『壹』 細胞培養基加了血清後還可以過濾么
1、血清要做滅活處理;
2、滅活後的血清要經過.45和.22慮膜過濾;
3、培養基是不可以紫回外照射的。
還要答注意一點的是血清一般不推薦直接過濾除菌的,如果懷疑血清染菌,過濾時要把血清按比例加入到培養液中,然後才可以過濾除菌!!
『貳』 10%新生牛血清的DMEM完全培養配置方法
你培養基買的液體的還是粉狀的?如果液體的加10%血清不就行了,如果粉狀的要用ddH2O配,配好調PH值,然後0.22uM濾膜過濾除菌,再加10%血清就行了
如果你什麼都沒有買准備自己配,我就無語了……
『叄』 如何配DMEM培養基
這里是一份GIBCO的低糖DMEM粉劑配製說明(普通高糖的DMEM培養基配法是一樣的):
TO PREPARE 1*LIQUID
1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final volume as possible.
2. Add powdered medium to 15 to 30℃ (room temperature)water with gentle stirring. (Do not heat water)
3. Rinse out inside of package to remove all traces of powder.
4. Add 3.7g of NaHCO3 per liter of medium.
5. Dilute to a desired volume with water. Stir until dissolved. (Do not over-mix)
6. Adjust pH of medium to 0.20.3 below desired final working pH* use of IN NaOH or IN HCl is recommended. (Add slowly with stirring) After pH has been adjuste keep container closed until medium is filtered.
7. Sterilize immediately by membrane filtration. (Positive pressure recommended) *pH unite will usually rise 0.1-0.3upon filtration.
另外,在李玲、李雪峰編著的《細胞生物學實驗》中配製方法如下:
1 制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。
2 稱取所需量的乾粉培養基,加入約終體積一半的三蒸水中;若配製一個包裝的培養液,在將整個包裝的乾粉倒入三蒸水後,需用水洗包裝袋內面2次,倒入培養液中,以保證所有乾粉都溶解成培養液。磁力攪拌或人工攪拌使之完全溶解。
3 根據包裝袋上的要求補加所需量的碳酸氫鈉;根據實驗需要,添HEPES(5-20mmol/L)、谷氨醯胺和其他特殊物質。
4 加水定容到終體積。
5 必要時用1 mol/L 鹽酸和1 mol/L 氫氧化鈉調節pH。
6 用無菌0.22um濾膜過濾除菌,分裝於無菌血清瓶中,4℃冰箱保存。 配製好的培養液用前加入100U/mL青黴素和100U/mL鏈黴素,並根據需要加入血清(5%-20%)。
『肆』 DMEM培養基為什麼要通過0.2um微膜過濾
DMEM培養基中含有大量的不耐高壓高溫的有機物,無法通過溫度來滅菌,只能通過過濾除菌,而過濾除菌通常採用0.2微米孔徑的過濾膜過濾。
『伍』 小牛血清和胎牛血清有何區別呢,完全培養基DMEM到底加哪種
完全培養基DMEM加胎牛血清。
小牛血清和胎牛血清的區別:
1、來源不同:
(1)小牛血清取自出生10-30天的小牛,出生三月齡小牛動脈采血分離血清。
(2)胎牛血清是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。
2、品質不同:
(1)小牛血清品質不如胎牛血清。
(2)胎牛血清是品質最高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。
3、用途與用法不同:
(1)小牛血清而有些細胞只需小牛血清即可。
(2)胎牛血清某些細胞必需胎牛血清才能生長。
4、外觀不同:
(1)小牛血清外觀黃色澄清,微溶血,有異物稍粘稠液體。
(2)胎牛血清是一種性狀,外觀淺黃色澄清,無溶血,無異物稍粘稠液體。
(5)DMEM完全培養基血清未過濾擴展閱讀
1、牛血清的功能:
牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用於動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
(1)提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
(2)提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
(3)有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
