過濾柱提取dna

❶ DNA提取試劑盒的使用方法

以下是BIODAI離心法提取，需自行准備的材料：無水乙醇、生理鹽水、1M NaOH、無RNA酶1.5mL離心管。
1. 取出析出液和洗滌液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL無水乙醇；9mL加入51mL無水乙醇。
b) 洗滌液：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。
c) 配製好的析出液如出現沉澱，可在37溶解，搖勻後使用。
2.樣本處理：a) 拭子：向無RNA酶的1.5mL離心管中加入800μL生理鹽水，將拭子收集的樣本置於生理鹽水中，涮洗20秒，使細胞完全脫落，貼離心管壁擠干拭子上的液體，12,000 rpm 離心5 min，棄700μL上清，剩餘100μL上清，充分振盪混勻。
b) 痰液：向收集的痰液中加入4倍體積1M NaOH，室溫放置30分鍾，每10分鍾振盪混勻一次，12,000 rpm離心5 min，棄上清，加入0.5mL生理鹽水，混勻，12,000 rpm離心5 min，棄400 μL上清，剩餘100μL上清，充分振盪混勻。
3.加入200μL 裂解液和20μL 消化液，振盪混勻，56水浴10 分鍾。
4.加入500μL析出液，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與後續實驗。
5. 將吸附柱放入收集管內，將上述溶液吸入吸附柱內，靜置2 min，12,000 rpm 4離心1 min，棄收集管內廢液。
6.將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液至吸附柱內，12,000 rpm 4離心1 min，棄收集管內廢液。
7. 將吸附柱放回收集管內，12,000 rpm 4離心2 min，離去殘留的洗滌液。
8.取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內，加入30-50 μL 洗脫液，靜置3 min，12,000 rpm 4 離心2 min，收集RNA溶液。
9.-70保存，或直接用於下一步實驗。

❷ 全血DNA的提取能不能更簡便的方法

你可以使用全血DNA試劑盒
可以無需事先分離去除紅細胞
無需蛋白酶K消化步驟,適用於從全血中分離純化最多達15 μg總DNA.·15分鍾內即可完成血液總DNA的制備.
無須事先分離去除紅細胞及蛋白酶K消化步驟.
可從新鮮或者是冷凍的全血、溶血的全血、唾液、 細胞懸浮液等標本中分離純化總DNA.
核酸純化柱可最大吸附15μg 總DNA.
起始樣品體積：200 μl- 400 μl全血.
徹底清除血樣中的PCR抑制物,可使用多至1/2反應體系體積的模板進行擴增.
所需儀器：可適合2 ml離心管使用的離心機.
原理：全血樣品經裂解液溶解後,用沉澱液沉澱血紅蛋白.柱純化核酸技術過濾除去殘留的血紅蛋白,吸附在純化柱上的總DNA經Buffer WA和Buffer WB洗滌後,可徹底清除殘留在純化柱上的雜質及PCR抑制物.純化柱上的總DNA可直接用BufferTE或水洗脫,並可立即用於各種分子生物學實驗.
步驟：在400 μl全血中加入300 μl Buffer L1溶解全血釋放DNA,再加入300μl Buffer L2沉澱血紅蛋白,離心取上清加入純化柱中,經過結合、清洗步驟去除殘留的雜質後,DNA即可被TE溶液洗脫下來.

❸ DNA提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些

質粒抽提流程詳解——沉澱菌體
檢查細菌培養情況，將明顯渾濁的菌液倒在已經編號的2ml的沉菌用離心管里，在約12000轉/min的速度下離心沉澱1分鍾，保證無懸浮物後取出；將離心管倒扣在衛生紙上，用力敲擊，至液體培養基完全去除；如發現菌體沉澱的少，可多加2ml菌液重復沉菌一次。
在離心管中加入250µl 加過RNaseA1酶的Buffer S1，用振盪器震盪，直到沉澱完全充分懸浮。
1. Buffer S1是什麼？主要組分是什麼？
50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0

2. Buffer S1的功能是什麼？
50 mM葡萄糖：加了葡萄糖後最大的好處只是懸浮後的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部。因此，如果Buffer S1中缺了葡萄糖其實對質粒的抽提本身而言，幾乎沒有任何影響。
EDTA ：大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，配在分子生物學試劑中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生長。在Buffer S1中加入高達 10 mM 的EDTA，無非就是要把大腸桿菌細胞中的所有二價金屬離子都螯合掉。如果不加EDTA，只要是在不太長的時間里完成質粒抽提，就不用怕DNA會迅速被降解，因為最終溶解質粒的TE緩沖液中有EDTA。 ——但是對於測序而言，我們是用水溶解質粒，所以EDTA是必須的。

