❶ 使用高效液相色譜時為什麼要脫氣
HPLC所用流動相必須預先脫氣，否則容易在系統內逸出氣泡，影響泵的工作。氣泡還會影響柱的分離效率，影響檢測器的靈敏度、基線穩定性，甚至使無法檢測。（雜訊增大，基線不穩，突然跳動）。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相甚至固定相（如烷基胺）反應。溶解氣體還會引起溶劑pH的變化，對分離或分析結果帶來誤差。
常用的脫氣方法有：加熱煮沸、抽真空、超聲、吹氦等。
❷ 液相色譜儀檢測器中進入氣泡所分析的物質還會出峰嗎
會，如果氣泡很小，可能走過檢測器的時候會有類似於溶劑峰的正峰或者倒峰。
如果堵在檢測器位置，那可能波動會比較大。還會出現一些鬼峰。不過氣泡本身不會影響主物質的吸收。他就是在很漂亮的色譜圖上添加一些亂七八糟的東西罷了。
建議用過濾過的異丙醇不連色譜柱走一下，異丙醇粘性比較大，可以把氣泡什麼的帶下來。
❸ lc-10ad島津雙泵液相色譜儀為什麼每天都有氣泡
流動相里溶解有空氣 在高壓輸液系統中負壓會使氣體溢出 建議使用脫氣機或者用前超聲
❹ 液相色譜柱子里有了氣泡該怎麼去除其中的氣泡
如果懷疑柱子裡面或檢測器里有了氣泡，建議你分別用流動相沖洗。首先斷開色譜柱與檢測器的連接。用流動相沖洗色譜柱，然後用兩通連接泵和檢測器，再沖洗檢測器。色譜問題建議你去「生化色譜網」看看。非常不錯的專業網站。
❺ 液相色譜中出現氣泡會有什麼後果
流動相不過濾。
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可採用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
使用後沒有及時清洗泵
流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩沖液的流動相不應保留在泵內，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內，由於蒸發或泄漏，甚至只是由於溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充分清洗後，再換成適合於色譜柱保存和有利於泵維護的溶劑（對於反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
壓力和流量不穩了？
原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內超聲清洗。有時可能是砂濾棒內有氣泡，或被鹽的微細晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內超聲除氣泡，或將砂濾棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對組分復雜的樣品採用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）
❻ 液相色譜儀流動箱內有氣泡該怎麼辦
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在我們進行液相色譜分析時，有時會遇到這樣一個問題：系統的流路中存在氣泡。
由於氣泡的存在，會造成色譜圖上出現尖銳的雜訊峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定，使基線起伏。
造成上述現象的主要原因有三條：
一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈；三是在注入樣品時不注意混入了空氣。
為了避免這類問題的出現，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。
常用的脫氣方法有以下幾種：
1.吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅除溶解的氣體。此法使用於所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國內因氦氣價格較貴，本法使用較少；
2.加熱迴流法此法的脫氣效果較好；
3.抽真空脫氣法此時可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質和脫氣的雙重任務。由於抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用於單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣後再進行混合，以保證混合後的比例不變。
4.超聲波脫氣法它是目前實驗室使用最廣泛的脫氣方法，將配製好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便，基本能滿足日常分析的要求。
5.在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯到儲液系統中，並結合膜過濾器，實現了流動相在進入輸液泵前的連續真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優於上述幾種方法，並適用於多元溶劑體系。
其二，在液相色譜系統開始工作前，可以用注射器連接恆流泵的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅趕干凈。
其三，在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
液相色譜分析時的氣泡問題.doc
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/074857.shtml
高效液相色譜儀使用中常見故障及解決方法
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081028/1552389/
擦亮我們的「眼睛」之檢測器故障和解決方法
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090925/2127423/
HPLC使用注意事項及HPLC柱子使用經驗之談
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081103/1563160//index.shtml
高效液相色譜儀(Agilent 1100)操作注意事項
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051028/262889/
葯物分析液相色譜流動相應用小常識
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/098239.shtml
關於HPLC的常見問題及解答
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/001328.shtml
流動相的配置
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/059524.shtml
❼ 高相液相色譜儀流動相超聲了20分鍾，換上之後也在線脫氣了,為什麼進樣的時候還有氣泡求解
這樣的話應該不會是流動相的問題。
首先你說有氣泡，是哪裡有氣泡？肉眼可見的地方，是管路裡面有，還是什麼地方有？我的說一句，在線清洗泵頭的管路裡面有時候會有氣泡，這個沒有關系。另外排氣的時候如果流速太快有時候也會帶起來一些氣泡，你可以排氣一段時間，氣泡就會消失。它們不進柱子，不要大驚小怪。
如果排氣5min之後，運行儀器，管路裡面還有氣泡。那麼最可能的就是三個地方。
第一就是流動相裡面那個過濾頭的問題。我不知道你用的是島津的那種濾頭還是安捷倫的那種。安捷倫的是玻璃的，肉眼就可以看出來是不是干凈。島津的和很多國產的都是金屬的感覺。你可以摸一下，上面千萬不要有那種滑滑的感覺，那可能就是長微生物了。這個一定要洗干凈，流動相的瓶子里不要長時間放無機鹽溶液。可以先拔掉濾頭，試一下還有沒有氣泡。濾頭可以用2%的稀硝酸清洗一下，也可以超聲，但是時間不要太長。
第二就是單向閥。主動閥和被動閥都有可能會臟。拆下來用異丙醇超聲就好了。
第三就是混合池。如果你是高壓二元泵就不會出現這種情況，如果是低壓四元泵，混合器壞掉了，而且跑得是AB泵就很容易出現氣泡。你可以用純甲醇，或者混合好的甲醇水跑一會兒看看有沒有氣泡。故障排查就是要一點一點地排除可能性才能找到原因。
❽ 液相色譜儀是如何進行保養和維護的
轉載：《分析測試網路網》
液相色譜儀的維護與保養
液相色譜儀的維護與保養
液相色譜儀是屬於易學難用的儀器，特別講究「正確使用」和經驗。
液相工作者接觸最多的是流動相，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭。
液相色譜儀最常見的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點分別展開討論。(註：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例)
「堵」的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。
「堵」的原因之一：配製流動相時細菌污染。
首先我們要認識到，一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質，也能在液相流路系統最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。
新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配製流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：
(1)最理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。
(2) 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。
