① 色譜柱柱壓高的問題
1、柱子有沒有堵還不好說，因為不同的設備具體壓力也不一樣。壓力是純乙腈<純甲醇<10%甲醇水溶液的。2、關於反沖柱子，色譜柱一般都是有註明方向的，反向沖洗是會影響柱子使用壽命的。不過不同廠家的產品之間存在差異，好的柱子，不建議反向沖洗。最好咨詢廠家後再作處理。3、LZ用的是紫外-可見光分光光度計嗎？這個設備在使用時必須有一個預熱過程，否則它也會造成基線漂移。如果分光光度計沒問題且柱子平衡了很長時間後，基線仍有漂移，那很可能是柱溫沒控制好。4、柱子是絕對不可以用NaOH溶液沖的，ph的話，一般是2-8吧，鹼性太強會把柱子上的硅膠都溶掉。如果你是用強鹼性溶液溶解樣品進的樣，那是可能造成出峰太快的。建議使用流動相溶解樣品（或者洗脫強度比流動相小的有機溶劑水溶液），這樣也可以減少樣品在柱子中造成堵塞的幾率。PS：lz可以看看一些企業（島津、waters、安捷倫）的學員手冊，網上很多。裡面有比較系統的講解，對剛剛開始接觸HPLC的人還是很有幫助的。:)
② 高效液相:安捷倫1100從開機到關機的全過程 感激不盡！ 郵箱[email protected]
轉載：《分析測試網路網》
高效液相色譜儀（Agilent 1100型）操作規程
一、 開機
1、開機前准備：流動相使用前必須過0.45um的濾膜（有機相的流動相必須為色譜純；水相必須用新鮮注射用水，不能使用超過3天的注射用水，以防止長菌或長藻類）； 把流動相放入溶劑瓶中。A瓶：為水相 B瓶：為有機相。
2、打開電腦，選Win 2000，進入Win 2000界面。
3、雙擊CAG Boodp server圖標，放大CAG Boodp server小圖標，出現窗口，5min內打開液相各部件電源開關，等待1100廣播信息後，表示通訊成功連接，關閉CAG Boodp serve窗口。
4、雙擊online圖標，儀器自檢，進入工作站。
該頁面主要由以下幾部分組成：
——最上方為命令欄，依次為File，Run Control，Instrumen…等；
——命令欄下方為快捷操作圖標，如多個樣品連續進行分析、單個樣品進樣分析、調用文件保存文件……等；
——中部為工作站各部件的工作流程示意圖；依次為進樣器-輸液泵-柱溫箱-檢測器-數據處理-報告；
——中下部為動態監測信號；
——右下部為色譜工作參數：進樣體積、流速、分析停止時間、流動相比例、柱溫、檢測波長等。
4、從「View」菜單中選擇「Method and control」畫面。
二、 編輯參數及方法
1、開始編輯完整方法：
從「Method」菜單中選擇「New method」，出現DEF-LC.M，從「Method」菜單中選擇「Edit entire method」，選擇方法信息、儀器參數及收集參數、數據分析參數和運行時間表等各項，單擊OK，進入下一畫面。
2、方法信息：
在「Method Comments」中加入方法的信息，如方法的用途等。單擊OK，進入下一畫面。
3、泵參數設定：
進入「Setup pump」畫面，在「Flow」 處輸入流量，如1ml/min；在「Solvent B」處輸入有機相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行「Timetable」，編輯梯度；輸入保留時間；在「Pressure Limits Max」處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。單擊OK，進入下一畫面。
4、DAD檢測器參數設定：
進入「DAD signals」畫面，輸入樣品波長及其帶寬、參比波長及其帶寬（參比波長帶寬默認值為100nm）； 選擇Stoptime：as Pupm；
在「Spectrum」中輸入採集光譜方式「store」：選All；如只進行正常檢測，則可選None； 范圍Range：可選范圍為190~950nm； 步長Step可選2.0nm；
