蛋白溶液超濾後有沉澱

A. 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦

可能是抄這個蛋白的水溶性較差，也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了，超濾時保持低溫，體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高，選擇更合適的緩沖液，添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。

B. 如何將蛋白質溶液中的水去掉，從而將蛋白質的濃度提高急~~~

1.可以加入丙酮等有機溶劑，使蛋白析出，然後離心收集沉澱，沉澱用去離子水再溶解，去回離子水答量可根據實際需要添加，從而改變蛋白濃度。但該法可能有損蛋白活性。
2.使用透析袋，外側加聚乙二醇乾粉，使水慢慢滲出，該法可維持蛋白活性，但時間較長。
3.使用旋轉蒸發，但針對溫度不敏感的蛋白
4.凍干機凍干，但有些極端。

C. 超濾機過濾後，水中為什麼還是有沉澱物

目前市場上抄的家用凈水器主要分為純水襲類型凈水機和超濾類凈水機兩大類型。而純水機由於過濾精度極高（這種機型需要用電），
在過濾掉水中的有害物質以及微量元素都過濾掉了。而超濾類機型在過濾有害物質的同時，保留了水中的鈣、鎂離子以及微量元素。而水中的鈣、鎂離子隨著溫度的不斷升高，就會被氧化還原，形成白色的結晶物，這是一種氧化還原現象，而並非水中雜質。（如果用礦泉水燒開水一樣會有這種現象發生）。所以樓主大可放心使用。個人建議，一般不泡茶時，最好不要把水燒開，加溫到人體體溫接近就可以了。（這樣水中的鈣、鎂離子就不會被氧化還原）因為燒開始是中國傳統的凈水模式，主要目的是為了殺菌，而通過超濾型凈水機能把水中細菌過濾掉，是可以直接飲用的。

D. 蛋白質的溶解特性與沉澱原理

蛋白質通過鹽析的辦法沉澱的原理是降低蛋白質的溶解度，使蛋白質內凝聚而從溶液中容析出。
蛋白質的沉澱（protein
precipitation），沉澱是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉澱。蛋白質沉澱常用的方法有鹽析、等電點沉澱、有機溶劑沉澱、生物鹼試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉澱等。

E. 超濾濃縮蛋白溶液時其濃度該從高到低還是有低到高對超濾膜好呢

從低到高,當然首先3瓶中蛋白分子量應該差不多,否則先超濾小分子的,主要是減少超濾膜的堵塞程度

F. 蛋白在超濾管濃縮過程中出現沉澱怎麼辦

1、選擇合抄適的超濾管，主要考慮襲MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有。

2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。

注意，一定要等離心機達到目的轉速之後，方可離開
離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理，後果不可預測！膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。

G. 純化後的蛋白在含有高濃度nacl的情況下濃縮容易沉澱嗎

理由相信，濃度越高，對保存蛋白質越有利。加入 PEG 和更換 緩沖液種類是一種值得試驗的方法，但結果如何還在兩可之間，沒試過就不會知道。

鎳柱下來以後，溶液中混有相當多咪唑和議定含量的Ni，都有可能引起蛋白質不穩定變性沉澱。

我在純化一種蛋白質時，也遇到過相同的情況，雖然蛋白質不同，但是也許能有幫助。

鎳柱後，用含 EDTA 的緩沖液透析，除去 Ni ，再過 DEAE 離子交換柱，之後透析再濃縮，分裝小管，-80度保存。一次使用一支。
理論上說蛋白質應在高濃度情況下保存，但當緩沖溶液中含有大量鹽而且目的蛋白中含有大量輸水氨基酸的情況下，高濃度就不利於保存。
在這種情況下，如果你不想太多的稀釋蛋白，可以選擇適當脫鹽，如透析、凝膠過濾、超濾等，但應保持緩沖液具有一定的離子強度（500mM NaCl這個濃度太高，可以降到100），如果還不行的話，可以添加甘油至終濃度5%左右。
Ni純化最好不要用Tris，可能會影響Ni的結合。