3.如果抽提質粒恰好Buffer S1用完了，可不可以用水代替？
只要用等體積的水，或LB培養基來懸浮菌體就可以了。有一點不能忘的是，菌體一定要懸浮均勻，不能有結塊。

質粒抽提流程詳解——裂解
在離心管中加入250µl Buffer S2，上下緩慢顛倒7~8次至混旋液澄清（這步的操作時間不得超過4分鍾）；
☆ 注意：顛倒時不能太劇烈，否則會有核DNA污染；如果Buffer S2因溫度過低有SDS沉澱析出，可將其放置55~60C水溶鍋中適當加熱至澄清後再用。
1.抽提質粒的原理是什麼？
鹼裂解法

2. Buffer S2是什麼？主要組分是什麼？
0.2 N NaOH / 1% SDS
SDS：十二烷基磺酸鈉（Sodium dodecyl sulfate，SDS），是洗潔精的主要成分。常用於DNA提取過程中使蛋白質變性後與DNA分開。

3.Buffer S2的功能是什麼？
NaOH：NaOH是最佳的溶解細胞的試劑，不管是大腸桿菌還是哺乳動物細胞，碰到了鹼都會幾乎在瞬間就溶解。用了不新鮮的NaOH，即便是有SDS也無法有效溶解大腸桿菌，自然就難高效率抽提得到質粒。如果只用SDS當然也能抽提得到少量質粒，因為SDS也是鹼性的，只是弱了點而已。
4.加入Buffer S2為何時間不能太久，動作要輕柔？
第一，時間不能過長，千萬不要這時候去接電話，因為在這樣的鹼性條件下基因組DNA片斷會慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合，不然基因組DNA也會斷裂。

質粒抽提流程詳解——中和
加入400ul Buffer S3，劇烈顛倒5~10次，使之充分中和，同時將大塊白色沉澱振成小塊，便於離心。
在約13600轉/min的速度下離心沉澱12分鍾，如有因沉澱不完全引起的白色絮狀物質，可重復振盪離心直至沉澱完全。
1. Buffer S3是什麼？主要組分是什麼？
3 M 醋酸鉀 / 2 M 醋酸

2.加入Buffer S3後出現的白色沉澱是什麼？&3.Buffer S3的功能是什麼？
每個人都知道，溶液III加入後就會有大量的沉澱，但大部分人卻不明白這沉澱的本質。
最容易產生的誤解是，當SDS碰到酸性後發生的沉澱。如果你這樣懷疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是這么回事了。大量沉澱的出現，顯然與SDS的加入有關系。如果在溶液II中不加SDS會怎樣呢，也會有少量的沉澱，但量上要少得多，顯然是鹽析和酸變性沉澱出來的蛋白質。既然SDS不是遇酸發生的沉澱，那會不會是遇鹽發生的沉澱呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你會發現SDS在高鹽濃度下是會產生沉澱的。因此高濃度的鹽導致了SDS的沉澱。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你會發現沉澱的量要多的多。這其實是十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子後變成了十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此發生了沉澱。如此看來，溶液III加入後的沉澱實際上是鉀離子置換了SDS中的鈉離子形成了不溶性的PDS，而高濃度的鹽，使得沉澱更完全。大家知道SDS專門喜歡和蛋白質結合，平均兩個氨基酸上結合一個SDS分子，鉀鈉離子置換所產生的大量沉澱自然就將絕大部分蛋白質沉澱了，與此同時大腸桿菌的基因組DNA也一起被共沉澱了。這個過程不難想像，因為基因組DNA太長了，長長的DNA自然容易被PDS給共沉澱了，盡管SDS並不與DNA分子結合。

2 M的醋酸的作用是什麼？
是為了中和NaOH，因為長時間的鹼性條件會打斷DNA，所以要中和。基因組DNA一旦發生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒有辦法再被PDS共沉澱了。所以鹼處理的時間要短，而且不得激烈振盪，不然最後得到的質粒上總會有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶。

