❶ 無菌檢查薄膜過濾器需要用0.22um濾膜嗎
1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及0.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。
❷ 薄膜過濾法，濾膜採用何種方式滅菌最好
用重物壓著，我都是在不銹鋼濾盤里安裝好濾膜才拿去一起滅菌的
❸ 目前市場上飲料瓶殺菌用什麼方法
食品殺菌技術是食品工業中的核心技術之一，從某種意義上講，食品工業的發展史就是一部食品殺菌技術的發展史。食品的殺菌技術，就是運用各種手段，殺滅食品自身污染的、從食品包裝容器帶入的、加工與調配過程中由操作人員和設備引入的以及生產環境中存在的各種有害微生物，從而保持食品品質並達到一定保藏期的一種技術。殺菌費用在一些食品的加工成本中占相當大的比例，直接影響產品的價格和市場競爭力，殺菌工藝的好壞直接影響產品的質量，因此應大力開展殺菌技術的研究。殺菌技術按殺(除)菌方式一般可分為加熱殺菌技術、化學葯劑殺菌技術、輻射殺菌技術(γ-射線、微波、紅外線等)、過濾除菌法以及加熱與其他手段相結合的殺菌技術等。各種殺菌技術發展的歷史長短不一，有著各自的特點和適用范圍。現將現代食品工程中應用的各種新殺(除)菌方法的特點、研究現狀及其應用領域作以介紹。
1 研究現狀
1.1 熱力殺菌技術
利用加熱殺滅食品中有害微生物的方法既是古老的方法，也是近現代極其重要的一種殺菌技術。1804年，法國人阿佩爾(Appert)發明了將食品裝瓶放於沸水中煮一段時間，能較長時間保藏食品的方法，19世紀50年代，法國人巴斯德(Pasteur)闡明了食品的微生物腐敗機理，為殺菌技術的發展奠定了理論基礎。
食品熱力殺菌可分為低溫殺菌法(巴氏殺菌)、高溫短時殺菌法和超高溫瞬時殺菌法。前兩種方法，由於殺菌效果穩定，操作簡單，設備投資小，已有悠久的應用歷史，現今還廣泛用在各類罐藏食品、飲料、酒類、葯品、乳品的生產中。後一種方法，由於其獨特的優點，已發展為一種高新食品殺菌技術。
1.2 超高溫瞬時殺菌技術(UHT)
超高溫殺菌於1949年隨著斯托克(Stork)裝置的出現而問世，其後國際上出現了多種類型的超高溫殺菌裝置。超高溫處理可分為間接加熱和直接加熱兩大類型。它是使料液迅速升溫至130℃以上，然後保持幾秒鍾，從而實現對料液瞬間的殺菌。
超高溫瞬時殺菌技術的殺菌效果特別好，幾乎可達到或接近滅菌的要求，而且殺菌時間短，物料中營養物質破壞少，營養成分保存率達92%以上，大大優越於上述兩種熱力殺菌法。配合食品無菌包裝技術的超高溫式殺菌裝置在國內外發展很快，目前這種殺菌技術已廣泛用於殺菌乳、果汁及各種飲料、豆乳、酒等產品的生產中。
1.3 電阻加熱殺菌技術
電阻加熱殺菌也叫歐姆殺菌，是一種新型熱殺菌方法，它借通入的電流使食品內部產生熱量而達到殺菌的目的，是酸性和低酸性食品和帶顆粒(粒徑小於25mm)食品進行連續殺菌的一種新技術。
電阻加熱殺菌使用交流電的頻率為50~60Hz，它利用電極將電流直接導入食品，由食品自身的介電性質產生熱量，以達到殺菌的目的。電阻加熱的適用性由食品物料的電導率來決定，大多數能用泵輸送的、溶解有鹽類離子且含水量在30%以上的食品都可用電阻加熱來殺菌，且效果很好，而一些脂肪、糖、油、未添加鹽的處理水等非離子化的食品則不適用該技術。英國APV食品加工中心的試驗表明，電阻加熱已成功地用於各種包含大顆粒的食品和片狀食品的殺菌，如馬鈴薯、胡蘿卜、蘑菇、牛肉、雞肉、片狀蘋果、菠蘿、桃等。