H. 我純化的蛋白總是有沉澱,該怎麼辦 已經改過鹽濃度,沉澱還是在啊

剛純化完就有沉澱？那上樣的時候應該也有沉澱吧？
復性時出現沉澱是比較難解決，溫度不要變化太大、速率降低點、濃度低點、加甘油保護劑等。

I. 為什麼蛋白質提取過程須在20攝氏度以下進行

用高濃度的鹽溶液變性後的蛋白質一般用透析超濾處理除去鹽離子後能夠復性，也可以用分子篩層析除去鹽，順便根據分子量進行分離。
從頭做分離注意幾個問題：
1.查文獻或者資料庫，確定蛋白分子量大小、等電點等性質。
2.確定該蛋白質在動物體內的各個器官組織中的分布情況，在前處理時期一定要選用富含該蛋白質的動物的相應的器官和組織用作粗分離的原料。
3.確定該蛋白質是不是膜蛋白質，是的話在粉碎組織後的抽提階段要加入表面活性劑把膜蛋白質從膜上拉下來；不是膜蛋白，一般不必要用表面活性劑，至少不做電泳的話一般不要用表面活性劑增溶。
4.細分離階段根據蛋白質的特徵，安排不同的操作步驟，一般在細分離階段之前可先使用沉澱濃縮蛋白質，比如鹽析、有機試劑沉澱、聚乙二醇沉澱等，獲得蛋白質沉澱後要重新溶解，並且用過濾、超濾和透析除去沉澱劑。一般不要用強變性劑和加熱引起蛋白質沉澱，以免變性無法逆轉。離子交換層析或者疏水層析，然後用凝膠層析，如果用能夠獲得該種蛋白質的標准品的話，可以制備出抗體，則可用親和層析，或者能夠知道該蛋白的專一性配體的話（可以從資料庫獲得資料）也可以使用親和層析，否則親和層析這步就做不了，只能在檢驗該蛋白質產品純度不夠的話再做一輪或多輪離子交換層析或者疏水層析，然後用凝膠層析。當然經過了各種層析方法，純化出來的目地蛋白質的濃度要比上樣前的濃度更低不少，不過濃縮到也不難，用超濾即可。
5.檢測純度，可以用溶解法或者MS測定分子量或電泳。理論上電泳方法也可以用於分離提純，但是因為從凝膠中回收蛋白質的話還要在純化目的蛋白質，所以我不主張使用電泳方法也可以用於分離提純，尤其是若用SDS-PAGE要在上樣前加熱變性蛋白質，能夠復性很難說。
6.對於分離提純的蛋白質的所有操作一般適宜在零度到四度范圍內，可以在有空調的房間進行並將空調溫度調低，必要的話，須在有關設備周圍固著冰塊。

J. 請問使蛋白質沉澱的方法有幾種

使蛋白質沉澱的方法有3種。

1、鹽析法

在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。例如用半飽和的硫酸銨來沉澱出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉澱出來，鹽析沉澱的蛋白質，經透析除鹽，仍保證蛋白質的活性。

2、重金屬鹽沉澱蛋白質

蛋白質可以與重金屬離子如汞、鉛、銅、銀等結合成鹽沉澱。重金屬沉澱的蛋白質常是變性的，但若在低溫條件下，並控制重金屬離子濃度，也可用於分離制備不變性的蛋白質。如臨床上利用蛋白質能與重金屬鹽結合的這種性質，搶救誤服重金屬鹽中毒的病人，給病人口服大量蛋白質，然後用催吐劑將結合的重金屬鹽嘔吐出來解毒。

3、生物鹼試劑以及某些酸類沉澱蛋白質

蛋白質又可與生物鹼試劑（如苦味酸、鎢酸、鞣酸）以及某些酸（如三氯醋酸、過氯酸、硝酸）結合成不溶性的鹽沉澱。如臨床血液化學分析時常利用此原理除去血液中的蛋白質，此類沉澱反應也可用於檢驗尿中蛋白質。

(10)蛋白溶液超濾後有沉澱擴展閱讀：

蛋白質的沉澱可分為兩類：

1、可逆的沉澱反應：蛋白質分子的結構尚未發生顯著變化，除去引起沉澱的因素後，蛋白質的沉澱仍能溶解於原來的溶劑中，並保持其天然性質而不變性。如大多數蛋白質的鹽析作用或低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用於蛋白質。

2、不可逆的沉澱反應：蛋白質分子內部結構發生重大改變，蛋白質常變性而沉澱，不再溶於原來溶劑中。如加熱引起的蛋白質沉澱與凝固，蛋白質與重金屬離子或某些有機酸的反應。