這里特別指出一個細節：在絕大多數書本上，凡談到配製流動相都會談到最後有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。原因有以下三點：
(1)流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由於不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對於配比復雜的流動相影響更大。
(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高於色譜柱的成本。
(3)流動相過濾對於工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用後清洗，晾乾的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
(4)在實際工作未發現流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
「堵」的原因之二：使用流動相時的細菌污染。
指的是：流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。
舉最簡單的例子：50%的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
從單純實驗效果來說，後一種有明顯的優點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例准確，能得到保留時間重復性極好的實驗效果。
但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優質肥料，細菌長得更迅速)，一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗後把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全殺菌了)，這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配製流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
"堵」的原因之三：不適當操作。
常見問題的有以下幾種：
(1)在更換零件時選擇的型號有誤，介面不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液凈化得不幹凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時，有些人可能由於手勁小的原因，轉動的不到位，於是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。
(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，並把廢液管的出口端放在液面下。如果位於在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結晶成塊並造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發生過。
「堵」的原因講了不少，現介紹查堵的方法。
在發生「堵」的現象後，就需要找出原因，主要是什麼位置發生了「堵」。注意，絕大多數情況下，整個系統只會有一個地方發生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數值，如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大，可發展變化判斷。至於柱的堵塞，可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。
下面再談一下「漏」的問題。「漏」則分兩種：漏液和漏氣。
一. 漏液
液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發生了漏液，那就是故障所在。
漏液的原因分兩種：
(1) 接觸硬體不當。
在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭介面不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產的液相柱接頭也有很大區別。當然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰就能保證不漏液。
即使是介面本身是匹配的，但是如果操作不當也會漏液，一種不當就是力度把握不好，擰得太緊或太松;另一種不當就是致命的錯誤：滑絲，這是往往是動手能力不太強，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的後果不僅是漏液那麼簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗，那就是擰螺絲。
(2) 使用儀器不當
如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。
析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10%的比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時，實驗結束後沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相乾燥形成晶體造成。
不過，輸送泵漏液並不是非得馬上修不可，沖洗干凈並在以後的使用中多加小心一般都可以正常使用。
檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是並不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。
二. 漏氣
漏液是從內部向外漏，而漏氣則是外部的氣體進入液相色譜儀的流路內部形成了氣泡。下面按流路的方向逐個部件分析產生氣泡的原因和相應解決方法。
(1) 過濾頭
抽液時，在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生，這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力並提高工作效率)，如果已經脫了氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現象。處理方法比較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈後裝回去即可。
(2) 透明流路管
指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個部分往往不是有點氣泡，而經常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發現流動相瓶里的液體一點也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因(我們做液相一定要有「微滲」的概念)。如果長時間不用，這一段管路的液體會徹底幹掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細看是分辨不出的。
這種情況對於輸送泵很危險，因為泵從設計來說是輸送液體而不是氣體，內部的液體對於活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿上還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉的影響。
對於這種情況，要突出「預防為主」如：，液相色譜使用人員要相對固定和穩定，工作中合理搭配資源，每台機一周擊至少作一次實驗，如長期不用起碼每周要沖流動相2 小時。養成良好的工作習慣很重要。
如果不慎出現了這種問題怎麼辦?我的建議是用外力使管路中充滿液體。具體如下：
1、 找到流路管進入輸送泵的接頭。
2、 擰下來。
3、 用一干凈的洗耳球的尖端對准管路的平整切口。
4、 吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5 厘米左右時停止該動作。
5、快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄，這是正常現象)。
6、 開機，打開排液閥門，啟動輸送泵。
7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時，再關閉排液閥，儀器正常工作。
(3) 輸送泵和柱子
這些部分進了氣泡一般不怕，沖掉就行。
(4) 檢測器
應該說，整個流路中只要有一個氣泡都會在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。
如果檢測器里有殘留氣泡，會有特徵明顯的表現形式，就是在走基線時會時不時間隔出現直上直下信號很大的信號峰。這時先看普通流量能否沖走，如果沖不走，那唯一的辦法就是拆柱，把檢測器直接連到輸送泵的出口，加大幾倍流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。
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❾ 島津LC-10AT型高效液相色譜儀泵內有氣泡,如何排盡
首先流動相要脫氣，LC-10AT沒有在線脫氣裝置，要自己去脫氣，一般用超聲波脫氣。 脫氣以後的流動相裝入系統，打開LC-10AT的排氣旋鈕，這個在儀器外面的，很容易找到。然後升高壓力，把流速升到0.3~0.5mL/min。讓流動相流動三五分鍾，再把壓力降下來。等壓力降下來以後，關閉排氣旋鈕。
氣泡就排盡了。
❿ 如何排除液相色譜儀高壓泵中的氣泡
排氣。打開purge閥，反復排氣。
不連色譜柱沖洗。這個最好用異丙醇，因為粘性大，有可能把氣泡帶出來。
超聲。一般氣泡會堵在單向閥的位置，卸下來用純甲醇超聲。