雞蛋溶菌酶用陽離子交換法

❶ 溶菌酶是從哪兒提取出來的

溶菌酶廣泛存在於鳥類、 家禽的蛋清中和哺乳動物的淚液、 唾液、 血漿、 乳汁、 胎盤以及體液、 組織細胞內,其中在蛋清中含量最豐富 (約 0.3% )。在一些植物體如捲心菜、 蘿卜、無花果和微生物體內也存在溶菌酶,只是含量差異較大。
現在還沒有看到可以從玉米中提取處溶菌酶的文獻，最常用的提取原料還是雞蛋清

❷ 如何從發酵液中分離一個蛋白酶如何測定其表達量和酶活

首先，去除菌體和殘余的發酵液，一般高速離心就可以，5000r/min離心1min.取上清。此部要根據蛋白質的特點來做。若果蛋白酶是在細胞內那麼要先破碎細胞，如果該酶的分子量過大，那麼要減小離心轉速。
其次，蛋白酶溶液中根據酶的性質，處理純化或提取。常用方法是有機溶劑提取法，陰、陽離子交換柱層析發，液相色譜法等。這要根據蛋白質的性質，是否帶電荷帶什麼電荷等。

關於酶活，應該每一步都要測定酶活，可用該酶分解蛋白質的特點，看一定的酶量在單位時間里分解蛋白的量，如果有特殊吸收峰的話可用紫外分光光度計測吸光度。

表達量，一般定量表達，常用方法是基因水平Realtime-PCR，蛋白水平，westen-blot法。也可參考其他相關文獻的方法。

❸ 溶菌酶的制備

溶菌酶是採用生物工程技術進行克隆、提取而製取,它是一種天然酶，安全綠色的添加劑，無抗葯性。
該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。
溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內，分子帶正電荷，可吸附於弱酸性陽離子交換樹脂上，洗脫後鹽析，可得溶菌酶沉澱，再進行精製可得成品。蛋清吸附↓724樹脂洗滌↓緩沖液洗脫↓硫酸銨溶液鹽析透析去鹼性蛋白↓NaOH凍干溶菌酶凍乾粉沉澱乾燥溶菌酶在5～10℃下，將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中，攪拌吸附6h，在0～5℃靜置過夜。傾出上層蛋清，樹脂離心甩干，用蒸餾水反復洗去黏附的卵蛋白，然後將樹脂裝入柱內，用0?15mol/L、pH=6?5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂，再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨，使最終含硫酸銨量為40%，有白色沉澱生成，冷處放置過夜。虹吸上層清液，沉澱吸濾抽干，再用1倍蒸餾水溶解沉澱呈稀糊狀，然後裝入透析袋，在約5℃的條件下，對蒸餾水透析24h左右，中間換水2～3次。離心去除沉澱，沉澱再用少量水洗一次，洗液與離心液合並。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌，使pH值上升到8?0～9?0，如有白色沉澱，即離心除去。然後用3mol/L鹽酸調pH=5?0，冷凍乾燥，即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調pH=3?5，在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉，在約5℃的溫度下靜置48h，離心，沉澱用0℃丙酮洗滌，乾燥，即得溶菌酶。

