不得直接放入水中，以免樹脂急劇
膨脹而破碎。在長期貯存中，強型樹脂應轉成鹽型，弱型樹脂可轉變成相應的氫型或游離型，
也可轉變成鹽型，然後浸泡在潔凈的水中。樹脂在貯存或運輸過程中，應保持在5-40℃的溫度
環境中避免過冷過熱，影響質量。
新樹脂的預處理：
新樹脂常含有溶劑、未參加聚合反應的物質和少量低聚合物，還可能吸著鐵、鋁、鋼等重
金屬離子。當樹脂與水、酸、鹼或其他溶液相接觸時，上述可溶性雜質就會轉入溶液中，在使
用初期污染出水水質。所以，新樹脂在投運前要進行預處理。
1、 陽樹脂預處理步驟如下：
首先使用飽和的食鹽水。取其量約等於被處理樹脂體積的兩倍，將樹脂置於10%食鹽溶液
中浸泡18-20小時，然後放出食鹽水，用清水漂洗凈，使排出水不帶黃色；其次再用
2%-4%NaOH溶液，其量與上相同，在其中浸泡2-4小時（或作小流量清洗），放出鹼液後，重洗
樹脂直至排出水接近中性為止；最後用5%HCI溶液，其量亦與上述相同，浸泡4-8小時後放出酸
液，用清水洗至中性待用。
2、 陰樹脂的預處理
其預處理方法中的第一步與陽樹脂預處理方法中的第一步相同;而後用5%HCI浸泡4-8小時，然後放出酸液，用水清洗至中性;而後用2%-4%NaOH溶液浸泡4-8小時後，放鹼液用清水漂洗至
中性待用。

Ⅳ DEAE Sephadex A-25的使用方法及注意事項

產品簡介

DEAE Sephadex A-25是以交聯葡聚糖為基質的弱陰離子交換劑，適合批量進行分離層析，具有很好的結合能力。葡聚糖離子交換劑是將功能基團通過醚鍵偶聯到交聯葡聚糖上。根據配基基團不同分為：DEAE、QAE和CM 3種，分別包括兩種不同的孔徑：A-25/C-25和A-50/C-50。

產品參數

產品名稱： DEAESephadex A-25

貨號： 17-0170-02

基質： 交聯葡聚糖

顆粒大小： 40-120μm

配基： 二乙胺乙基

離子容量： 3-4mmol/g

每毫升蛋白載量： HSA-30mg；α-乳白蛋白-140mg

最大流速： 45cm/h

工作pH： 2-9；2-13（在位清洗）

化學穩定性： 在水溶液中穩定例如：8M 尿素和6M鹽酸胍溶液

操作溫度：室溫

保存條件：4-30°C(乾粉)；4-8°C（用過的柱子，保存在20%乙醇或者0.01M NaOH）

實驗步驟

1.預處理

稱取所需質量的DEAE Sephadex A-25乾粉，溶於緩沖溶液中；不同緩沖溶液凝膠的膨脹系數不一樣。一般1g DEAESephadex A-25溶於25mL的鹽溶液中。選擇後續實驗相同的pH的緩沖液進行溶脹。室溫溶脹一般需要2天，沸水浴溶脹一般需要2小時，同時還能夠排除溶膠中的氣泡。磁力攪拌時應注意不要破環凝膠顆粒。用布氏漏斗進行沖洗，使其保存在初始的緩沖液中。按凝膠：緩沖液=3:1比例配成勻漿。

2.裝柱

（1）平衡所有試劑和填料平衡至室溫。

（2）將層析柱垂直固定於滴定鐵架上，柱底墊一園尼龍紗，出水口接一乳膠或塑料管並關閉開關。

（3）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕並保持一小段液體（液面略高於濾膜），務必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

3.平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。

4.上樣

（1）樣品用平衡液配製，渾濁的樣品要離心、過濾後上柱；

（2）一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

5.洗脫

對於DEAE Sephadex A-25一般使用增大鹽離子濃度或者降低pH的連續或者梯度洗脫。

6.再生

一般用高鹽濃度的緩沖液（1-2M NaCl）沖洗，洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.在位清洗

（1）對於以離子鍵結合上去的蛋白，可以用0.5-1柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對沉澱蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質，可用1柱床體積的0.1M NaOH去除。

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。清洗完畢後，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。