質粒抽提流程詳解——純化
將上步離心上清液用移液器轉移到吸附柱上，在約10500轉/min的速度下離心1分鍾。
注意：不要把沉澱物轉移到吸附柱里，1個樣品使用1個槍頭。

為何離心上清液經離心後，質粒DNA就被吸附到膜上？
在高鹽狀態下，硅膠膜專一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態下，DNA被洗脫下來。

質粒抽提流程詳解——洗滌脫鹽
取出DNA吸附柱，棄掉廢液收集管中的液體，將柱子放回這個離心管中，加入500ul Wash Solution到柱子中，高速離心（10,000rpm)30秒。
重復上述步驟一次。
取出DNA吸附柱，棄掉廢液收集管中的液體，將柱子放回這個離心管中，最大速度離心2分鍾
使用Wash Solution要進行兩次洗滌，目的是使殘留的蛋白、鹽離子等雜質更充分的被去除，保證硅膠膜上吸附的DNA盡量純。

質粒抽提流程詳解——產物回收
將DNA吸附柱移入新的1.5ml離心管中，在DNA吸附柱的膜中央加入30-40ul 預熱無菌雙蒸水，室溫放置2分鍾後12，000rpm離心1分鍾，離心管底即為質粒DNA。

❹ 過柱法提取dna可以過濾細菌么

完全可以。
對數期的細菌生長速度快，生命力旺盛，比較健康。
在室溫下，細菌依然在生長，只是生長速度較慢而已。換句話說，細菌依然處於有活力狀態，對DNA提取沒有影響。
如果是提取質粒DNA，細菌搖床培養後，可以放至4度，在4度條件下放一夜，提取質粒不受影響，個人親身經驗。

❺ DNA提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些

DNA的粗提取
①准備材料
將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24
h。
②取材
稱取30
g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨
將碎菜花放入研缽中,倒入10
mL研磨液,充分研磨10
min
。
④過濾
在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1
000r/min的旋轉頻率,離心25
min,取上清液放入燒杯中)。在4
℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精
將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35
min後,可見白色的DNA絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)DNA的鑒定
①配製二苯胺試劑
取0.1
mL
B液,滴入到10
mL
A液中,混勻。
②鑒定
取4
mL
DNA提取液放入試管中,加入4
mL
二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100
℃)加熱10
min
。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
Tris：10.1
g(相對分子質量為121.14),先加50
mL
蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2
moL/L
的鹽酸調至pH8.0,再加下述葯品。
NaCl：8.76
g(相對分子質量58.44)
EDTA：37.2
g(相對分子質量372.24)
SDS：20
g(相對分子質量288.3)
待上述葯品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1
000
mL。
若在室溫低於20
℃時配製葯液,SDS呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將SDS溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種葯品的作用
SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與DNA分離。
EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後DNA酶降解DNA。
物質的量濃度為0.15
moL/L的氯化鈉溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供緩沖體系,DNA在這個緩沖體系中呈穩定狀態。(Tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑒定DNA的其他方法
用紫外燈照射法鑒定DNA效果很好。具體鑒定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(EB)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴EB溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260
nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(DNA的紫外吸收高峰在280
nm處)。
O(∩_∩)O~

❻ 如何鑒定提取質粒DNA的質量和含量

用瓊脂糖凝膠電泳鑒定質粒DNA。

瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應，DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。

由於糖磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。

不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethim bromide ,EB)，在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶，在電場中，pH8.0條件下，凝膠中帶負電荷的DNA向陽極遷移。

(6)過濾柱提取dna擴展閱讀：

質粒DNA提取方法

1，鹼裂解法

2，煮沸裂解

3，羥基磷灰石柱層析法

4，質粒DNA釋放法

5，酸酚法等。

選擇哪一種方法取決於以下幾個因素

1，質粒的大小

2，大腸桿菌菌株

3，裂解後用於純化的技術和實驗要求

❼ 不用試劑盒如何純化DNA

那要看你用什麼方法測定DNA和RNA：
（1）紫外吸收法也就是測量OD（260）和OD（280）的吸收值，這樣的方法其它的雜質對測量結果影響大一點，因為其它雜質在這兩個吸收波長也有吸收。
（2）熒光法，用PicoGreen熒光染料，測定DNA，RNA濃度比較靈敏，並且適合測量低濃度和微量DNA和RNA，並且受其它雜質的影響不大，缺點要有專門的熒光檢測儀器，試劑比較昂貴。
純化DNA可以買試劑盒，主要有膜吸附法，磁珠分離法，都很方便。

酶解法(纖維素酶,果膠酶)去除細胞壁;然後至於蒸餾水中,使其吸水脹破,
加熱後冷卻,用玻璃棒攪拌,會慢慢析出.