1.4 臭氧殺菌技術
臭氧在水中極不穩定，時刻發生還原反應，產生具有強烈氧化作用的單原子氧，在其產生瞬時，與細菌細胞壁中的脂蛋白或細胞膜中的磷脂質、蛋白質發生化學反應，從而使細菌的細胞壁和細胞膜受到破壞，細胞膜的通透性增加，細胞內物質外流，使細菌失去活性。同時臭氧能迅速擴散進入細胞內，氧化細胞內的酶或RNA、DNA，從而致死菌原體。
臭氧殺菌具有高效、快速、安全、便宜等優點，自1785年發現以來，廣泛應用於食品加工、運輸與貯存及自來水、純凈水生產等領域。
1.5 輻照殺菌技術
自從原子能和平利用以來，經過40多年的研究開發，人們成功地利用原子輻射技術進行食品殺菌保鮮。輻照就是利用X射線、γ射線或加速電子射線(最為常見的是Co60和Cs137的γ射線)對食品的穿透力以達到殺死食品中微生物和蟲害的一種冷滅菌消毒方法。受輻照的食品或生物體會形成離子、激發態分子或分子碎片，進而這些產物間又相互作用，生成與原始物質不同的化合物，在化學效應的基礎上，受輻照物料或生物體還會發生一系列生物學效應，從而導致害蟲、蟲卵、微生物體內的蛋白質、核酸及促進生化反應的酶受到破壞、失去活力，進而終止農產品、食品被侵蝕和生長老化的過程，維持品質穩定。
1980年聯合國糧農組織(FAO)、國際原子能機構(IAEA)和世界衛生組織(WHO)聯合專家委員會，提出了「用10KGY以下劑量輻照的任何食品，都沒有毒理學方面問題，沒有必要進行毒理學試驗」的建議，從而在世界范圍內推進了輻照在食品生產中的商業化應用。
1.6 微波殺菌技術
微波指波長在0.001~1m(頻率300~300000MHz)的電磁波。它能以光速向前直進，遇到物體阻擋，能引起反射、穿透、吸收等現象，用於殺菌的微波頻率為2450MHz。研究結果普遍認為微波對微生物的致死效應有2個方面的因素，即熱效應和非熱效應。熱效應是指物料吸收微波能，使溫度升高從而達到滅菌的效果。而非熱效應是指生物體內的極性分子在微波場內產生強烈的旋轉效應，這種強烈的旋轉使微生物的營養細胞失去活性或破壞微生物細胞內的酶系統，造成微生物的死亡。微波殺菌具有穿透力強、節約能源、加熱效率高、適用范圍廣等特點，而且微波殺菌便於控制，加熱均勻，食品的營養成分及色、香、味在殺菌後仍接近食物的天然品質。微波殺菌目前主要用於肉、魚、豆製品、牛乳、水果及啤酒等的殺菌。
1.7 遠紅外線殺菌技術
對紅外線的利用始於20世紀，1935年美國福特汽車公司的格羅維尼(Groveny)首先取得將紅外線用於加熱和乾燥的專利。食品中的很多成分及微生物在3~10μm的遠紅外區有強烈的吸收。遠紅外加熱殺菌不需要傳媒，熱直接由物體表面滲透到內部，因此不僅可用於一般的粉狀和塊狀食品的殺菌，而且還可用於堅果類食品如咖啡豆、花生和穀物的殺菌與滅霉以及袋裝食品的直接殺菌。
日本三茲公司首創的紅外線無菌包裝機，全機由ML-501型封裝機和MS-801型通道式紅外線熱收縮機組成。該機可根據被包裝物形狀和大小的不同，選用相應厚度和顏色的熱收縮薄膜，同時在熱輻射中滅菌，其滅菌程序簡便，包裝質量大大超過手工包裝，而且包裝