注意事項

（1）用過的柱子密封貯存於4°C（保存溶液為20%乙醇或者0.01 M NaOH），通風、乾燥的地方，不能冷凍。

（2）在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

Ⅵ deae陰離子交換柱去除內毒素需要在一定的緩沖體系中嗎

DEAE是陰離子交換柱，一般適合於等電點比較低的酸性蛋白。
另外DEAE在結合內毒素上有很好的效果，所以在很多蛋白去除內毒素時可以用到DEAE。

Ⅶ 用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什麼不一樣

飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱，G-X, X：（1）交聯度。X越小，交聯度越大，網孔越小，適用於分離低分子量產品，反之亦然。（2）吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後，必須反沖疏鬆一次，平衡後再使用。若使用數次，就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢，將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干，再用95%乙醇洗兩次，在60℃烘箱中烘乾，回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。

Ⅷ 急求~離子交換柱清洗方法

離子交換層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:21:00
材料與儀器

DEAE-32纖維素，pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl，工程菌破碎離心後的上清液；

層析柱

二、 方法與步驟

1） 裝柱：

用水清洗層析柱，柱內留存水距底部約1cm，加入18ml介質（凝膠溶液）。

2） 平衡：

加0.01M,PH8.0,tris-HCl緩沖液，直至流出液PH與緩沖液一致。

3） 上樣：

用量筒量出上清液體積，再加入等體積緩沖液混合，取EP管留1.5ml。待柱中水流出，至剛好覆蓋凝膠表面，靠璧緩慢加樣。

4) 用50ml緩沖液洗滌，用EP管隨機收集樣品穿出液和洗滌穿出液。

5) 洗脫：

將梯度洗滌儀和層析柱連接，洗脫瓶A（混合器）加200µl緩沖液，開口打開至兩瓶液面相平，相通管道出無氣泡，關閉連接，A中加入6gNaCl溶解，把裝置放在梯度混合儀上，開動攪拌器開關，打開A和B的連接通道，層析柱下端連收集器，收集洗脫流出液。

6） 控制流速，約4min/管，2-3ml/管。

分子篩的是凝膠層析
Sephadex G-100凝膠層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:27:00
材料與儀器

Sephadex G-100，0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl，濃縮液

層析柱

二、 方法與步驟

1） Sephadex G-100 凝膠預處理

a) 100ml燒杯，稱取5克sephadex G-100,加入50ml去離子水，浸泡溶脹24小時。

b) 傾去sephadex G-100溶脹後凝膠上層的水，加入凝膠等體積的1.0 mol/L NaOH液處理，用攪棒輕輕攪動，並浸泡1小時處理後傾去。用去離子水洗滌。洗滌過程中，用傾去法除去細顆粒。其方法是用攪棒將凝膠攪勻（注意不要過分用力攪拌，以防止顆粒破碎），放置數分鍾，將未沉澱的細顆粒隨上層水倒掉。浮選3-5次，直至上層沒有細顆粒為止，再浸泡水洗至PH中性。

c) 將Sephadex G-100凝膠水溶液盛放於抽濾瓶中，用洗耳球塞住杯口，減壓抽氣30分鍾，除去凝膠溶液內的氣泡，將脫氣後的凝膠溶液輕輕倒入燒杯中，其中盛有1/2去離子水。

2) 裝柱

a) 層析柱(1.0Î50cm)用水清洗干凈，柱的上、下端聯接塑料管接上小乳膠管，裝上螺旋夾。將層析柱垂直裝好。校直過程用下端綁有鑰匙的繩子掛於鐵架的不同位置，從多角度校正使柱垂直。打開柱上埠，從柱底下出口管朝柱內注入水，使柱底全部充滿水而不留氣泡，關閉柱出口。最終柱內留存有2 cm的水。從出口處接上一根直徑2 mm細塑管，塑管另一端固定在柱的上端部位。

b) 攪動凝膠溶液（切勿攪動太快，以免空氣再逸入），使形成均一的薄膠漿，並立即沿玻棒倒入層析管內，讓加入的凝膠在柱內自然沉降，待柱底面上積起約1-2 cm的凝膠床後，打開柱出口水流。隨著柱內水的流出，上面不斷加入凝膠液，使形成的凝膠床面上有凝膠連續下降（如果凝膠床面上不再有凝膠顆粒下降，應該用攪棒均勻地將凝膠床攪起數厘米高，然後再加凝膠，不然就會形成界面，影響層析效果）。

c) 凝膠沉積到柱內凝膠是否均勻，有否「紋路」或氣泡。若層析柱不均一，必須重新裝柱。

3） 平衡

柱裝好後，使層析床穩定15-20分鍾，然後連接洗脫瓶出口和層析柱頂端，用3-5倍體積地緩沖液平衡層析柱。平衡過程中控制上柱緩沖液地進柱操作壓保持恆定。保持流速每滴/10秒。直至流出液的PH與上柱緩沖液完全相同。