PUREGENE DNA提取試劑盒常見問題及解答
方法：
Q PUREGENE DNA提取試劑盒是建立在什麼方法基礎上的？
A PUREGENE DNA提取試劑盒是建立在一個改良的鹽沉澱方法之上的。
Q 預期的A260／A280？
A 預期的A260／A280為1.7-2.0。

Q 提取的基因組DNA的預期長度為多少？
A 一般來說，提取的長度大於100kb，通常為100-200kb。

Q 有無試劑盒內溶液成分的說明？
A 除DNA溶解液外未向客戶提供盒內溶液成分具體說明。

Q DNA溶解液的成分是什麼？
A DNA溶解液的成分為100mM Tris，1mM EDTA，pH值為7.0-8.0。

保存：
Q PUREGENE試劑盒應在何種溫度下保存？
A 所有成分室溫下保存，但諸如RNase A溶液和溶菌酶（Lytic Enzyme Solution）之類的酶除外，需4
℃保存。

Q 細胞裂解液中有沉澱，還能使用嗎？
A 如果在較冷的天氣下或在低溫下保存，細胞裂解液中的SDS可能形成沉澱，可將裂解液在37-65℃水
浴中加熱直到沉澱溶解，混勻再使用。

Q RNase A在室溫下可保存多久？
A RNase A在室溫下至少可保存8周。

Q PUREGENE DNA提取試劑盒保質期為多長時間？
A 三年以上。

Q 提取的DNA可保存供以後使用嗎？
A 可以的，PUREGENE DNA在4℃可穩定保存5年以上，在-20℃可長期保存。但應注意避免反復凍融
以減少DNA片段受損。

標本處理和操作方法：
Q Gentra公司推薦的血液標本收集管為何種類型？
A Gentra公司推薦使用EDTA管對血液標本進行收集，也可用ACD管。但是建議您不要使用含抗凝劑肝素
的收集管，因為肝素在PCR中可抑制Taq酶的活性。

Q 可以從凍存的血液標本中提取DNA嗎？
A 可以的。Gentra建議將凍存的血樣在37℃水浴中迅速解凍，使用前一直置於冰上以減少內源性DNase的
活性。然後，按全血中提取DNA的方法進行RBC裂解，將血樣凍結後分成幾部分提取是有效的措施。

Q 研究者可以用PUREGENE DNA提取試劑盒從血凝塊中提取DNA嗎？
A 可以。Gentra可提供從血凝塊中提取DNA的操作方法。

Q 在開始的孵育過程中如果紅細胞裂解不完全，可以重復紅細胞裂解步驟嗎？
A 可以。當標本中紅細胞的含量過多時，可能會發生紅細胞不完全裂解，這時可以重復紅細胞裂解步
驟。

Q 當加入細胞裂解液後，在標本中有細胞凝集塊，該怎麼辦？
A 凝集塊的出現很可能是因為在加入細胞裂解液之前細胞未能徹底懸浮。解決方法：標本在細胞裂解液
中孵育，不時地振盪直至在37℃室溫下將溶液混勻，或在標本中加入蛋白酶K（終濃度為100礸/ml），
55℃孵育直到細胞徹底地被裂解。

Q 在蛋白沉澱步驟中，如果離心後仍未見到蛋白沉澱，或蛋白沉澱很鬆散，該怎麼辦？
A 建議您在離心前將標本再次振盪20秒，並置於冰上5分鍾。如果標本在加入蛋白沉澱液之前沒有冷卻
至室溫或充分振盪20秒鍾使得蛋白沉澱液和細胞裂解液未能充分混合，蛋白沉澱鬆散的情況就會出現。

Q 在蛋白沉澱步驟中振盪樣品20秒鍾會使DNA片段斷裂嗎？
A 不會的。PUREGENE方法是一種非常溫和的改良的鹽沉澱方法，與使用有害化學物質的有機溶解和柱式
方法相比，PUREGENE方法振盪引起斷裂的DNA片段最少。