效率提高6~8倍。
1.8 紫外線殺菌技術
紫外線按其波長不同可分為3段:長波段(3200~4000 )，中波段(2750~3200 )，短波段(1800~2750 )。處於2400~2800 區段的紫外線殺菌力較強，而最強的波長為2500~2650 ，多以2537 作為紫外線殺菌的波長。當微生物被紫外線照射時，其細胞的部分氨基酸和核酸吸收紫外線，產生光化學作用，引起細胞內成分，特別是核酸、原漿蛋白、酯的化學變化，使細胞質變性，從而導致微生物的死亡。紫外線進行直線傳播，其強度與距離平方成比例地減弱，並可被不同的表面反射，穿透力弱，廣泛用於空氣、水及食品表面、食品包裝材料、食品加工車間、設備、器具、工作台的滅菌處理。
1.9 磁力殺菌技術
磁力殺菌是把需消毒殺菌的食品放於磁場中，在一定磁場強度作用下，使食品在常溫下起到殺菌作用。由於這種殺菌方式不需加熱，具有廣譜殺菌作用，經處理後的食品，其風味和品質不受影響，主要適用於各種飲料、流質食品、調味品及其他各種包裝的固體食品。
1.10 高壓電場脈沖殺菌技術
高壓電場脈沖殺菌是將食品置於兩個電極間產生的瞬間高壓電場中，由於高壓電脈沖(HEEP)能破壞細菌的細胞膜，改變其通透性，從而殺死細胞。
高壓脈沖電場的獲得有2種方法。一種是利用LC振盪電路原理，先用高壓電源對一組電容器進行充電，將電容器與一個電感線圈及處理室的電極相連，電容器放電時產生的高頻指數脈沖衰減波即加在兩個電極上形成高壓脈沖電場。由於LC電路放電極快，在幾十至幾百個微秒內即可以將電場能量釋放完畢，利用自動控制裝置，對LC振盪器電路進行連續的充電與放電，可以在幾十毫秒內完成殺菌過程。另一種是利用特定的高頻高壓變壓器來得到持續的高壓脈沖電場。殺菌用的高壓脈沖電場強度一般為15~100kV/cm，脈沖頻率為1~100kHz，放電頻率為1~20kHz。
高壓電場脈沖殺菌一般在常溫下進行，處理時間為幾十毫秒，這種方法有2個特點:一是由於殺菌時間短，處理過程中的能量消耗遠小於熱處理法。二是由於在常溫、常壓下進行，處理後的食品與新鮮食品相比在物理性質、化學性質、營養成分上改變很小，風味、滋味無感覺出來的差異。而且殺菌效果明顯(N/No<10-9)，可達到商業無菌的要求，特別適用於熱敏性食品，具有廣闊的應用前景。
1.11 超聲波殺菌技術
超聲波是頻率大於10kHz的聲波。超聲波同普通聲波一樣屬於縱波。超聲波與傳聲媒質相互作用蘊藏著巨大的能量，當遇到物料時就對其產生快速交替的壓縮和膨脹作用，這種能量在極短的時間內足以起到殺滅和破壞微生物的作用，而且還能夠對食品產生諸如均質、催陳、裂解大分子物質等多種作用，具有其他物理滅菌方法難以取得的多重效果，從而能夠更好地提高食品品質，保證食品安全。朱紹華採用超聲波發生儀作為滅菌設備，以醬油為滅菌對象，取得了良好的效果。
1.12 脈沖強光殺菌技術
脈沖強光殺菌技術是採用強烈白光閃照的方法進行滅菌，它由一個動力單元和一個惰性氣體燈單元組成。動力單元是一個能提供高電壓高電流脈沖的部件，它為惰性氣體燈提供能量，惰性氣體燈能發出由紫外線至近紅外區域的光線，其光譜與太陽光十分相近，但強度卻強數千倍至數萬倍，光脈沖寬度小於800μs。該技術由於只處理食品的表面，從而對食品的風味和營養成分影響很小，可用於延長以透明材料包裝的食品及新鮮食品的貨架期。周萬龍等研究表明，脈沖強光對枯草芽孢桿菌、酵母菌都有較強的致死效果，30餘次閃照後，可使這些菌由105個減少到0個；脈沖強光起殺菌作用的波段可能為紫外線，但其他波段可能有協同作用。