閥值： 選擇需要的燈；
Peak width（Response time）即響應值應盡可能接近要測的窄峰峰寬，可選「2s」或4s；
Slit-：狹窄縫，光譜解析度高；寬時，噪音低。可選4nm
單擊OK，進入下一畫面。
5、進入「Signal Details」畫面，單擊OK，進入下一畫面。
6、進入「Edit Integration Events」（編輯積分結果）畫面，單擊OK，進入下一畫面。
7、進入「Specify report」（積分參數）畫面，單擊OK，進入下一畫面。
8、進入「Instrument curves」畫面，單擊OK，進入下一畫面。
9、進入「Run Time checklist」（運行時間表）畫面，選擇「Date Acquistition」和「Standard Date Analsis」，單擊OK，完成參數設定，回到工作站畫面。
10、單擊「Method」菜單，選中「Save method as」，輸入文件名，單擊OK。（路徑：e\HPCHEM\1\methods\***）
註：如果調用一個方法，則在「Method」菜單，選中「Load method」，選方法名，單擊OK。
11、從菜單「View」中選擇「Online signal」，選中Window 1 ，然後單擊Change鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點OK。（如同時檢測二個信號，則重復11，選中Window 2）。
三、運行樣品
1、單擊泵（Pump）圖標下面的小瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，並且選停泵體積。單擊OK。
2、手動打開Purge閥：逆時針轉2~3圈。
3、單擊泵（Pump）圖標，出現參數設定菜單，單擊Setup pump選項，進入泵編輯畫面。設Flow：5ml/min，單擊OK。
4、開泵：直接點Pump圖標下面的泵開關小圖標，或單擊Pump圖標，出現參數設定菜單，單擊Pump contrlo選項，選中On，單擊OK。
5、系統開始排液（Purge），直到管線內（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止，切換通道繼續排液，直到所有通道無氣泡為止。（每個管線內液體約20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完）
6、單擊泵（Pump）圖標，出現參數設定菜單，單擊Setup pump選項，進入泵編輯畫面。把Flow改為0.5~1.0ml/min，單擊OK。
7、等待流速降下來後，關閉排液閥。
8、待壓力穩定後，從「Instrument」菜單中選擇「System on」或單擊GUI圖標的On圖標啟動系統。開始走基線，並可選擇觀察信號。
註：儀器運行過程，畫面顏色由灰色轉變成黃色或綠色，當各部件都達到所設參數時，畫面均變為綠色，左上角紅色的「not ready」變為綠色「ready」，表明可以進行分析。（此時如果要終止儀器的運行，可單擊流程圖右下角的「off」，再單擊「Yes」，關閉輸液泵和檢測器氘燈）。
9、單擊最大化按鈕，將online Plot窗口放大。待基線平穩後，點信號窗口的「Banlance」，調至零點。
10、等儀器Ready ，從「Runcontrol」菜單中選擇F5或「Run method」。
11、編輯樣品信息：
