❶ 純化的單克隆抗體，超濾濃縮的時候會把磷酸鹽離心掉導致抗體的緩沖環境變成水嗎
不會的。。。
超濾濃縮對於緩沖液成分不會有任何改變的，因為PBS中的磷酸根離子回也好答，氯離子也好，鈉離子也好都是很小的離子，可以在溶液中自由擴散，不會因為超濾離心就被甩到下層濾液中去。
你可以做個簡單的實驗，取一定體積PBS溶液測一下pH值和電導率值，之後用超濾管去離心。取出上層未被濾完的溶液再測一下pH值和電導率值，會發現pH值和電導率值和之前測的是一樣的。即可證明未被濾完的溶液還是PBS溶液，而不是水。
❷ 反滲透和超濾有什麼區別
1.UF（超濾）
UF能截留0.002~0.1微米之間的顆粒和雜質，UF膜允許小分子物質和溶解性固體（無機鹽）等通過，但將有效阻擋住膠體、蛋白質、微生物和大分子有機物，用於表徵UF膜的切割分子量一般介於1，000~100，000之間，RO膜兩側的運行壓力一般為0.2~7bar。
2.RO（反滲透）
RO是最精密的膜法液體分離技術，它能阻擋所有溶解性鹽及分子量大於100的有機物，但允許水分子透過，醋酸纖維素RO膜脫鹽率一般可大於95%，RO復合膜脫鹽率一般大於98%。它們廣泛用於海水及苦成水淡化，鍋爐給水、工業純水及電子級超純水制備，飲用純凈水生產，廢水處理及特種分離等過程，在離子交換前使用RO可大幅度地降低操作費用和廢水排放量。RO膜的運行壓力，當進水為苦鹹水時一般大於5bar，當進水為海水時，一般低於84bar。
一、處理細菌效果不同
由於反滲透膜的孔徑更為狹小，能夠對水中的雜質和細菌數量得到有效的控制。反滲透膜處理過的水菌落總數比超濾膜凈化後的菌落總數少許多，因此反滲透膜處理水中細菌的能力要比超濾膜性能更為優越。
二、凈化後的水使用方向不同
常情況下反滲透膜凈化後的水分為兩種，一種純水可供飲用，一種濃水可供洗滌使用。使用超濾凈水器凈化的水通常只能做洗滌用水，其水質不符合飲用水的標准。
三、化學污染物處理效果不同
反滲透膜的孔隙僅超濾膜的百分之一，因此能夠有效地去除水中的重金屬和農葯的化學污染物，不僅能夠去除其中的顆粒污染物及較大的雜質，在化學處理方面反滲透膜效果比超濾膜更為突出。
❸ 超濾濃縮蛋白溶液時其濃度該從高到低還是有低到高對超濾膜好呢
從低到高,當然首先3瓶中蛋白分子量應該差不多,否則先超濾小分子的,主要是減少超濾膜的堵塞程度
❹ 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦
可能是抄這個蛋白的水溶性較差，也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了，超濾時保持低溫，體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高，選擇更合適的緩沖液，添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。
❺ 【求助】超濾能否脫鹽和濃縮一步完成啊
昨天有個millipore的技術人員就是這樣說的~HarveyWang(站內聯系TA)本人主要是從發酵液中提取酶,文獻上一般的步驟是先用硫酸銨沉澱,然後透析,再用超濾濃縮,最後冷凍乾燥, 這要看你需要做多大的體積了。:) (1)硫酸銨沉澱法：我的觀點是，如果你1000 mL的發酵液的話，硫酸銨沉澱可以用，但是這浪費多少硫酸銨啊？！做學術研究可以，如果你的課題是計劃做提取酶的工藝和中試的話，這種硫酸銨沉澱並不有太大的實用性。 （2）超濾步驟的選用要看你的酶溶液有多大的體積。 如果發酵液的酶的量並不是很濃的話，例如50 mL 10 mg/L的酶量，用這種超濾膜會損失掉大部分你的目地酶，都粘到膜上去了，很難洗下來（稀的NaOH可以）。不能輕信某品牌銷售說的話，用用就知道了。如果你的濃縮液體積比較大，例如100-500 mL，酶的濃度也很高，這是可以用超濾膜的。 （3）對於小體積的脫鹽透析，透析袋很好用的。這里是指10 mL-100 mL。從操作方便性上看，這個在小型試驗中我最喜歡用。好簡單啊。。。。 自己頂一個,解答的詳細的有重獎!(金幣可以再加) （1）發酵液的酶蛋白濃度大約是多少，純度是多少？發個SDS-PAGE看看，註明上樣量。 （2）硫酸銨沉澱後和透析後可上離子交換，這可以濃縮10-1000倍，還可以有純化效果，然後再冷凍濃縮啊。HarveyWang(站內聯系TA)哈哈哈哈，回帖就有金幣拿:Ddaidai0124(站內聯系TA)本人現在只是小規模的提取酶,馬上要上發酵罐,需要大規模的提取酶液,不是做酶學性質,所以酶的純度要求不高,和工業用酶的純度差不多就可以了!希望大家推薦個適合工業化提取酶液的工藝,主要考慮成本問題.請版主幫忙在增加懸賞金幣20個lvgl158(站內聯系TA)起碼知道 它的分子量 才能知道是否可以用同一個膜 如果小於一萬可能就有點難度 可以先用少量的硫酸銨澄清 離心後 進行超濾 在超濾前 必須的保證液體 清澈hezhao999(站內聯系TA)體積的在200ml以上用超濾儀，200ml以下可以用超濾離心管，如果不知分子量選用1000的膜完全可以了，如果知道分子量，則選擇酶分子量1/5的超濾膜。zhaocy8903(站內聯系TA)多大規模的發酵 多大規模的發酵