1.13 超高壓殺菌技術
近年來，由日本率先研製出一種新型的食品加工保藏技術，這就是超高壓殺菌技術。所謂高靜壓技術(HighHydrostaticPressure簡稱HHP)就是將食品密封於彈性容器或置於無菌壓力系統中(常以水或其他流體介質作為傳遞壓力的媒介物)，在高靜壓(一般100MPa以上)下處理一段時間，以達到加工保藏的目的。在高壓下，會使蛋白質和酶發生變性，微生物細胞核膜被壓成許多小碎片和原生質等一起變成糊狀，這種不可逆的變化即可造成微生物死亡。微生物的死亡遵循一級反應動力學。對於大多數非芽孢微生物，在室溫、450MPa壓力下的殺菌效果良好；芽孢菌孢子耐壓，殺菌時需要更高的壓力，而且往往要結合加熱等其他處理才更有效。溫度、介質等對食品超高壓殺菌的模式和效果影響很大。間歇性重復高壓處理是殺死耐壓芽孢的良好方法。
日本最新開發出的超高壓殺菌機，操作壓力達304~507MPa。超高壓殺菌的最大優越性在於它對食品中的風味物質、維生素C、色素等沒有影響，營養成分損失很少，特別適用於果汁、果醬類食品的殺菌。
1.14 膜過濾除菌技術
隨著材料科學的發展，各種可用於物料分離的膜相繼出現，膜分離技術已在食品、生物制葯等工業生產中得到廣泛應用，例如生化物質的提取、純水的制備、果汁的濃縮等。膜分離過程根據推動力的不同，大體上可分為兩種。一類是以壓力為推動力的膜過程，如超濾；另一類是以電為推動力的膜過程，稱為離子交換，如電滲析。以壓力為推動力的膜過程，根據膜所用的孔徑和截留能力可以分為微孔過濾、超濾和反滲透等。
通常膜的孔徑為0.0001~10μm，而物料中微生物粒子大小一般在0.5~2μm，若選用孔徑小於微生物的膜，使料液通過膜過濾器進行過濾，則菌體粒子被截留，稱之為過濾除菌。
膜過濾除菌技術具有耗能少、在常溫下操作、適於熱敏性物料、工藝適應性強等優點，其應用前景廣闊，現已廣泛用於食品、生化、制葯、用水及空氣、乳品、果汁等的過濾除菌。
食品工程中的殺菌技術還很多，如:二氧化氯殺菌技術、氯氣殺菌技術、電子滅菌技術、加熱與加壓並用殺菌技術、加熱與化學葯劑並用殺菌技術、加熱與輻射並用殺菌技術、靜電殺菌技術等。這些技術正在得以研究和應用。
2 發展趨勢與對策
當代食品殺菌技術多種多樣，有各自的特點和應用范圍，人們也在不斷探索新的殺菌方法。現代食品殺菌工藝正在逐步擺脫傳統的加熱殺菌方式，或採用低溫冷殺菌，或採用各種除菌方法，或運用現代的各種包裝技術與殺菌工藝密切配合，或運用現代的加工技術如冷凍乾燥、真空濃縮、冷藏、冷凍、真空浸漬等，以求最大限度地減少食品中各種營養成分的損失，盡可能保持食品的原有風味，盡可能提高殺菌技術的經濟性、方便性，完善食品的包裝與貯藏條件，延長食品的貨架期，以滿足廣大消費者日益增長的物質生活的需要。面臨世界性的食品資源緊缺、能源枯竭、環境污染、人口爆炸等諸多問題，迫切要求經濟的、便捷的、實用的、多功能的高新食品殺菌技術得以大力研究，快速發展，以適應食品工業的現代化。
❹ 純化水微生物限度檢查用薄膜過濾法怎麼做
准備工作：
1.