❹ 有誰知道雞蛋提取溶菌酶的合作項目是真是假 多謝

一種用雞蛋提取溶菌酶的新工藝技術
本發明公開了一種用雞蛋提取溶菌酶的新工藝。該工藝是在現有工藝中的沉澱步驟中加入氧化鋅參與溶菌酶的沉澱，這樣就可解決多年來人們單純使用硫酸銨沉澱溶菌時，沉澱速度慢及沉澱不完全的問題，同時可提高溶菌酶的活性，通過該工藝可使溶菌酶的沉澱速度提高6－12倍。
一種分離溶菌酶的方法
本發明分離溶菌酶的方法，以雞蛋清為原料，加水適當稀釋後，攪拌均勻，加酸調pH值至4．0－5．0，靜置、過濾除去沉澱，將濾液升溫至75－80℃，冷卻至室溫，靜置不少於10小時，過濾得上清液，加鹼調pH值為7．5－8．0，加乙醇至產生白色沉澱，過濾，沖洗，乾燥即得產品；本方法工藝步驟簡、生產周期短、溶菌酶得率高；所製得的溶菌酶可用作防腐用的食品添加劑。
一種生產基因工程重組人溶菌酶的方法
一種生產基因工程重組人溶菌酶的方法，是運用分子生物學技術和基因工程技術，將人溶菌酶基因克隆入酵母菌體內進行表達，然後通過提取、純化制出人溶菌酶。本發明由於利用基因工程重組技術，發酵生產人溶菌酶，能夠較大批量生產人溶菌酶，又避免了從組織中提取易受病源污染的問題，其產品具有穩定、純凈的特點。
溶菌酶親和層析凝膠介質的制備方法
溶菌酶親和層析介質的制備方法。將殼聚糖溶於醋酸或鹽酸溶液中，再加入3－6倍體積的甲醇，過濾，於濾液中加入脂肪酸酐讓其醯化成凝膠狀，搗碎凝膠並用水將其洗至中性，用5－10％的NaOH或KOH溶液處理以脫去非N－位的脂肪醯化，再用水洗至中性，在酸性條件下用亞硝酸鹽氧化除去凝膠內未醯化的游離氨基，而後用鹼調至中性，用水洗去酸和鹽類等殘留物抽干即得所需的介質。
蘿卜溶菌酶及其制備方法
本發明是以蘿卜的根葉為原料，經勻漿浸提過濾，濾液經親和吸附，裝柱洗滌和親和洗脫、收集酶液、透析、濃縮和凍干成酶制劑。酶活力高達4－7萬U／mg。蛋白，酶的活性中心含有Trp、His、Glu和Asp殘基，殺菌譜廣，不僅對G↑〔＋〕菌有殺滅作用，對G↑〔－〕菌同樣有殺滅作用。蘿卜溶菌酶的成功提取，將為食品業、農作物的病蟲害防治上和葯醫治療上開拓了新途徑。
從鹹蛋清中提取溶菌酶方法
鹹蛋黃被廣泛應用於食品加工中，而鹹蛋（鴨蛋或雞蛋）取黃後留下的鹹蛋清因含有極高濃度的食鹽和異味限制了應用而常被廢棄。本發明經普查表明鹹蛋清中尚含有豐富的溶菌酶含量，可以作為生產溶菌酶的原料；進而採用脫氨醯化殼聚糖凝膠親和吸附法，直接從鹹蛋清中僅經一步便純化得溶菌酶，所得純化酶的比活力大於70000U／mg蛋白，回收率可達70％。
一種以溶菌酶為主要成分的外用凝膠劑及其制備方法
本發明是一種以溶菌酶為主要成分的外用凝膠劑及制備方法。該凝膠劑可以是水性凝膠，也可以是油性凝膠。根據需要配方中可以加入少量抗菌劑、抗病毒劑、抗滴蟲劑、消毒防腐劑、潤滑劑、清涼劑和芳香劑等輔助劑。適用於陰部感染的女性，更年期婦女及已婚婦女日常衛生保健，還可用於旅館、居家的浴缸、浴盆等潔具的消毒，防止性病傳播和預防交叉感染。本發明用於消炎殺菌、清潔陰道、消除瘙癢、清除異味，總有效率達81．58％。動物實驗結果表明該產品無毒、無刺激性和致敏性，對使用者衛生、安全、無害。具有預防保健效果好、使用方便、作用維持時間長、副作用小，適用范圍廣等特點，是一種安全、衛生的新型陰部保健品。