從「Run control」菜單中選擇「Sample into」選項，選擇「Sample Info…..」，即打開了樣品信息頁面，輸入操作者（Operator Name）、數據存貯通道（Subdirectory）、樣品名（Sample Name）、進樣瓶號（Vial）、濃縮因子（Multipline）、稀釋因子（Dilution）、，「Data file」中選擇 「Prefix」，在Prefix框中輸入批號或日期等，在Counter框中輸入計算器的起始位，儀器會自動命名。（樣品量（Sample Amount）、內標量（ISID Amount）可不選，Location只對自動進樣器有用，不填則走空白，檢查干擾峰的來源。）
單擊OK。
12、進樣分析：
進樣閥扳到Load位置，插入注射器，注樣品，進樣後扳動閥至Inject位置。
13、進樣分析結束，點Close鍵退出樣品分析。
（注意：檢測完盡量要關DAD的燈，以保持燈的壽命。單擊DAD圖標，出現參數設定菜單，單擊control ，選擇關燈。）
四、數據分析方法編輯（可在offline下操作）
1、 從「View」 菜單中選「Date analysis」進入數據分析畫面。該頁面最上方為命令欄，依次為File ，Graphics，Integration……等。命令欄下為快捷操作圖標，如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調用、多色譜圖調用、調用方法、保存等。
2、 從「File」菜單中選「Load signal」，或單擊快捷操作的「單一色譜圖調用」圖標，選擇色譜圖文件名，單擊「OK」，畫面中即出現所調用的色譜圖。
3、 做圖譜優化，從「Graphics」菜單中選擇「Signal options」選項。從Ranges中選擇Auao scale及合適的顯示時間，單擊OK，或選擇「Use Ranges」調整。反復進行，直到圖的比例合適為止。
4、 積分
（1）先調用所要分析的色譜圖，從「Integration」中選擇「Auto integrate」，從「Integration」中選擇「Integration Results」，此時儀器將內置的積分參數給出積分結果。如積分結果不理想，再從「Integration」菜單中選擇「Integration Events」選項，或單擊快捷操作的「編輯/設定積分表」圖標，此時，在屏幕下方左側出現積分參數表，右側為積分結果，在積分參數表中按實際的要求輸入修改的參數，如斜率（Slope sensitivity）、峰寬（Peak width）、最小峰面積（Area reject）、最低峰高（Height reject）等。
（2）從「Integration」中選擇「Integrate」選項或單擊快捷操作的「對現有色譜圖積分」圖標，儀器即按照新設定的積分參數重新積分。
（3）若積分結果不理想，則修改相應的積分參數，直到滿意為止。
（4）完成後，單擊左邊的「ˇ」圖標，將積分參數存入方法。
5、 列印報告：
（1）從「Report」菜單中選擇「Specify report」選項，或單擊最右側快捷操作的「定義報告及列印格式」（右下角帶叉的報告畫面）圖標，進入列印畫面。
（2）根據實際要求選擇報告的格式和輸出形式等。可在「Calculate」右則的黑三角中選「Percent」（面積百分比），其它項不變。（如 「Destination」項下選擇「Screen」； 「Based On」選「Area」；「Sorted By」選「Signal」；「Repirt Style」選「Short」；選擇「Add chromatogram Output（列印色譜圖）」；選擇「With Calibrated Peaks」；選擇「Portrait」；可根據需要選擇「Size」）。
（3）單擊OK。
（4）選擇快捷操作的「報告預覽」圖標，可預覽報告的全貌。從「Report」菜單中，選擇「Print Report」，則報告列印到屏幕上，如想輸出到打字機上，則單擊「Print」，即可進行報告的列印。最後，單擊「close」退出此操作頁面。