(4)是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
(5)起酸鹼度緩沖液作用。
(6)提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
2、解凍血清注意事項:避免產生沉澱物
(1)解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易產生沉澱物。
(2)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生
(3)請勿將血清置於37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
(4)血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(5)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉澱物的增多。
血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現,該如何處理。欲去除這些絮狀沉澱物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉澱物,因為它可能會阻塞過濾膜。
參考資料來源:網路-胎牛血清
網路-血清
『陸』 什麼是DMEM(H)細胞培養基,有什麼作用,必須跟疫苗一起用嗎
DMEM就是Dulbecco's Modified Eagle Medium 的縮寫吧,是一種用途廣泛的細胞培養基。一般的細胞系比如HeLa,293T,3T3等都可以用這種培養基培養。H的意思應該是 High Glucose的意思吧,不同的細胞對glucose的需求不太一樣因此DMEM也分High Glucose和Low Glucose。至於疫苗什麼的我不太明白,一般的細胞培養只需要DMEM和血清就可以了。
希望可以幫到您。
『柒』 DMEM培養液中加血清時過膜的目的是什麼
除去污染和雜質,同時過濾膜後可以除菌,因為DMEM不能高壓滅菌,對於不能經過高壓蒸汽滅菌法滅菌的試劑都需要採用濾膜除菌方法。濾膜分0.22和0.45的,0.45除顆粒和大多數細菌微生物,0.22可以達到GMP或者葯典規定的除菌99.99%的要求,希望對你有幫助,望採納。
『捌』 DMEM培養基中含血清嗎
根據實驗需要自己加,比如完全培養基,飢餓培養基等
『玖』 什麼是DMEM培養基
DMEM/F12培養基說明書
產品代號:MD207-050
一.【組成成分】
成分 mg/L 成分 mg/L 成分 mg/L
無水氯化鈣 116.6 L-亮氨酸 59.05 亞油酸 0.042
五水硫酸銅 0.0013 L-賴氨酸鹽酸鹽 91.25 硫辛酸 0.105
九水硝酸鐵 0.05 L-蛋氨酸 17.24 酚紅 8.1
七水硫酸亞鐵 0.417 L-苯丙氨酸 35.48 1,4-丁二胺二鹽酸鹽 0.081
氯化鉀 311.8 L-絲氨酸 26.25 丙酮酸鈉 55
氯化鎂 28.64 L-蘇氨酸 53.45 維生素H 0.0035
無水硫酸鎂 48.84 L-丙氨酸 4.45 D-泛酸鈣 2.24
氯化鈉 6999.5 L-天門冬醯胺 7.5 氯化膽鹼 8.98
無水磷酸二氫鈉 54.35 L-天門冬氨酸 6.65 葉酸 2.65
磷酸氫二鈉 71.02 L-半胱氨酸鹽酸鹽 17.56 i-肌醇 12.6
七水硫酸鋅 0.432 L-谷氨酸 7.35 煙醯胺 2.02
L-精氨酸鹽酸鹽 147.5 L-脯氨酸 17.25 鹽酸吡哆醛 2
L-胱氨酸鹽酸鹽 31.29 L-色氨酸 9.02 鹽酸吡哆醇 0.031
L-谷氨醯胺 365 L-酪氨酸 38.4 核黃素 0.219
甘氨酸 18.75 L-纈氨酸 52.85 鹽酸硫胺 2.17
L-組氨酸鹽酸鹽 31.48 D-葡萄糖 3151 胸苷 0.365
L-異亮氨酸 54.47 次黃嘌呤 2 維生素B12 0.68
二.【產品指標】
外觀 粉紅色固體粉末
溶解性 完全溶解,溶液澄明。
pH值
①加NaHCO3 6.60~7.20
②不加NaHCO3 5.50~6.10
水分(%) ≤5.0
滲透壓(mOsm/kgH2O)
①加NaHCO3 274~302
②不加NaHCO3 238~263
細菌內毒素(EU/ml) ≤10
微生物檢查(CFU/g) ≤1000
細胞生長試驗 細胞形態 與標准細胞形態相似
細胞數量 加10%小牛血清培養4天,細胞密度從104細胞/ml增加到105細胞/ml。
三.【配製方法】
⑴ 將一袋培養基全部倒入一容器中,用少量注射用水將袋內殘留培養基洗下,並入容器。加註射用水(水溫20℃~30℃)到950毫升,輕微攪拌溶解。
⑵ 加入2.438克碳酸氫鈉。
⑶ 輕微攪拌溶解,加註射用水至1升。
⑷ 用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol / L鹽酸溶液調pH至所需值。
⑸ 用0.2μm濾膜正壓過濾除菌。
⑹ 溶液應在2℃-8℃下避光保存。
四.【貯藏】 2℃-8℃冷藏,乾燥、密封、避光貯藏。
『拾』 dmem培養基含血清嗎
一般不含,因此細胞培養需要加入FBS(胎牛血清)