溶菌酶在奶製品中的應用
本發明提供了溶菌酶的一種新的應用領域，即溶菌酶在奶製品中的應用技術，其作法是：在溶菌酶中加入保護劑，混合均勻後成溶菌酶集合物，按常規生產工藝製作奶製品，在生產進行到最後一步－分裝工序之前，加入溶菌酶集合物，混勻後再分裝出廠，成品奶製品中溶菌酶的活性在60℃－80℃時不失活，且含量可達到人乳的水平，採用本發明應用技術生產的奶製品，其營養成份豐富，具有很好的免疫功能，可取代現有的牛乳製品喂養嬰幼兒，增強嬰幼兒的免疫、抗病能力。
一種溶菌酶蛋白生產工藝及其應用
本發明涉及一種人溶菌酶蛋白生產工藝。目前市場上的溶菌酶蛋白都來源於其他種屬動物機體，對人體而言是異種蛋白，有很強的抗原性，副作用大。本發明的生產的溶菌酶蛋白具有人源的天然氨基酸序列，解決了異源性溶菌酶用於人體內的抗原性問題。更重要的是，人體中的溶菌酶活性最高，本發明提供的蛋白生產工藝與傳統工藝相比，分離純化步驟簡單易行，能得到較高的蛋白投入產出比，為人溶菌酶蛋白的工業化生產提供了一個高效的生產工藝。本發明還涉及上述方法及其產物的應用。
人核糖核酸酶U和人溶菌酶的兩種進化酶
本發明涉及兩種人源酶的分子進化酶。本發明的進化酶分別是以人核糖核酸酶U和人溶菌酶為原料，經過基因釣取，定向進化，表達篩選等步驟，最後製得。本品具有制備工藝簡單、生產成本低、酶活力較高、穩定性好、應用價值大等優點，可獨自或聯合廣泛地應用於抗菌葯物、抗病毒葯物、抗炎症葯物、治療齲齒葯物、治療愛滋病葯物等醫葯工業各領域。
高表達、高純度、高活性基因重組人溶菌酶的生產及用途
本發明涉及一種高表達、高純度、高活性基因重組人溶菌酶的生產方法及其新用途。提供了利用提取純化的基因工程技術表達的人溶菌酶的溶菌活性，用於臨床上細菌和真菌的感染，特別是耐葯性細菌感染的治療方法，以及革蘭陰性菌感染治療後內毒素引發的後遺症的治療方法。提供了用於各種治療用途的抗生素和人溶菌酶的葯用組合物。
從雞蛋及鳥類蛋提取溶菌酶的方法
本發明的名稱是：從雞蛋及鳥類蛋提取溶菌酶的方法。屬於提取生物活性物質技術領域。本發明的目的在於：提供一種溶菌酶的提取方法，簡單、易操作。本發明採用下述步驟：獲取蛋清，加入氯化鈉溶液並攪拌；加入鹽酸溶液，水域加溫至40℃；自然冷卻至常溫，加入乙酸溶液，水域加溫至80℃；離心後過濾，在濾清夜中加入氯化鈉攪拌後再次加溫至60℃；加入丙酮，濾取白色絮狀物，自然乾燥後，碾粉並包裝。
制備溶菌酶的方法
本發明提供一種制備溶菌酶的有效方法，其特徵為使用硅藻土、高嶺土、沸石或其混合物選擇性地吸附蛋白中的溶菌酶，及隨後以離子溶液進行洗提。上述硅藻土、高嶺土及沸石對溶菌酶具有優異的選擇性吸附能力，可提高溶菌酶的純化倍數。
一種人溶菌酶系列化妝品及其制備方法
本發明涉及一種化妝品及其制備方法，特別是涉及一種人溶菌酶Humanlysozyme系列化妝品及其制備方法。人溶菌酶系列化妝品的主要成分是人溶菌酶Humanlysozyme（HLZ），其工藝過程如下：首先將人溶菌酶制備後備用，先將原料進行攪拌，均質乳化後冷卻到45度，將制備好的人溶菌酶到入，經真空脫氣攪拌至一定溫度即可。積極效果在於原料易得，工藝簡單，效果顯著，並且易於推廣應用。