用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放入濾杯中，包好濾杯，連同量筒、培養回基、平皿、取膜器、三角燒瓶等答一起121℃滅菌30min。
2.
滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。
3.
過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。
4.
菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）
❺ 生物製品的無菌檢查法的實驗原理，准備工作及操作步驟
1. 目的：建立無菌檢查的標准操作規程，確保檢驗結果的准確性。 2. 范圍：適用於本廠質監科化驗室對本廠生產的注射劑進行無菌檢查。3. 責任：化驗員有責任按本操作規程操作，並對檢驗結果負責。4. 定義：無菌檢查法系指檢查葯品是否無菌的一種方法。5.內容：5. 1無菌操作設備：無菌操作室或超凈工作台，無菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精燈等。5.1.1無菌室分無菌操作室和緩沖間。在緩沖間內應有洗手盆、干手器、無菌衣放置架及掛鉤、拖鞋等。無菌操作室應具有空氣除菌過濾的層流裝置，局部潔凈度100級超凈工作台。緩沖間及操作室內均設置能達到空氣消毒的紫外光燈和照明燈，操作室或工作台應保持空氣正壓。5.1.2無菌室應每周和每次操作前用0.1％新潔爾滅或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，開動無菌空氣過濾器及紫外光燈殺菌1小時。在每次操作完畢，同樣用2％甲酚或0.1％新潔爾滅溶液擦拭工作檯面，用紫外光燈殺菌半小 時。5.1.3無菌室的無菌程度檢查：無菌室在消毒處理後，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數。取直徑90mm雙碟，在接種室內點燃酒精燈，在酒精燈旁，以無菌操作，將雙碟半開注入溶化的營養瓊脂培養基約20ml，製成平板：在35-37℃預培養48小時，證明無菌後將3個平板以無菌方式帶入無菌操作間的潔凈區域左、中、右各放1個；打開碟蓋扣置，平板在空氣中暴露30分鍾後將蓋蓋好，置35-37℃培養48小時，取出檢查，3個平板上生長的菌落數相加總數不得超過10個。 無菌操作檯面或超凈工作台應定期請有關部門檢測其潔凈度，應達到100級（一般用塵埃粒子計數儀），檢測塵埃粒徑≤5μm的粒數不得超過3.5個／升；空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s；細菌菌落數平均<1個，可根據無菌狀況定期置換過濾器。5.1.4無菌室內應准備好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精燈、火柴、鑷子、75％酒精棉及拖鞋等。5.2儀器、用具：5.2.1真空泵、恆溫培養箱、生物顯微鏡、托盤天平（精度0.1g）、抽濾瓶（500ml）、 三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求規格）、試管、雙碟（9cm）、注射針、鑷子、剪刀、白金耳、橡皮管、紗布、棉花（原棉）、不銹鋼吸管筒、接種環、微孔濾膜（直徑約5cm），孔徑應在0.45±0.02μm )載玻片、灑精燈、取樣勺、吸耳球、噴霧瓶。5.2.2用具的包紮：5.2.2.1移液管在移液管上端管內,鬆鬆地塞進少許原棉,然後放入不銹鋼滅菌筒內。5.2.2.2試管在管口塞上紗布棉塞。