A. 離子交換層析分離氨基酸時,(苯乙烯磺酸鈉)為什麼組氨酸後洗脫出來而賴氨酸先洗脫出來
你們是不是這樣分析的:組氨酸的PI是7.59,賴氨酸是9.74,這證明賴氨酸鹼性更強,酸性更弱,而用H+洗脫時,先洗脫是應該是酸性弱的物質所以賴氨酸應該先洗脫下來?
或許可以這樣解釋:鹼性氨基酸和陽離子交換樹脂的結合是以氫離子為媒介,藉助氫鍵的極性連接起來的。如果我沒記錯的話,伯氨基形成的氫鍵要比仲氨基形成的氫鍵強一些。
不管用是鈉型的還是氫型的陽離子交換樹脂,組氨酸和賴氨酸要與其吸附都必需通過氫離子。鈉型的陽離子交換樹脂並是不所有的磺酸基都與鈉離子結合的。你用平衡常數算一下。而且,你用來溶解氨基酸的溶液是強鹼性的嗎?你的樹脂是再生的嗎?
滿意請採納。
B. 利用陽離子交換層析分離下列每一對氨基酸,哪一種氨基酸首先被PH7緩沖液從離子交換柱上洗脫出來。
氨基酸與粒子抄交換樹脂的吸附力襲大小取決於它們之間的電荷引力和疏水作用。第一組中甘氨酸和亮氨酸均為非極性氨基酸,但是相比之下甘氨酸的極性要更強,也就是疏水性更弱,它會先被洗脫。第二組中,絲氨酸是中性條件下不帶電荷的極性氨基酸,丙氨酸是非極性氨基酸,所以絲氨酸疏水性差,先被洗脫。
C. 離子交換層析分離混合氨基酸實驗能否用陰離子交換樹脂
您好!離子交換層析分離混合氨基酸實驗也能用陰離子交換樹脂,但是一般都版是用強陽權性離子交換樹脂在pH2-3之間進行分離。
因為大部分氨基酸等電點都偏酸,如果用強陰離子交換樹脂的話,洗脫鹽濃度較大,而且分離效果不如陽離子交換的好。
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D. 什麼是氨基酸的離子交換
離子交換層析 (ion exchange chromatography,簡稱ICE)是分析和制備樣品混合物的液-固相層析方法,是基於待測物質的陽離子或陰離子和相對應的離子交換劑間的靜電結合,即根據物質的酸鹼性、極性等差異,通過離子間的吸附和脫吸附原理將電解質溶液各組分分開。它是從復雜混合物體系中分離性質極為相似的生物分子的有效手段之一。由於帶電荷不同的各種物質對離子交換劑有不同親和力,通過改變洗脫液的離子強度和pH值,控制這種親和力,即可使這些物質依據親和力大小順序依次從層析柱中洗脫下來。
氨基酸是兩性電解質,分子 上的凈電荷取決於氨基酸的等電點和溶液的pH值,各種氨基酸分子結構不同,在同一pH值時所帶電荷的性質(正、負)和多少不同,與離子交換樹脂的親和力有差異,因此可根據親和力從小到大的順序被洗脫液分別洗脫下來,達到分離的效果。
三、儀器與試劑
(一)實驗器材
(1)玻璃層析柱
(2)試管
(3)移液管
(4)恆壓洗脫瓶
(5)部分收集器
(6)水浴鍋
(7)分光光度計
(8)電爐
(二)材料與試劑
(1)苯乙烯磺酸鈉型樹脂(100~200目)
(2)2mol/L鹽酸溶液
(3)2mol/L氫氧化鈉溶液
(4)標准氨基酸溶液:將天門冬氨酸和賴氨酸分別配成2mg/mL的0.1mol/L鹽酸溶液。
(5)混合氨基酸溶液:將上述天門冬氨酸和賴氨酸溶液按1:4比例混合。
(6)檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸溶液(pH5.8,鈉離子濃度0.45mol/L):取檸檬酸14.25克、氫氧化鈉9.30克分別溶於水後混合,加入濃鹽酸5.25毫升,定容至500毫升;4℃冰箱保存。
(7)顯色劑:2克水合茚三酮溶於95%乙醇中,加水至100毫升。
E. 離子交換層析法是能分離所有的氨基酸嗎
首先了解一下離抄子交襲換層析的原理,離子交換層析是用離子交換劑作固定相,利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的層析方法。帶電荷量少,親和力小的先被洗脫下來;帶電荷量多,親和力大的後被洗脫下來。因此氨基酸由於所帶電荷量的不同而被逐一洗脫分離開。
F. 生化氨基酸的離子交換色譜分離實驗為什麼要在570納米下測吸光度,曲線怎麼分析
一般測定需要在最大吸收波長處測定吸光度,提高靈敏度和准確度,每一種物質都有自己的最大吸收波長,這個數據就可以分辨哪章氨基酸了
G. 陽離子交換層析怎樣判斷中性氨基酸的洗脫順序。詳細一點,謝謝了。比如亮氨酸,色氨酸,甘氨酸。
首先得知道待分離氨基酸的等電點,洗脫液也分為幾種,一種洗脫液的pH對應一種氨基酸的pI,用某一洗脫液洗脫時,對應的氨基酸不帶電,然後就被洗脫下來了
H. 20種氨基酸用離子交換層析法分離順序
這看你用什麼填料進行交換層析了,還有離子交換緩沖液的pH多少。
因為氨基酸有酸性氨基酸、鹼性氨基酸以及中性氨基酸。不同交換條件分離順序不同。
I. 如何應用離子交換層析分離氨基酸混合物
離子交換樹脂是一種合成的高聚物,不溶於水,能吸水膨脹.高聚物分子由能電離回的極性基團及非極答性的樹脂組成.極性基團上的離子能與溶液中的離子起交換作用,而非極性的樹脂本身物性不變.通常離子交換樹脂按所帶的基團分為強酸(=R=S03H)
J. 離子交換層析分離氨基酸混合物的方法是根據氨基酸的什麼性質