家用長效除臭劑

本劑是以沸石、氯化鎂、氧化鎂和安息香酸配製成的家用長效除臭劑。一、特點：（1）除臭力強是。由於沸石和氯化鎂、氧化鎂相混合，沸石微孔結構中吸附的大氣中的水分，能被氧化鎂和氯化鎂吸附，因而使沸石微孔結構的孔隙得到再生，使沸石的除臭能力牧師以充分發揮；再加氯化鎂和氧化鎂也都有除臭功能，故作為整體，除臭力強是。（2）有效除臭期長。沸石與氯化鎂、氧化鎂相配合，使氧化鎂包覆於氯化鎂的外部表面，從而使氯化鎂的吸濕能力得到適當抑制，使氯化鎂不致因為吸濕過多而潮解。因此，三者得以長期發揮作用，使有效除臭期大幅度延長。（3）除臭性能穩定。本劑中加有安息香酸，可以防止除臭劑因吸附臭氣和水分而受到損害。可保持性能穩定、長期使用效果好。（4）原料價廉易得。二、用途：可用於廁所、居室、病房、鞋箱等除臭。編號35189

L—抗壞血酸—硫酸亞鐵多效除臭劑

除臭劑種類雖多。但各有不足。例如，覆蓋型除臭劑，只能將臭覆蓋掩蔽，不能除去，因而往往要殘留異臭；吸附型除臭劑，因吸附容量所限，屆時吸附能力必然降低或喪失；酸鹼中和型除臭劑，除臭范圍只限於能夠同酸鹼相結合的物質；含枸櫞酸和順丁烯二酸類的除臭劑，不能除去硫醇類臭氣等。本劑是以L-抗壞血酸和硫酸亞鐵為有效成分配製而成，不存在上述缺點，是能夠除去各種惡臭的多效除臭劑。一、特點：（1）原料易得，價格低廉，製造容易，使用方便。（2）本劑中含有的L-抗壞血酸，可使硫酸亞鐵經常維持活性狀態，使之與氨、胺臭中的胺形成絡合物，與含硫惡臭中的硫生成（鐵-硫）鍵，故對於氨類惡臭和含硫惡臭均能有效除去，除臭范圍廣的。（3）性能穩定，即使長期暴露於空氣中或潮濕條件下，除臭效果也無變化。（4）原料都是公認的可食性物質，即使同食品接觸，也可以確保安全。（5）可以製成各種形態。使用於各個領域。二、用途：用於廁所、垃圾箱、冷庫、冰箱等的除臭，均有良好效果。特別是用於除去氨類、硫醇類的惡臭，效果尤佳。用本劑的液體除臭劑浸漬紙、布等，製成除臭片或除臭紙，直接包裹魚、肉等食品，貯放於冰箱、冷庫、防止其臭味向其他食品轉移和串味，或用於去除冰箱、冷庫的異味，也有良好效果。編號35191

人體消臭劑

為消除來自人體的惡臭--腋臭、汗臭、腳臭、頭發臭、生理臭等，使用的消臭劑，大多是由作為抑汗劑使用的具有收斂作用的羥基氯化鋁、殺菌劑六氯酚，或各種季銨化合物及掩蔽劑丁子香酚等，單獨或經任意組配製成。然而，這些消臭劑的使用效果並不能完全令人滿意。例如，抑汗劑，從生理學看，並不能完全抑制發汗；殺菌劑，因安全性問題，並不能以有效的足夠的濃度添加；掩蔽劑同汗臭摻合在一起，又會產生惡臭等等。因而不能得到滿意結果。本劑是以合成樹脂和金屬氧化物製成的復合粉體為消臭活性物質，再根據需要加入各種添加劑配製而成，用於消除人體惡臭，取得了比較滿意的結果。一、特點：（1）消除人體惡臭，效果好。（2）使用安全，對人體無害。（3）可以製成各種劑型，例如氣溶膠、粉劑、膏劑、棒狀等劑型，使用方便。二、用途：適用於消除來自人體的腋臭、汗臭、腳臭、頭發臭、生理臭等各種惡臭。編號35198

❺ 關於從蛋清中提取溶菌酶及其結晶觀察

溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質酶（muramidase）或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。

由於雞蛋清中的溶菌酶為鹼性，一般採用酸性樹脂進行提取。

得到溶菌酶粗提物後，在不斷攪拌下加入研細的硫酸銨固體是為了鹽析出溶菌酶。

向蛋白質溶液中加入某些濃的無機鹽[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液後，可以使蛋白質凝聚而從溶液中析出，這種作用叫做鹽析。這樣析出的蛋白質仍可以溶解在水中，而不影響原來蛋白質的性質。因此，鹽析是一個可逆的過程。利用這個性質，可以採用多次鹽析的方法來分離、提純蛋白質。