6、 定量分析
如果需要進行標准曲線制備，可按此項進行操作。
（1）一級校正表的建立：
在「Data Analysis」界面下，調用最低濃度的色譜圖，在「欄「Calibration」下，選擇「New Calibration Table」，選擇「Automatic Setup Level」，並設校正級數為 「1」，單擊「OK」。在畫下方左側出現校正表，右側為校正圖。在畫面左下側的校正表中選擇所要的色譜峰，輸入校正級數、化學物名稱及濃度，如果採用內標法，需對內標峰進行標記。單擊OK，工作站提示是否刪除0濃度行，單擊Yes 。
（2）二級校正表的建立：
調用第二個色譜圖，在命令欄 「Calibration」下，選擇「Add Level」，設為「2」，單擊「OK」，在畫面左下側的校正表中輸入校正級數、化學物名稱及樣品濃度。（如需對校正表中的某些數據進行重新修正，可調用新的圖譜，在命令欄「Calibration」下，選擇「Recalibration」，並在校正表中輸入校正級數，樣品濃度。）此時，校正表右側自動繪制各組分的標准曲線，並進行線性回歸。單擊校正表中的「Print」，可進行列印。
五、關機
1、 關機前，用過緩沖鹽溶液必須先用100%的水沖洗系統（打開排液閥，調流速為5ml/min，沖洗約5 min，然後調流速為1ml/min，待流速降下來後，關閉排液閥，再沖洗沖洗約20 min）；然後用甲醇同法清洗20min，然後關泵。
注意：此方法適用於反相色譜柱，而正相色譜柱應用適當的溶劑沖洗。
2、清洗進樣器：
將進樣器扳至Load的位置，用專用的注射器裝約10ml適當溶劑沖洗進樣器。
當使用緩沖溶液時，要用水沖洗進樣口，同時扳動進樣閥數次，每次數毫升。
3、退出化學工作站，及其它窗口，關閉計算機（用shut down）。
4、關掉Agilent 1100電源開關。
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③ 安捷倫儀器常見故障現象及可能原因有哪些
5bar=0.5MPa，這個壓力波動范圍算是比較平穩的了。一般波動范圍在10bar以上才叫做大。安捷倫有回壓力的在線監控，你可以看看波答動曲線。
這個波動打不打主要取決於你正常運行時的壓力。如果你運行的時候，壓力在50bar以下，那麼這個波動可能算是稍微有點兒大，如果你的運行壓力在50bar以上，這個波動應該不會影響到你的實驗。
如果你比較在意這個問題，首先一般壓力波動大，先要排除氣泡的原因。你的色譜柱，儀器管路裡面是不是有氣泡。流動相是不是過濾了。排氣閥是不是正常。你是安捷倫的儀器，注意排氣閥的濾芯，那個過濾白頭是不是該換了。
第二，就是柱子的問題。同樣一個實驗，有的柱子做起了，壓力就非常平穩，但是有的柱子就不行。你看看你的柱子怎麼樣，如果是國產的柱子，或者是使用過很多次很老很老的柱子，建議你換一根試試。因為裡面的填料可能崩塌了，流動相一沖，壓力就可能會不穩。
第三就是比較麻煩的問題，就是儀器配件的問題了。壓力不穩可能是單向閥或者是密封圈的問題。如果有安捷倫同型號的儀器，可以互相換一下，排除一下問題。否則你只能請工程師上門來排查故障了。
④ 安捷倫液相在分析樣品時 基線不定時突然下沉，有的樣品下沉有的正常，下沉的時間也不一定，是什麼原因
可能性很多：
流動相的問題：因為安捷倫大多數都是低壓二元或者四元泵，估計你是分AB泵的吧？有的時候在線脫氣機沒有完全過濾掉氣泡，混合不均勻，一不小心基線就漂了。我建議等度的還是手動混合，然後過濾。另外安捷倫可以在線監測壓力。看看你的壓力是不是穩定。
我遇到過一種情況，實驗設計的不好：水相是0.05mol/L鹽溶液，水相-有機相（15：85）。而且是分AB泵在線混合進樣的。乾脆都鹽析了。那個泵一會抽得動，一會兒抽不動。壓力都掉到10bar了，實驗員還問我為什麼基線不穩定……
