1. 離子交換柱柱效半峰時間長的原因
可能是流動相流速設置不合理,或者是交換柱很久沒淋洗過,導致流動相流動速度減慢。
2. 高效液相色譜出峰時間由什麼決定的
高效液相色譜出峰時間由多種因素決定:
1、固定相(色譜柱填料,長短,粒徑)。
2、流動相(包括有機相水相配比,pH值,有機相組成,水相中緩沖鹽組成,緩沖鹽濃度,是否加入表面活性劑,是否加入離子對試劑等)。
3、流速(改變全部出峰時間,不會改變出峰順序和相對保留時間)。
高效液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,採用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離後,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。
(2)強離子交換柱出峰時間擴展閱讀:
高效液相色譜法有「四高一廣」的特點:
1、高壓:流動相為液體,流經色譜柱時,受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對載液加高壓。
2、高速:分析速度快、載液流速快,較經典液體色譜法速度快得多,通常分析一個樣品在15~30分鍾,有些樣品甚至在5分鍾內即可完成,一般小於1小時。
3、高效:分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果,比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
4、高靈敏度:紫外檢測器可達0.01ng,進樣量在μL數量級。
5、應用范圍廣:百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析,顯示出優勢。
6、柱子可反復使用:用一根柱子可分離不同化合物
7、樣品量少、容易回收:樣品經過色譜柱後不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
3. 離子對濃度和出峰時間的關系
是流動相濃度,因為離子交換色譜的分離原理就是利用色譜柱對不同離子的吸附或交換能力不同而完成的,因此這種形式的色譜柱,對流動相的離子濃度和pH都非常敏感
4. 離子交換色譜法的原理、裝置及應用是什麼
一、原理:離子抄交換色譜(ion exchange chromatography,IEC)以離子交換樹脂作為固定相,樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時,組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
二、裝置:
1、分離柱:裝有離子交換樹脂,如陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂或螯合離子交換樹脂。
2、抑制柱和柱後衍生作用:常用的檢測器不僅能檢測樣品離子,而且也對移動相中的離子有響應,所以必須消除移動相離子的干擾。
3、檢測器:分為通用型和專用型。通用型檢測器對存在於檢測池中的所有離子都有響應。離子色譜中最常用的電導檢測器就是通用型的一種。
三、應用:
離子色譜主要用於測定各種離子的含量,特別適於測定水溶液中低濃度的陰離子,例如飲用水水質分析,高純水的離子分析,礦泉水、雨水、各種廢水和電廠水的分析,紙漿和漂白液的分析,食品分析,生物體液(尿和血等)中的離子測定,以及鋼鐵工業、環境保護等方面的應用。
5. 色譜柱出峰時間提前
出峰提前主要可能是流動相中有機相(或強洗脫力相)比例變多了,或者是柱溫提高了,再就是柱子不同,或是柱子的保留和以前有變化。
建議:用完柱子一定要進行沖洗維護,把分析方法固定,在兩相或三相進行比例洗脫時一定要用儀器的比例閥進行操作,不要直接配製,這樣都會有利於保留時間穩定
6. 離子色譜中各種常見陰離子的色譜出峰時間是多少
不同的色譜條件,出峰時間也不一樣,建議你去「色譜世界」網站看看,有很多離子色譜圖,都有保留時間及條件,你可以借鑒。
7. 液相色譜的出峰時間問題
出峰時間延長的影響因素太多,流動相,柱溫,實際流速等都可能影響,只要管路是通暢的,流速不變,柱壓升高應該一般不會影響保留時間,因為對溶質起保留作用的填料不會增多。分析測試網路網樂意為你解答實驗中碰到的各種問題,祝你實驗順利。
壓力不等於流速,其他條件不變,色譜柱種類比較關鍵。
8. 離子交換柱層析分離氨基酸實驗中asp和lys出峰次序不同的原因是什麼
氨基酸的分離鑒定——紙層析法
一,實驗目的
掌握氨基酸紙層析的方法和原理,學會分析待
測樣品的氨基酸成分.