❻ 科學家將煮熟的雞蛋重新溶解是怎麼實現的

高溫下熱處理蛋清後蛋清凝固就是一種蛋白質變性的過程。高溫條件下蛋白質分子中的氫鍵斷裂，但其一級結構沒有發生變化，蛋白的空間結構遭到破壞後，原來在蛋白內部的疏水基團暴露出來，發生疏水互作，蛋白的溶解度降低發生沉澱。
而8M的尿素為什麼能重新溶解變性後的蛋清呢？
1、尿素在4M-8M時都能斷裂氫鍵，是蛋白質發生不同程度的變性，因此尿素本身也是一種變性劑。但是高濃度尿素可以使蛋白完全變性，使蛋白以無規則捲曲的狀態存在；
2、尿素具有形成氫鍵的能力，尿素在8M濃度下時，可以破壞水的氫鍵，降低疏水相互作用，使蛋白質分子內部暴露的疏水基團伸展和溶解性增加。
這一技術已經不新鮮了，實驗室中常用的除了尿素還有鹽酸胍，它們都是變性蛋白較好的溶解劑。在體外表達蛋白時，大腸桿菌由於缺少蛋白折疊輔助因子或者蛋白表達率過高來不及折疊，此時很容易形成非正常折疊的蛋白造成包涵體的出現。常見的純化方法是將包涵體分離出來用尿素重新溶解包涵體蛋白後再復性蛋白質。

❼ 雞蛋能提取溶菌酶嗎

溶菌酶 溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質酶（muramidase）或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。 該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。 溶菌酶的應用過程中的優點 （1）溶菌酶是很穩定的蛋白質，有較強的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐熱的酶； （2）溶菌酶不會因為有機溶劑的處理而失活，當轉移到水溶液中時，溶菌酶的活力可全部恢復； （3）溶菌酶可被冷凍或乾燥處理，且活力穩定； （4）溶菌酶適宜pH5.3~6.4，可用於低酸性食品防腐； （5）溶菌酶生產成本較低； （6）溶菌酶的抗菌譜較廣，不僅局限於G+ 菌，對部分G 菌也有抑制效果； （7）溶菌酶作為防腐劑安全性高。溶菌酶是一種天然蛋白質，1992年FAO/WTO 的食品添加劑協會已經認定溶菌酶在食品中應用是安全的。 溶菌酶的應用 1 醫學上應用 可作為一種具有殺菌作用的天然抗感染物質。有抗菌、抗病毒、止血、消腫止痛及加快組織恢復功能等作用。臨床用於慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔潰瘍、水痘、帶狀皰疹和扁平疣等。也可與抗菌葯物合用治療各種細菌和病毒感染。口服和肌注均有效。口服，3～5片/次(腸溶片含10mg)，3次/日。口含，1片/次(口含片含20mg)，4～6次/日。外用：以1%～2%溶液滴注、塗擦或直接噴粉。肌注，50mg～100mg/次，1～2次/日。滴眼：用2%溶液。 副作用 偶有較輕的過敏反應。氯化溶菌酶醫療效果更廣，有濃痰分散、出血抑制、組織修復、消炎鎮痛、抗過濾性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制葯有消炎消痔、治感冒、皮膚病及眼、鼻、喉等用葯. 2食品保藏應用 可作為防腐劑,它的主要功用是水解細菌細胞壁，在細胞內，則對吞噬後的病原菌起破壞作用.該酶對革蘭氏陽性菌中的枯草桿菌、耐輻射微球菌有分解作用。對大腸桿菌、普通變形菌和副溶血性弧菌等革蘭氏陰性菌也有一定程度溶解作用，其最有效濃度為0.05%。與植酸、聚合磷酸鹽、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。參考資料： http://ke..com/view/39726.htm

