① 凝膠過濾層析中和凝膠電泳中的分子篩效應有什麼不同
凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
而在聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)中,蛋白質的遷移率取決於它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。進入分離膠後,由於聚丙烯醯胺的分子篩作用,小分子的蛋白質可以容易的通過凝膠孔徑,阻力小,遷移速度快;大分子蛋白質則受到較大的阻力而被滯後,這樣蛋白質在電泳過程中就會根據其各自分子量的大小而被分離。整塊膠板相當於一個分子篩。
② 在操作方面,凝膠過濾與離子交換層析有何異同處
在原理上都是相通的,區別在於流動相和層析劑之間的作用力的不同。
凝膠過濾又名分子篩層析,利用微孔凝膠,將不同分子量的成分分離。
離子交換是利用被分離物質的電荷與層析劑上的離子基團的靜電作用。
③ 凝膠過濾層析和離子交換層析分離蛋白質的原理有何不同
所有的層析在原理上都是相通的,區別在於流動相和層析劑之間的作用力的不同。
離子交換是利用蛋白質表面的電荷與層析劑上的離子基團的靜電作用。
凝膠過濾層析利用了凝膠的多孔性,根據溶劑分子的大小進行分離。
④ 凝膠層析分離物質,有什麼優缺點
凝膠層析操作簡便,所需設備簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質—凝膠完全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。
2.分離效果較好,重復性高。最突出的是樣品回收率高,接近100%。
3.分離條件緩和。凝膠骨架親水,分離過程又不涉及化學鍵的變化,所以對分離物的活性沒有不良影響。
4.應用廣泛。適用於各種生化物質,如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量范圍也很寬,如SephadexG類為102~105d;Sepharose類為105~108d。
5.解析度不高,分離操作較慢。由於凝膠層析是以物質分子量的不同作為分離依據的,分子量的差異僅表現在流速的差異上,所以分離時流速必須嚴格把握。因而分離操作一般較慢。而且對於分子量相差不多的物質難以達到很好的分離。此外,凝膠層析要求樣品粘度不宜太高。凝膠顆粒有時還有非特異吸附現象。
⑤ 凝膠過濾層析和離子交換層析分離蛋白質的原理有何不同
所有的層析在原理上都是相通的,區別在於流動相和層析劑之間的作用力的回不同.
離子交換是利用答蛋白質表面的電荷與層析劑上的離子基團的靜電作用.
凝膠過濾層析利用了凝膠的多孔性,根據溶劑分子的大小進行分離.
⑥ 凝膠過濾層析的基本原理
凝膠過濾層析又稱為排阻層析或分子篩方法。其基本原理是利用被分離物質分子大小不同及固定相(凝膠)具有分子篩的特點,將被分離物質各成分按分子大小分開,達到分離的目的。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
⑦ 凝膠過濾層析和電泳的異同
記得最開始上生物化學的時候,老師問我凝膠電泳和凝膠過濾有什麼區別,當時我回回答一個用電,一個答不用電。。。。。凝膠過濾又稱為分子篩,是用一根柱子裡面有填料,填料是一些粒子,粒子裡面有很多的孔,分子比較小的能進入到粒子的孔裡面,二分子比較大的就會在粒子旁邊流下來。所以用一些蛋白或者是多糖過分子篩,分子大的會先流下來,分子小的後流下來。。。凝膠電泳是運用電泳儀,讓蛋白質或者是核酸在凝膠中移動,移動的速率和分子的大小成反比,分子大的跑得慢,分子小的跑得快。。。。簡單地說,就是這樣。。。。