樣品的問題：這個溶樣品的溶劑如果不是流動相就有進一針空白。有時候合成給的樣品裡面會有有機溶劑。而且極性很小，反相色譜很難沖出來。雖然是它也沒有什麼紫外吸收，不過會影響基線偶爾波動一下的。
檢測器的問題：安捷倫的燈要比島津的燈壽命短。我上次打電話客服說保證1000小時內沒問題（還有一種是保證2000小時內沒問題的，看你的型號了）。你看看氘燈的使用時間。超出限度之後，偶爾氘燈會出現一些不確定的問題。
色譜柱的問題：簡單地說就是色譜柱不幹凈。裡面有一些金屬離子啊，強保留物質啊堵在裡面出不來。進樣的時候偶爾會鬧一下。
這些都是可能出現的原因。如果想找到原因只能一一排查。目前我只能想到這幾種可能，試試看吧
⑤ 色譜柱柱壓高的問題
1、柱子有沒有堵還不好說，因為不同的設備具體壓力也不一樣。壓力是純乙腈<純甲醇<10%甲醇水溶液的。2、關於反沖柱子，色譜柱一般都是有註明方向的，反向沖洗是會影響柱子使用壽命的。不過不同廠家的產品之間存在差異，好的柱子，不建議反向沖洗。最好咨詢廠家後再作處理。3、LZ用的是紫外-可見光分光光度計嗎？這個設備在使用時必須有一個預熱過程，否則它也會造成基線漂移。如果分光光度計沒問題且柱子平衡了很長時間後，基線仍有漂移，那很可能是柱溫沒控制好。4、柱子是絕對不可以用NaOH溶液沖的，ph的話，一般是2-8吧，鹼百性太強會把柱子度上的硅膠都溶掉。如果你是用強鹼性溶液溶解樣品進的樣，那是可能造成出峰太快的。建議使用流動相溶解樣品（或者洗脫強度比流動相小的有機溶劑水溶液），這樣也可以減少樣品在柱子中造成堵塞的幾率。PS：lz可以看看一些企業（島津、waters、安捷倫）的學員手冊，網上很多。裡面有比較系統的講解，對剛剛開始接觸HPLC的人還是很有幫助的。:)
⑥ 安捷倫液相如果過濾白頭堵塞會有什麼現象
安捷倫的液相一般都是通過擰開排空閥，用水開5ml/min的流速，觀察壓力大小來判斷過濾白頭是回否堵塞的，如果答此時壓力>10bar，則說明過濾白頭已經堵塞，需要更換。過濾白頭堵塞導致最明顯的現象就是系統壓力大幅度升高，嚴重的話會導致壓力超過系統壓力上限而停泵。
⑦ 安捷倫1260二元梯度高效液相色譜儀基線波浪形是什麼故障
可能性比較多，建議你在在線工作站中打開壓力檢測的曲線，看看現在壓專力變化是什麼趨勢屬。如果壓力不穩：
建議擰開purge閥排氣，看看壓力是多大。如果排氣速度是5ml/min，壓力超過3bar，那麼可能是安捷倫的過濾白頭該換了。
可能是單向閥堵塞，這個沒有辦法，可能只能更換單向閥，這個配件的價格相當的貴，如果會拆的話可以卸下來超聲一下。
可能是流動相氣泡導致的。在線脫氣裝置可以脫去一部分氣泡，但是如果水和有機相比例比較大，產生氣泡比較多的時候，建議手動混合，然後減壓抽濾脫氣。管路中也有可能存在氣泡，可以卸掉色譜柱，然後用異丙醇低流速沖洗管路。
如果壓力很穩定：
可能是流動相不幹凈，建議重新配置流動相，過濾後超聲。
加長平衡時間。有時候流動相中緩沖鹽比較復雜，色譜柱需要長時間平衡。
色譜柱臟了，可以考慮低流速，用甲醇反沖。或者更換同一品牌其他色譜柱看看情況。
⑧ 安捷倫液譜過濾白頭應如何清洗
呵呵，我們這里以前也是天天的洗，後來安捷倫的工程師說這個是一次性的，不能內洗，洗了就么有容以前的效果好了，所以我們現在都不洗了，洗的話就用5%的稀硝酸煮，注意一定不要把水煮幹了，以前我就煮干過，暈死，大約煮一下午，你可以放燒杯里煮，過一會就往燒杯里加點水，，直到把硝酸完全的蒸發出來，也就是把水煮成中性左右
⑨ 安捷倫的UPLC柱壓力過高，什麼原因造成的
請問你用的是什麼有機相？是甲醇嗎？如果是的話，壓力升高是正常現象。因為甲醇與水混合後壓力就會升高。特別是在40%-70%左右壓力是最高的。
還有你看一下你儀器的在線過濾器堵了沒有（不知你用的是什麼型號的儀器？）