❽ 在溶菌酶的粗提取實驗中，為什麼將蛋清緩沖液PH調到4.7後又調到8.0急急急急！

因為卵清蛋白的等電點是4.7，為了提純溶菌酶，要將卵清蛋白沉澱，所以要把PH調到4.7，至於8.0，這是溶菌酶的最適PH值。

提取溶菌酶的方法：
樹脂預處理：干樹脂清水浸泡，使其充分膨脹並除去細小顆粒和較大雜質； 1 mol/L 的HCl浸泡2 h，去離子水洗3次至至近中性；抽濾收集樹脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h，去離子水洗3次至近中性；抽濾收集樹脂,加0.15 mol/L、pH 值為6．5的磷酸緩沖液平衡過夜待用。
蛋清制備：將3個新鮮雞蛋洗凈乾燥，小端敲一個小洞，大端打一個小孔進氣，分離得雞蛋清，用1 mol/L HCl調節PH到7。過濾前稱量燒杯重48.7g，緩慢攪拌用滅菌的兩層紗布過濾除去臍帶塊和碎蛋殼等，蛋清與燒杯總重207.5g，蛋清凈重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液調pH 值至7.0，量蛋清體積為100 ml。在調節PH時蛋清中出現少量白色沉澱，可能為部分蛋白由於局部過酸而變性。
吸附：蛋清在不斷攪拌下加入抽濾好的724樹脂25g（相當蛋清四分之一體積的樹脂），冰水浴中磁力攪拌器緩慢攪拌（使樹脂全部懸浮在雞蛋清中，攪拌不能起泡）吸附2.5 h，4℃靜置1.5h。然後3000r/min離心15min分層，收集樹脂，回收蛋清（留樣A）。
去除雜蛋白：收集樹脂用去離子水振盪水洗直至洗液澄清（至無白沫為止），吸管輕吸去洗液，以去除雜蛋白。（每洗1次，離心1次，總共3次）冰浴中用等體積的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸緩沖液攪拌洗滌15min，抽濾，重復洗三次，注意防止樹脂流失。最後一次抽濾濾除樹脂水分至乾燥。
洗脫溶菌酶：樹脂中加入35ml（等體積）的10％（NH4）2SO4溶液攪拌洗脫30 min，抽濾,使溶菌酶從樹脂上洗脫下來，重復兩次，合並收集洗脫液（留樣），洗脫液過濾後，准確量取體積100ml。（留樣B）
鹽析:每83mL洗脫液加32g磨細的固體（NH4）2SO4，本實驗中總量為38.55g。緩慢加入（NH4）2SO4攪拌待完全溶解後保鮮膜封口，置於4℃冰箱鹽析過夜。
透析:待白色沉澱析出，3000r/min離心15 min，收集沉澱，用去離子水將沉澱洗下並全部溶解（4.5ml去離子水），裝於透析袋中，於去離子水中透析（冰浴），期間2次更換去離子水，直至用BaCl2檢測透析完全。透析裝置中加入磁子，於磁力攪拌器中攪拌加快透析速度。
去雜質蛋白：取出透析袋中的透析液，用0.1mol/L HCl調整pH4.6，產生少量白色沉澱（留樣D），可能為雜蛋白。3000r/min離心10min，收集上清液（留樣C 20ul）。
濃縮：用PEG-20000濃縮上清液至1.5ml（留樣E，20ul，加loading buffer,出現黃色（可能為濃縮時透析袋中滲入了PEG-20000）。[5][6]

❾ 最耐熱的蛋白質是什麼

科技名詞定義

中文名稱：

溶菌酶

英文名稱：

lysozyme

其他名稱：

胞壁酸酶(muramidase)

定義：

編號：EC 3.2.1.17。存在於卵清、唾液等生物分泌液中，催化細菌細胞壁肽聚糖N-乙醯氨基葡糖與N-乙醯胞壁酸之間的1，4-β-糖苷鍵水解的酶。

應用學科：

生物化學與分子生物學（一級學科）；酶（二級學科）

溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質酶（muramidase）或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

中文名稱：溶菌酶

中文同義詞：脆壁質酶；雞蛋白；胞壁質酶(N-乙醯胞壁質聚糖水解酶);溶菌酶(雞蛋清)

英文名稱：Lysozyme,簡稱LZM

英文同義詞：REDUCED LYSOZYME,WATER SOLUBLE;MUCOPEPTIDE-GLYCOHYDROLASE;MUCOPEPTIDE GLYCOLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE III;MUCOPEPTIDE N-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE VI: CHLORIDE;MURAMIDASE;MURAMIDASE GRADE III[1]

CAS號：12650-88-3

EINECS號： 235-747-3[2]