5.2.2.3無菌衣、褲、帽、口罩將洗凈的衣褲、帽子、口罩配套後裝入布袋，扎緊袋口，再用牛皮紙包好。5.2.2.4注射器洗滌干凈的注射器及注射針頭裝配好後，放入墊有紗布的帶蓋容器內（飯 第3頁/共7頁盒）一層層放好，上面蓋上紗布，然後蓋上容器的蓋子，用牛皮紙包好。5.2.2.5濾器 將檢驗合格後微孔濾膜先有水中浸泡濕潤，取出後固定在細菌過濾器的濾板上，濾板下、濾膜上均用耐高溫墊圈墊好，上好濾器。在滅菌前濾器的螺勿擰太緊，濾器上口用8層紗布及牛皮紙包紮，裝妥後放入容器內，再將盛濾器的容器蓋好蓋子，用牛皮紙包紮。5.2.3用具的滅菌：將包紮好的用具，在121±0.5℃蒸汽滅菌櫃中滅菌30分鍾，物品取出時切勿立即置冷處，以免急速冷卻滅菌物品內蒸汽冷凝造成負壓，易致染菌，應置溫箱或或加溫烘乾。5.3培養基、試劑：5.3.1一般採用商品乾燥培養基，臨用時按照使用說明書進行配製，需注意培養基的pH值應符合規定，否則必須校正後，滅菌使用。使用前，按要求分裝滅菌好的細菌培養基須經30-35℃培養48小時，真菌培養基須經20-25℃培養72小時，證明無菌生長後方可使用。 制備的需氣菌、厭氣菌培養基應半個月內用完，在供試品接種前，培養基指示劑氧化層的顏色不得超過培養基深度約1/5，否則須經水浴煮沸加熱，只限加熱一次。5.3.2革蘭氏碘液：先用3-5ml蒸餾水溶解2.0g碘化鉀，再加入1.0g碘片，攪拌溶解後，加蒸餾水稀釋至300ml，搖勻。置密閉棕色瓶中備用。5.3.3結晶紫染色液：將結紫1.0g溶解於20ml95%乙醇中後，與80ml1%草酸銨溶液相混合，靜置48小時使用。此液穩定，置密閉的棕色瓶中可儲存數月。5.3.4沙黃染色液：將0.2g沙黃溶解於10ml95%乙醇中，待完全溶解後再加蒸餾水至100ml。5.3.5生理鹽水：稱取9g氯化鈉，加水1000ml溶解，分裝後於121±0.5℃濕熱滅菌30分鍾。供作稀釋劑用。 第4頁/共7頁5.3.6 75%乙醇量取無水乙醇75ml,加水稀釋至100ml，搖勻，即得。5.3.7 0.1%新潔爾滅：量取5%新潔爾滅20ml，加水稀釋至約1000ml，搖勻，即得。5.4培養基靈敏度檢查：5.4.1新購的乾燥培養基或採用不同牌號原材料的新鮮培養基，其質量均應符合靈敏度檢查要求。 (1)取藤黃微球菌[Micrococcus luteus CMCC（B） 28001］的營養瓊脂斜面和白色念珠菌[Candida albicans CMCC（F）98001］的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物，分別用0.9%無菌氯化鈉溶液製成均勻的菌懸液；取生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC（B）64941]不含瓊脂的需氣、厭氣培養基新鮮培養物，用滅菌毛細管將其吸至滅菌離心管內，離心，棄去上清液，沉澱菌體用0.9%無菌氯化鈉溶液製成均勻菌懸液。然後以10倍系列稀釋後，製成1ml中含10-100個菌並計數。 (2)取藤黃微球菌、生孢梭菌的需氣、厭氣培養基新鮮培養物，白色念珠菌的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物，取接種至黴菌培養基內，20-25℃用0.9%無菌氯化鈉溶液作10倍稀釋，製成1ml中含10-100個菌並計數。 將藤黃微球菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml，分別接種至每管裝量為9ml的需氣、厭氣菌培養基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml，分別接種至每管裝量為12ml的需氣、厭氣菌培養基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml，接種至每管裝量為9ml的真菌培養基3管，以未接種的培養基作對照，按規定的溫度培養5天並逐日記錄結果。