❻ 溶液中含有3%的金屬離子，能否通過反滲透將溶液濃縮到5%以上的金屬離子的溶液，再者前段是否需要用超濾
反滲透又稱逆滲透，一種以壓力差為推動力，從溶液中分離出溶劑的膜分離操作。對膜一側的回料液施加答壓力，當壓力超過它的滲透壓時，溶劑會逆著自然滲透的方向作反向滲透。從而在膜的低壓側得到透過的溶劑，即滲透液；高壓側得到濃縮的溶液，即濃縮液。若用反滲透處理海水，在膜的低壓側得到淡水，在高壓側得到鹵水。
因此，反滲透就是阻礙溶液由高濃度向低濃度擴散，可起到濃縮的作用
反滲透通常使用非對稱膜和復合膜。反滲透所用的設備，主要是中空纖維式或卷式的膜分離設備
反滲透過程所用的半透膜，只能透過水分子而不能透過鹽分子。
超濾是一種加壓膜分離技術，即在一定的壓力下，使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特製的薄膜，超濾膜過濾示意圖而使大分子溶質不能透過，留在膜的一邊，從而使大分子物質得到了部分的純化。超濾的原理與反滲透是不同的
❼ 超濾的工作原理是什麼
超濾的工作抄原理
超濾屬於襲一種分離技術，將壓力專為動力膜分離的過程，過濾的精度在0.01-0.005um的范圍之內。它可高效的去除水中的細菌、病毒、懸浮物、膠體等顆粒狀物質，已經廣泛應用於物質的分離、濃縮、提純等，效果非常好。同時在PH值為2-11的條件下能夠連續的使用。
超濾膜一種孔徑規格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.02微米的微孔過濾膜。採用超濾膜以壓力差為推動動力的膜過濾方法為超濾膜過濾。超濾膜大多由醋酯纖維或與其性能類似的高分子材料製得。最適於處理溶液中溶質的分離和增濃，也常用於其他分離技術難以完成的膠狀懸浮液的分離，其應用領域在不斷擴大。
❽ 膜過濾是按大小篩選分子，為什麼超濾是說分子量篩選，而微濾則是體積篩選
你這個問題算是找對人了。
1.「膜過濾是按大小篩選分子」這句話說的是不完全對版的。因為膜按照分離權物質的大小來分為微濾（0.1um以上，通常指0．2um以上）、超濾（0．1um一下）、納濾和反滲透（離子級別，通常是10nm以下）。
2．「超濾」通常是用於分離和濃縮蛋白質＼膠體。微濾通常用於細菌（0．2um膜）或者過濾微小顆粒（0．45um）。細菌和微小顆粒不是分子級別的，蛋白質的可以說是分子級別的。
換句話說吧，其實上面所說的超濾和微濾的孔徑是用物理孔徑來分的，這對於微濾來說是沒有問題的，但是對於超濾來說，但說孔徑是多少um是不合適的。因為在電鏡下分析超濾的孔徑是很困難的（即使是能觀察到膜表面孔徑也不能證明這個孔是通透的），現在在學術界通常用蛋白質＼葡聚糖＼聚乙二醇等來評價膜的過濾效果。這些評價物質是用分子量來標定的，比如對於牛血清蛋白（64000）的截留率為90％，那麼就說這個超濾膜是6．4w。但是這個和孔徑的具體關系並沒有完全建立起來，這個問題比較復雜，就不細說了。
微濾就是小孔截住大顆粒物質，孔大小就用直徑或者半徑來表示，這個就沒有必要多說了。
❾ 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
❿ 什麼是超濾，超濾是如何工作的
超濾是一種膜分離技術，(UItrafil-tration 簡稱UF)。能夠將溶液凈化，分離或者濃縮。超濾是介於微專濾與納濾之間，屬且三者之間無明顯的分界線。一般來說，超濾膜的孔徑在0.05 um–1 nm之間，操作壓力為0.1–0.5 Mpa。主要用於截留去除水中的懸浮物、膠體、微粒、細菌和病毒等大分子物質。超濾膜根據膜材料，可分為有機膜和無機膜。按膜的外型，又可分為：平板式、管式、毛細管式、中空纖維和多孔式。
超濾是如何工作的？
超濾膜的工作以篩分機理為主，以工作壓力和膜的孔徑大小來進行水的凈化處理。以中空纖維為例，以進水方式可分為外壓式：原水從膜絲外進入，凈水從膜絲內製取。反之則為內壓式。內壓式的工作壓力較外壓式要低。超濾膜在飲用水深度處理，工業用超純水和溶液濃縮分離等許多領域中，得到了廣泛應用。