分子式：無

分子量：14000左右

EINECS號：235-747-3

相關類別：發酵劑；Enzymes;酶；生化試劑；生物化學品。

分子結構圖：

性質

儲存條件：2-8°C

form：powder

color：white

危險品標志B

安全說明23-24/25-22

WGK Germany3

RTECS號 OL5989850

F3-10

白色或微白色凍乾粉，溶於水，不溶於乙醚和丙酮，pI為11.0-11.35，最適pH值6.5。

穩定性：酸性介質中可穩定存在，鹼性介質中易失活；96℃， pH值為3條件下，15min後活力保持87%。

抑制劑：有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性劑(十二烷基硫酸鈉、醇類和碳鏈不少於12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm處的吸光系數為26.4。通過水解細菌細胞壁的肽聚糖來溶菌。

酶反應：Micrococcus luteus或Micrococcus lysodeikticus菌懸浮液═溶菌並澄清。

用途：用於生化研究，臨床上用於急慢性咽喉炎、扁平苔癬、扁平疣等疾病的治療。

編輯本段生產

以蛋清為原料，在pH6.5條件下用弱酸性陽離子交換樹脂732吸附後，再用硫酸銨洗脫，經透析後冷凍乾燥得產品。

編輯本段制備

溶菌酶是採用生物工程技術進行克隆、提取而製取,它是一種天然酶，安全綠色的添加劑，無抗葯性。

該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。

溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內，分子帶正電荷，可吸附於弱酸性陽離子交換樹脂上，洗脫後鹽析，可得溶菌酶沉澱，再進行精製可得成品。蛋清吸附↓724樹脂洗滌↓緩沖液洗脫↓硫酸銨溶液鹽析透析去鹼性蛋白↓NaOH凍干溶菌酶凍乾粉沉澱乾燥溶菌酶在5～10℃下，將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中，攪拌吸附6h，在0～5℃靜置過夜。傾出上層蛋清，樹脂離心甩干，用蒸餾水反復洗去黏附的卵蛋白，然後將樹脂裝入柱內，用0?15mol/L、pH=6?5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂，再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨，使最終含硫酸銨量為40%，有白色沉澱生成，冷處放置過夜。虹吸上層清液，沉澱吸濾抽干，再用1倍蒸餾水溶解沉澱呈稀糊狀，然後裝入透析袋，在約5℃的條件下，對蒸餾水透析24h左右，中間換水2～3次。離心去除沉澱，沉澱再用少量水洗一次，洗液與離心液合並。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌，使pH值上升到8?0～9?0，如有白色沉澱，即離心除去。然後用3mol/L鹽酸調pH=5?0，冷凍乾燥，即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調pH=3?5，在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉，在約5℃的溫度下靜置48h，離心，沉澱用0℃丙酮洗滌，乾燥，即得溶菌酶。

編輯本段優點

1．溶菌酶是很穩定的蛋白質，有較強的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐熱的酶；

2．溶菌酶不會因為有機溶劑的處理而失活，當轉移到水溶液中時，溶菌酶的活力可全部恢復；

3．溶菌酶可被冷凍或乾燥處理，且活力穩定；

4．溶菌酶適宜pH5.3~6.4，可用於低酸性食品防腐；

5．溶菌酶生產成本較低；

6．溶菌酶的抗菌譜較廣，不僅局限於G+ 菌，對部分G­ 菌也有抑制效果；

7．溶菌酶作為防腐劑安全性高。溶菌酶是一種天然蛋白質，1992年FAO/WTO 的食品添加劑協會已經認定溶菌酶在食品中應用是安全的。

編輯本段應用

醫學應用

可作為一種具有殺菌作用的天然抗感染物質。有抗菌、抗病毒、止血、消腫止痛及加快組織恢復功能等作用。臨床用於慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔潰瘍、水痘、帶狀皰疹和扁平疣等。也可與抗菌葯物合用治療各種細菌和病毒感染。口服和肌注均有效。口服，3～5片/次(腸溶片含10mg)，3次/日。口含，1片/次(口含片含20mg)，4～6次/日。外用：以1%～2%溶液滴注、塗擦或直接噴粉。肌注，50mg～100mg/次，1～2次/日。滴眼：用2%溶液。

副作用

偶有較輕的過敏反應。氯化溶菌酶醫療效果更廣，有濃痰分散、出血抑制、組織修復、消炎鎮痛、抗過濾性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制葯有消炎消痔、治感冒、皮膚病及眼、鼻、喉等用葯.