氨基酸的分離鑒定——紙層析法 一,實驗目的 掌握氨基酸紙層析的方法和原理,學會分析待 測樣品的氨基酸成分. 二,實驗原理 紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性,吸附一層水作為固定相,有機溶劑為流動相.當有機相流經固定相時,物質在兩相間不斷分配而得到分離. 溶質在濾紙上的移動速度用Rf值表示: Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 在一定的條件下某種物質的Rf值是常數.Rf值的大小與物質的結構,性質,溶劑系統,層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關.本實驗利用紙層析法分離氨基酸. 三,實驗器材 (1)大燒杯(5000mL):1隻/組 (2)微量注射器(100 L):1隻/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養皿:1隻/組. (5)層析濾紙(長22cm,寬14cm的新華一號濾紙):1張/組. (6)直尺,鉛筆:自備. (7)電吹風:1隻/組. (8)托盤,針,白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑料薄膜:公用. (11)小燒杯:50mL,1隻/組. 四,實驗試劑 (1)擴展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中,與5體積水混合,充分振盪,靜置後分層,棄去下層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%的待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液. 實驗試劑 五,實驗操作 檢查培養皿是否乾燥,潔凈;若否,將其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾. (1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上,將層析缸或大燒杯到置於塑料薄膜上,再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置於倒置的層析缸或大燒杯中,用塑料薄膜密封起來,平衡20min. (2)規劃:帶上手套,取寬約14cm,高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行於底邊的直線A,在直線上做4個記號,記號之間間隔2cm,這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行於左邊緣的直線B,在B線上以A,B兩線的交點為原點標明刻度(以厘米為單位),參見左圖. (3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,以免交叉污染),點在這四個位置上.擠一滴點一次,同一位置上需點2~3次,2~3mL/次,每點完一點,立刻用電吹風熱風吹乾後再點,以保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm.每人須點4個樣,其中3個是已知樣,1個是待測樣品. (4)層析:用針,線將濾紙縫成筒狀,紙的兩側 邊緣不能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿中加入擴展劑,使其液面高度達到1cm左右,將點好樣的濾紙筒直立於培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面在A線下約1cm),罩上大燒杯,仍用塑料薄膜密封.當擴展劑上升到A線時開始計時,每隔一定時間測定一下擴展劑上升的高度,填入表3-1中.當上升到15~18cm,取出濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描出溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾. (5)顯色:用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然後立即用熱風吹乾,即可顯出各層析斑點,參見左圖. (6)計算各種氨基酸的Rf值,並判斷混合樣品中都有哪些氨基酸,各人將自己的實驗結果貼在實驗報告上,見表3-2. (7)以層析時間為橫坐標,擴展劑上升高度為縱坐標畫圖,求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間. (8)將微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用過的展層液和平衡液,將培養皿洗凈,整理好桌面上的儀器和試劑