結果判定：以每株菌接種後的培養基不得少於2管呈現生長，即該培養基的靈敏度檢查符合要求。5.4.2配製的培養基應在涼暗處保存，一般不得超過2周，臨用前細菌和黴菌培養基分別經30-35℃和20-25℃培養不少於48小時和72小時，證明無菌生長後方可使用。5.4.3需氣菌、厭氣菌培養基在試管中裝量高度不得少於7Cm，其指示劑氧化層不得超過培養基深度的1／5，否則須經水浴煮沸10分鍾，但只限加熱一次。 第5頁/共7頁無菌試驗培養時間結束時，指示劑氧化層應不超過培養基深度的1／2。5.5對照用菌液的制備：5.5.1試驗用菌種、菌種的復甦、菌種的接種與保存等均應按照「抗生素微生物檢定法」標准操作規程項下操作。5.5.2金黃色葡萄球菌菌液用接種環取金黃色葡萄球菌[Staphy-lococcus aureus CMCC（B）26003]的營養瓊脂斜面新鮮培養物少許，接種至營養肉湯培養基內，在30-35℃培養16-18小時後，用滅菌生理鹽水稀釋成1:1065.5.3生孢梭菌菌液用接種環取生孢梭菌[CMCC（B）64941]的需氣菌、厭氣菌培養基新鮮培養物1白金耳，接種至相同培養基內，在30-35℃培養18-24小時後，用滅菌生理鹽水稀釋成1:106。5.5.4白色念珠菌菌液用接種環取白色念珠菌[CMCC（F）98001]的真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1白金耳，接種至真菌培養基內，在20-25℃培養24小時後，用滅菌生理鹽水稀釋成1:105。5.5.5上述制備的菌液，一般當日使用。5.6進入無菌室的操作要點：5.6.1根據試驗程序,將用具物品搬入緩沖間,打開紫外光燈和空氣過濾裝置並使其工作1小時以上。5.6.2操作人員用肥皂水刷洗雙手,關閉緩沖間紫外光燈,進入緩沖間內,關閉第一層門,用2%來蘇爾或0.1%新潔爾滅溶液洗雙手,用消毒毛巾擦乾,換上無菌衣、帽、口罩及消毒鞋。5.6.3關閉無菌室內紫外光燈，進入第二層門並將用具搬至無菌室內，關閉無菌室門。5.6.4凡進入無菌室後不應再外出取物品，因此，在每次試驗中所用物品必須計劃好，並准備好備用物品。從進入第一層門直至無菌室內，隨操作人員的進入應噴霧2%來蘇爾或0.1 %新潔爾滅溶液。5.7檢查法：5.7.1無菌檢查法包括：直接接種法和薄膜過濾法。前者適用於非抗菌作用的供試品；後者適用於有抗菌作用的或大容量的供試品。5.7.2操作時，應先用0.1%新潔爾滅浸泡或擦拭容器表面後，以無菌的方法取 第6頁/共7頁內容物。5.7.3凡無菌檢查中，均應取相應溶劑和稀釋劑同法操作，作陰性對照。5.7.4供試品制備： 用滅菌鑷取出注射器，在火焰旁將針芯插入針管並安上針頭，蓋為橡皮塞時，用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取葯液。按規定須稀釋或滅活的供試品，可直接或將瓶內供試液抽出至滅菌玻璃容器內進行滅活處理並稀釋至規定的體積和濃度；抽取瓶中內容液體時，應將供試品倒置並使針頭在液面下。5.7.5直接接種法：按規定量取供試品，以無菌操作將該供試品分別接種於需氣菌、厭氣菌培養基6管，其中1管接種金黃色葡萄球菌液1ml，作陽性對照，另接種於真菌培養基5管。輕輕搖動，使供試品與培養基混合。需氣菌、厭氣菌培養基管置30-35℃、真菌培養基管置20-25℃培養7日。在培養期間應逐日觀察並記錄是否有菌生長。