食品應用

可作為防腐劑，它的主要功用是水解細菌細胞壁，在細胞內，則對吞噬後的病原菌起破壞作用.該酶對革蘭氏陽性菌中的枯草桿菌、耐輻射微球菌有分解作用。對大腸桿菌、普通變形菌和副溶血性弧菌等革蘭氏陰性菌也有一定程度溶解作用，其最有效濃度為0.05%。與植酸、聚合磷酸鹽、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。

應用領域

1． 溶菌酶是一種無毒、無副作用的蛋白質，又具有一定的溶菌作用，因此可用作天然的食品防腐劑。現已廣泛應用於水產品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及飲料中的防腐；還可以添入乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制腸道中腐敗微生物的生存，同時直接或間接地促進腸道中雙歧桿菌的增殖。

2． 溶菌酶作為一種存在於人體正常體液及組織中的非特異性免疫因素，具有多種葯理作用，它具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的功效，目前醫用溶菌酶其適應症為出血、血尿、血痰和鼻炎等。

3． 溶菌酶具有破壞細菌細胞壁結構的功能，以此酶處理G+細菌得到原生質體，因此，溶菌酶是基因工程、細胞工程中細胞融合操作必不可少的工具酶。

編輯本段機理

溶菌酶能有效地水解細菌細胞壁的肽聚糖，其水解位點是N-乙醯胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙醯葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子間的β-1.4糖苷鍵。肽聚糖是細菌細胞壁的主要成份，它是由NAM、NAG和肽「尾」(一般是4個氨基酸)組成，NAM與NAG通過β-1.4糖苷鍵相連，肽「尾」則是通過D-乳醯羧基連在NAM的第3位碳原子上，肽尾之間通過肽「橋」(肽鍵或少數幾個氨基酸)連接，NAM、NAG、肽「尾」與肽「橋」共同組成了肽聚糖的多層網狀結構，作為細胞壁的骨架，上述結構中的任何化學鍵斷裂，皆能導致細菌細胞壁的損傷。對於革蘭氏陽性菌（G+），如藤黃微球菌、枯草桿菌或溶壁微球菌等，與革蘭氏陰性菌(G-)，如大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、肺炎桿菌等，其細胞壁中肽聚糖含量不同，G+細菌細胞壁幾乎全部由肽聚糖組成，而G-細菌只有內壁層為肽聚糖，因此，溶菌酶對於破壞G+細菌的細胞壁較G-細菌強。

編輯本段使用

雞蛋清溶菌酶作為溶菌酶類的典型代表，是一種穩定的蛋白質，其最適pH為4-6.5，最適溫度為35℃，酶的最適添加量必須按照具體生產情況而定。

編輯本段儲存

建議在陰涼乾燥的環境下避光保存，儲存溫度：零度以下。

貯藏過久或貯藏條件不利，會使酶活不同程度的降低；如溫度濕度過高，則需要在使用時適當的增加使用量。

編輯本段舉例

尿液中含量

尿溶菌酶原理

溶菌酶來自單核細胞、中性粒細胞，是一種能溶解某些細菌的酶類。可酵解革蘭陽性球菌壁上的乙醯氨基多糖成分，使細胞壁破裂。其分子量為14000萬～15000，可從腎小球基底膜濾出，90%以上可被腎小管重吸收，所以尿液中很少或無溶菌酶。用一種細菌懸液作為基質，加入待測標本後保溫一定時間，如標本中含溶菌酶，則細菌被溶解，細菌懸液濁度下降或變清，可用光電比濁法測其濁度變化，或用平皿法測定其溶菌圈的大小。

尿溶菌酶參考值

尿液中濃度為0～2mg/L。

臨床意義

①腎小管疾病：如炎症、中毒時，因腎小管損害，重吸收減少，尿溶菌酶升高；

②判斷預後：急性腎小管壞死時，尿溶菌酶升高，若逐漸升高並持續不下降，小管功能恢復較差。慢性腎炎、慢性腎衰竭時，尿溶菌酶也升高；

③急性單核細胞白血病時，血清溶菌酶含量增加，超過腎小管重吸收的能力，尿內溶菌酶可升高。[3]

❿ 溶菌酶的生產

以蛋清為原料，在pH6.5條件下用弱酸性陽離子交換樹脂732吸附後，再用硫酸銨洗脫，經透析後冷凍乾燥得產品。