二,實驗原理
紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性,吸附一層水作為固定相,有機溶劑為流動相.當有機相流經固定相時,物質在兩相間不斷分配而得到分離.
溶質在濾紙上的移動速度用Rf值表示:
Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離
在一定的條件下某種物質的Rf值是常數.Rf值的大小與物質的結構,性質,溶劑系統,層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關.本實驗利用紙層析法分離氨基酸.
三,實驗器材
(1)大燒杯(5000mL):1隻/組
(2)微量注射器(100 L):1隻/ 組.
(3)噴霧器:公用.
(4)培養皿:1隻/組.
(5)層析濾紙(長22cm,寬14cm的新華一號濾紙):1張/組.
(6)直尺,鉛筆:自備.
(7)電吹風:1隻/組.
(8)托盤,針,白線:1套/組.
(9)手套:1雙/組.
(10)塑料薄膜:公用.
(11)小燒杯:50mL,1隻/組.
四,實驗試劑
(1)擴展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中,與5體積水混合,充分振盪,靜置後分層,棄去下層水層.
(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%的待測氨基酸液1種.
(3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.
實驗試劑
五,實驗操作
檢查培養皿是否乾燥,潔凈;若否,將其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾.
(1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上,將層析缸或大燒杯到置於塑料薄膜上,再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置於倒置的層析缸或大燒杯中,用塑料薄膜密封起來,平衡20min.
(2)規劃:帶上手套,取寬約14cm,高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行於底邊的直線A,在直線上做4個記號,記號之間間隔2cm,這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行於左邊緣的直線B,在B線上以A,B兩線的交點為原點標明刻度(以厘米為單位),參見左圖.
(3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,以免交叉污染),點在這四個位置上.擠一滴點一次,同一位置上需點2~3次,2~3mL/次,每點完一點,立刻用電吹風熱風吹乾後再點,以保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm.每人須點4個樣,其中3個是已知樣,1個是待測樣品.
(4)層析:用針,線將濾紙縫成筒狀,紙的兩側
邊緣不能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿中加入擴展劑,使其液面高度達到1cm左右,將點好樣的濾紙筒直立於培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面在A線下約1cm),罩上大燒杯,仍用塑料薄膜密封.當擴展劑上升到A線時開始計時,每隔一定時間測定一下擴展劑上升的高度,填入表3-1中.當上升到15~18cm,取出濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描出溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾.
(5)顯色:用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然後立即用熱風吹乾,即可顯出各層析斑點,參見左圖.
(6)計算各種氨基酸的Rf值,並判斷混合樣品中都有哪些氨基酸,各人將自己的實驗結果貼在實驗報告上,見表3-2.
(7)以層析時間為橫坐標,擴展劑上升高度為縱坐標畫圖,求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間.
(8)將微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用過的展層液和平衡液,將培養皿洗凈,整理好桌面上的儀器和試劑
9. 離子色譜中各種常見陰離子的色譜出峰時間是多少
一般的規律是,離子的價數越高,保留時間越長;離子半徑越大,保留時間越長;離子極化度越大,保留時間越長。
所以一般出峰順序是:氟<氯<亞硝酸<溴<硝酸<磷酸<硫酸
當然這出峰順序規律也不是一定的,有的柱子會有些變化
出峰時間與淋洗液濃度,柱子溫度,柱子特性等都有關系,所以出峰時間不固定,隨條件變化而變
10. 離子交換樹脂柱上柱速度
柱子下端流出液的速度是2倍柱體積每小時。層析柱的下端一般是由旋專塞的,開口大小控屬制流速啊,拿個量筒記下時間,比如5分鍾能流出多少體積,最後換算成每小時多少,比較下速度快慢,多退少補。柱子下端的旋塞不太容易控制流速的話,可以在下面接一個輸液器,就是打點滴那種,很便宜,一看你就知道怎麼用。可以手動上樣,如果懶或者柱子高,可以加個泵,將樣品通過泵打到柱子上端。夠詳細吧。