陽性對照管在24小時內應有菌生長，如在加入供試品後，培養基出現渾濁，培養7天後，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中或斜面培養基上繼續培養，細菌培養2日，真菌培養3日，觀察是否再出現渾濁或斜面有無菌生長，或用接種環取培養液塗片，染色，用顯微鏡觀察是否有菌。5.7.6薄膜過濾法： 將微孔濾膜過濾裝置、抽濾瓶、排氣管與真空泵相連，真空泵可置無菌室外。取規定量供試品，按規定的方法處理後，加入0.9%無菌氯化鈉溶液100ml中，混合後，通過裝有孔徑不大於0.45μm 的薄膜過濾器，減壓抽干後，用0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗濾膜3次，每次至少100ml，取出濾膜分成3等份，分別加入上述二種培養基中，按規定溫度和時間培養。陽性對照管應根據供試品特性加入相應對照菌液1ml（抗細菌葯物，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗厭氧菌葯物，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌葯物，以白色念珠菌為對照菌）。陽性對照管細菌應在培養24-48小時，真菌應在培養24-72小時有菌生長。5.8結果判斷： 第7頁/共7頁當陽性對照管顯渾濁並確有菌生長，陰性對照管呈陰性時，可根據觀察所得的結果判定：如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管均為澄清或雖渾濁但經證明並非有菌生長，均應判為供試品合格；如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管中任何1管顯渾濁並確證有菌生長，應重新取2倍量供試品，分別依法復試，除陽性對照管外，其他各管均不得有菌生長，否則應判為供試品不合格。6 培訓6.1 培訓對象：化驗員。6.2 培訓時間：二小時。7 記錄 記錄名稱 保存部門 保存時間 無菌檢驗記錄 質監科 葯品有效期後一年 QF-01-007-00無 菌 檢 驗 記 錄品 名： 批 號： 規 格： 檢驗日期： 年 月 日培養基名稱需氣、厭氣菌培養基真菌培養基培養培養溫度30—35℃20—25℃培養時間管 號1234512345培養天數及結果1234567結 論備 注 復核人： 檢驗人：
❻ 耐高溫滅菌的漏斗
使用前將過濾器和濾膜都要在高壓滅菌鍋121度滅菌30分鍾,然後要在無菌超凈工作台上取出後安裝到位,再進行過濾,過濾方式是抽濾沒問題,如果你還不清楚,可以來電021-56902220咨詢,還有孔徑問題,一般要達到完全除菌要選0.22微米的濾膜
❼ 微生物薄膜過濾器
薄膜過濾器
放式兩用無菌檢查薄膜濾器。該產品具有兩種培養方法通用性的特點。設版計合理，濾器過濾部分權採用玻璃材質，化學性能穩定，密封度強，有效防止外源性污染，確保菌檢成功率。本儀器一次購買長期使用，每次試驗每個濾頭損耗一張濾膜，無廢物處理，符合環保(GLP)要求，貴重葯液可以回收等優點。極大節約試驗費用。本儀器不僅符合中國葯典2010年版和2005版(草案),亦可適用於英、美國及歐洲葯典.是適合國家葯品GMP認證的必備儀器。
❽ 多聯薄膜過濾器不銹鋼的怎麼滅菌呀,難道要拆下來嗎微生物檢驗
乾熱啊，或者有那種手持式高溫火焰槍
❾ 薄膜過濾法的培養基是不是倒立培養
薄膜過濾法的培養基是不是倒立培養
准備工作：用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放回入濾杯中答，包好濾杯，連同量筒、培養基、平皿、取膜器、三角燒瓶等一起121℃滅菌30min。滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）