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超濾管可以去除蛋白中的DNA嗎

發布時間:2021-03-20 11:25:56

① 同一個超濾濃縮管可以用來純化不同的蛋白嗎

不可以的
不管是哪個公司生產超濾濃縮管使用後都會有蛋白殘留在濾膜上,而不管是使回用氯化鈉或答者氫氧化鈉清洗都不能確保可以完全清理掉殘留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白間混合使用,可能前一個蛋白會污染到後一個蛋白,甚至有些某些高活性的酶殘留在上面會造成後一個蛋白被酶切降解,造成不必要的損失。

② SDS為什麼可以去除DNA上結合的蛋白質

SDS是一種含大量負電荷的物質,可以改變蛋白質的空間結構,使蛋白質發生完全變性,與DNA分離。

③ 提取基因組dna過程中,如何去除蛋白質,多糖和脂類等生物大分子

提取基因組dna過程中,如何去除蛋白質,多糖和脂類等生物大分子
不同生物(植物、動物、微生物)的基因組DNA的提取方法有所不同; 不同種類或同一種類的不同組織因其細胞結構及所含的成分不同,分離方法也有差
異。在提取某種特殊組織的DNA時必須參照文獻和經驗建立相應的提取方法, 以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖和酶類物質對隨後的酶切、PCR反應等有較強的抑製作用,因此用富含這類物質的材料提取基因組DNA時, 應考慮除去多糖和酚類物質。
本實驗以水稻幼苗為材料,學習基因組DNA提取的一般方法。
DNA
一、材料
水稻幼苗
二、設備
移液器,冷凍高速離心機,台式高速離心機,水浴鍋,陶瓷研缽,50ml離 心管(有蓋)及5ml和1.5ml離心管,彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩沖液?:100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L
NaCl, 1.5% SDS。
2、提取緩沖液?:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸鈉,6.0gPVP,240ul巰基乙醇,加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液:配方見第一章。
5、其它試劑:液氮、異丙醇、TE緩沖液,無水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步驟:
(一)水稻幼苗或其它禾木科植物基因組DNA提取
1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液?, 60?水浴預熱。
2. 水稻幼苗或葉子5-10g, 剪碎, 在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱
的離心管中, 劇烈搖動混勻, 60?水浴保溫30-60分鍾(時間長,DNA產量高), 不時搖動。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷皮膚),室溫下靜置5-10分鍾, 使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4. 室溫下5000rpm離心5分鍾。
5. 仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫下放置片刻即出現絮狀DNA沉澱。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解於TE。
7. 如DNA不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鍾, 再將沉澱移入TE管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於TE,可在60?水浴放置15分鍾以上,以幫助溶解。
8. 將DNA溶液3000rpm離心5分鍾, 上清液倒入干凈的5ml離心管。
9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分鍾, 除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響,可省略該步驟)。
10. 加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20?放置20分鍾左右,DNA形成絮狀沉澱。

④ 超濾離心管能分離蛋白和聚乙二醇嗎

超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇(PEG)是一種分子量內很小的試劑,而超濾管的容截留分子量一般是在3000道爾頓~10000道爾頓之間。絕大多數蛋白可以被截留在超濾管上層,而聚乙二醇可以穿透濾膜到達超濾管下層
所以超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的

⑤ 為什麼要從蛋白樣品中去除DNA脫氧核糖核酸酶與其有什麼關系

因為DNA會干擾蛋白質的光學測定或化學反應。
脫氧核糖核酸酶可以消化樣品中的DNA,提高蛋白質樣品的純度。

⑥ 醇是如何去除蛋白質的,然後是在DNA沉

氯仿除去蛋白:氯仿是非極性分子,水是極性分子,當蛋白水溶液與氯仿混合時,蛋白質分子之間的水分子就被氯仿擠去,使蛋白失去水合狀態而變性.經過離心,變性蛋白質的密度比水的密度為大,因而與水相分離,沉澱在水相下面,從而與溶解在水相中的DNA分開.而酚與氯仿有機溶劑比重更大,保留在最下層.加入異戊醇能降低分子表面張力,能減少抽提過程中的泡沫產生.同時異戊醇有助於分相,使離心後的上層水相,中層變性蛋白相以及下層有機溶劑相維持穩定. 加預冷的乙醇:冷的乙醇沉澱能力更強.乙醇沉澱DNA的機理是,DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易於聚合. SDS:SDS只是陽離子表活性劑,是蛋白質,特別是膜蛋白的變性劑.在基因組DNA提取中,SDS只是起破碎細胞游離核酸的作用,無法使DNA與蛋白質分離的.只有在鹼裂解法提取質粒DNA,通過高鹽(醋酸鉀或醋酸鈉)及低pH(4.5左右)中和下,SDS會沉澱,SDS沉澱過程中使得變性的DNA共沉澱,而經過中和復性的質粒DNA則不會沉澱,再通過離心即可把質粒DNA與基因組DNA及蛋白質分離. RNase是RNA酶,能特定消化RNA,而不是蛋白質. 核酸分子(DNA或RNA)由於含有嘌吟環和嘧啶環的共軛雙鍵,在260 nm波長處有特異的紫外吸收峰,其吸收強度與核酸的濃度成正比,這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎.蛋白質分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質具有吸收紫外光的性質.吸收高峰在280nm 處,其吸光度(即光密度值)與蛋白質含量成正比.紫外分光光度法不但能確定核酸的濃度,還可通過測定260nm和280nm的紫外線吸收值的比值(A260/A280)估計核酸的純度,純的DNA製品的比值為1.8,RNA的比值為2.0, 若DNA高於1.8,則可能有RNA污染,低於1.8則有蛋白質污染. 現在試劑盒是很普及的,使用試劑盒基本上不再需要酚,氯仿等有機溶劑.國內很多廠家都有產,本人使用過廣州捷倍斯生物產的感覺就很不錯.

⑦ 蛋白質提取和分離過程中進行透析可除去溶液中的DNA。

透析用的是半透膜,只能去小分子,而DNA是大分子,透不過的。

⑧ 提取DNA時除去蛋白質的方法有哪些

酚氯仿反復抽提兩次,既可有效的去除蛋白質殘留。

⑨ 如何去除血清中的蛋白質,保留DNA

採用異丙醇,可以將蛋白變性,通過離心後,蛋白就會沉在下面的有機相,DNA在上面的水相。

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