Q 可以從比說明書中所提及的標本更小或更大的標本中提取DNA嗎？
A 可以的。因為PUREGENE可以根據標本量大小來升級、降級操作。

Q 可以通過真空離心法（speed-vac）乾燥DNA嗎？
A 不可以的。因為使用這種方法乾燥DNA，標本很容易過度乾燥而造成溶解困難。建議您將DNA在室
溫下風干10-15分鍾，使乙醇完全揮發，僅有水滴留在管壁，從而不會干擾下一步的DNA分析。

Q 怎樣測定從標本中提取的DNA量 ？
A 分光光度測定法。Gentra可提供紫外定量的方法，具體方法參見說明書。

Q 如果A260／A280小於1.6，也就是DNA樣本被蛋白質污染，該如何純化DNA？
A 為了去除蛋白污染，DNA標本可按標准方法進一步純化。蛋白質污染往往是由於起始標本量過多造成
的，因此需注意說明書中規定的起始標本量的范圍。

Q 如果A260／A280大於2.0即存在RNA污染，該怎麼辦？
A 重復進行RNase A處理，對DNA重新沉澱，對含有大量RNA的標本，延長RNase A的處理時間（15
分鍾到30-60分鍾）直至RNA完全被去除。

Q 使用PUREGENE DNA提取試劑盒對DNA進行提取時，好的終止方法是什麼？
A 好的終止方法為：
1. 當加入細胞裂解液後，大多數標本在室溫下至少18個月內保持穩定。
2. 加入100％異丙醇的標本在室溫下可長期保存。

Q 為什麼實際提取的DNA產量比預期值低？
A 如果細胞未被完全裂解，會導致產量的降低。根據操作方法中的起始標本量進行加樣非常重要。細胞量過少可能會使DNA提取的化學試劑產生不平衡，並抑制DNA的沉澱，細胞量過多使細胞不能完全裂解。在任一情況下，均會使DNA產量偏低。

Q 標本中細胞含量太低，估計會得到較低產量的DNA，獲得最大量DNA的最佳方法是什麼？
A 當從少於2×105萬個細胞的標本中提取DNA或預期產量較低時，可將糖原加入異丙醇中作為DNA的載體。Gentra建議每600禡異丙醇中加入1禡糖原（20mg/ml）。

擴增：
Q 為什麼通過PCR擴增無產物？
A 通過這種方法提取的DNA產量往往很高。但是，當過量的DNA加入PCR系統中可能使反應抑制。建議每50禡反應體積中加入25-1,000ngDNA，DNA體積不宜大於PCR反應體積的1／10。除此之外，可增加PCR體系中的MgCl2濃度。

Q 為什麼DNA不被限制性內切酶完全消化？
A 常見原因是反應體系中加入的DNA過量，建議每微克DNA使用2U的限制性內切酶。

Q 純化的DNA可以作PCR、Southerns或測序嗎？
A 完全可以的。

❽ DNA提取的原理

原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。
3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。
方法步驟:
1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌，稍快，稍重。
5
min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢
4.過濾:取黏稠物
5.再溶解:順時針方向攪拌，較慢。3
min
6.過濾:取濾液。
7.提取出含雜質較少的DNA，逆時針方向攪拌，稍慢。5
min
8.DNA的鑒定:沸水浴5min
大學:
DNA提取分為三個基本步驟，每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。
利用研磨或者超聲破碎細胞，並通過加入去污劑以除掉膜脂。
加入蛋白酶，醋酸鹽沉澱，或者酚/氯仿抽提，以除掉細胞內的蛋白，如與DNA結合的組蛋白。
將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉澱，因為DNA在醇中不可溶而黏在一起，這一步也能除掉鹽分。
另外，目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒。
2.細胞的破碎
細菌有堅硬的細胞壁，首先要破碎經胞。方法有三種;①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法:用SDS處理細胞;③酶解法:加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細胞壁破碎。
3.DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
A.
利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M
氯
納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的
氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA
鈉鹽沉澱出來.
B.
也可用0.15
MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀鹽酸溶液提取DNA
時,加入適量去污劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA
的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA
的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA.
(2).陰離子去污劑法;
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA
.由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA
聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相，而DNA溶於水相。離心分層後取出水層，多次重復操作，再合並含DNA
的水相，利用核酸不溶於醇的性質，用乙醇沉澱DNA
。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態
(4).水抽提法:利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA，然後將沉澱溶於水中，使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66%
，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
結果就是得到DNA