4） 樣品洗脫

a) 上樣准備：

i) 上樣前打開層析柱上端，先檢查凝膠床界面是否平整，如果傾斜不平整，可用玻棒將凝膠床界面輕輕攪起後，再使凝膠自然沉降，形成平整狀態的凝膠床界面。用毛細吸管小心吸去大部分清液，然後讓液面自然下降，直至幾乎露出凝膠床界面。

ii) 樣品放入高速離心機，12000r/min、離心5 min。

iii) 上樣前吸取50µl樣品於EP管中，以備走電泳。

b) 樣品上樣：

i) 將樣品由玻棒引流沿管壁加入到凝膠床面上，注意不要將床面凝膠沖起。同時打開層析柱下面流出液開關（控制流速1滴/20秒），保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致，控制凝膠床界面不能脫水，並控制樣品區帶盡量狹窄。

ii) 當1.5ml樣品全部加入後，用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脫液同上樣時一樣地保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致以控制凝膠床界面不能脫水，小心清洗凝膠床界面表面，使黏附著的樣品全部洗入凝膠床。

iii) 然後開始控制上樣的滴速大於層析柱下面流出滴速，使幾乎與凝膠床界面相平的洗脫液液面慢慢提高至凝膠床界面高出2cm左右，封閉層析柱上端。

iv) 保持層析柱上柱洗脫液入口處與層析柱下面流出處有一定勢壓。控制上柱緩沖液的進柱操作壓保持恆定。

c) 洗脫：

用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 緩沖液洗脫，用部分收集器收集，4分鍾/管（約2-3ml/管），收集約1-30管。

5） 酶活、酶濃度測定，參見2.6.2，2.6.3

6） 最高酶活收集管洗脫液留50µl，以備走電泳。

7） 將酶活較高的收集液10~14管合並，測定總體積為7.1 ml，精確測定酶活性。並用考馬思亮藍測定蛋白濃度。測酶活時體系稀釋了200倍，定蛋白時無稀釋。

Ⅸ 粗多糖的提取中，用了6次的EDAE凝膠層析柱流速過慢，怎樣去活化

EDAE是哪種凝膠柱？
是不是弱陰離子交換柱DEAE？
如果是DEAE的話給你一點清洗的參考
一，在位清洗
1， 用2M的NaCl至少清洗2個柱體積。
2， 用1M的NaOH 至少清洗4個柱體積。
3， 用2M的NaCl至少清洗2個柱體積。
4， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗層析柱。

二，去除沉澱的蛋白質：
1， 注入一個柱體積的胃蛋白酶（1mg/ml in 0.5M NaCl,0.1M acetic acid）。室溫過夜或37°作用1小時。
2， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗層析柱。
3， 用至少4個柱體積的儲存緩沖液沖洗。
也可以選用如下操作
1， 用6M鹽酸胍沖洗2個柱體積。
2， 立即用pH7-8的緩沖液沖洗至少5個柱體積。
3， 用至少2個柱體積的蒸餾水潤洗分離柱。
4， 用至少4個柱體積的儲存緩沖液沖洗。

三，去除脂類，疏水結合蛋白質或脂蛋白：
1， 如需徹底除去此類污染物，可使用有機溶劑或去污劑。
2， 在使用有機溶劑前，用蒸餾水沖洗填料至少4個柱體積以避免鹽類沉澱於層析柱中。
3， 在使用有機溶劑或溶液時，需要減小流速以避免分離柱超壓。
4， 清洗溶液最大濃度如下，100%的異丙醇，100%的甲醇，100%的乙腈，2M的氫氧化鈉，75%的乙酸，100%的乙醇，離子性或非離子型去污劑。
5， 避免使用陰離子去污劑。