A. 抗體fitc與hrp哪個適合做分選
這四個不是一碼事，HRP和AP是酶，二抗上掛了酶，要給相應的底物才能顯色，顯色方式可專以屬通過發熒光也可以不發熒光（例如給予ECL底物，其中的H2O2和魯米諾在HRP的作用下，能在黑暗中發出熒光；也可以給予雙氧水和DAB，反應產生棕色不溶於水的物質）；FITC為異硫氰酸熒光素，本身就是黃綠色熒光，二抗結合後可直接在熒光顯微鏡下觀察；生物素一般也是掛在二抗上的，利用卵白素分別連接生物素標記的第二抗體和生物標記的酶，由酶催化底物，生成終產物，這個終產物也是不溶於水的。
B. 熒光抗體FITC和488有什麼區別 我知道他們都是綠色熒光，不知道他們還有沒有其他的區別
你說的是用來標記抗體的FITC和Alexa 488的區別吧。
488隻是激發光（藍色激光）的波長。FITC和Alexa 488都能專在488 這個波長被激屬發而發出綠色激發光。
Alexa488的優點是光線強度大，光褪色少，pH耐受性好
C. 我用FITC標記抗體，不知道哪裡出了問題，不顯熒光、顯肉眼可見橙黃色光，有哪位專家給分析一下原因 謝謝
可能出問題的地方很多：抗原（你的樣品）、抗體、標記過程都可能出問題，你需要針對不同環節設置陽性對照一步一步檢測。
D. 如何在抗體上標記熒光 透析方法
透析標記法
此法適用於小量抗體的熒光素標記，標記簡便，非特異性染色較少。回
(1)試劑和材料答 試劑和材料同改良法。
(2)方法及步驟
①用0．025mol／L碳酸鹽緩沖液pH9．0，將欲標記免疫球蛋白稀釋成1％濃度，裝入透析袋中。
②用同一緩沖液將FITC配成0．1mg／ml的溶液，按10mg／ml球蛋白溶液體積的10倍，將FITC稀釋液盛於圓柱形容器內，並使透析袋浸沒於FITC液中。
③容器頂端蓋緊，底部放攪拌棒，在4~C電磁攪拌下透析標記24h。取出透析袋中標記液，即刻用SephadexG50凝膠過濾，去除游離熒光素，分裝，貯存於4℃中。
E. FITC怎樣標記抗體
FITC 標記抗體-Chadwick氏法
試劑：
抗體球蛋白溶液、異硫氰酸版熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳權汞；
材料：
離心機及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等；
方法與步驟：
1.
F. 熒光二抗標記用HRP、AP、FITC、生物素法各發什麼顏色熒光
這四個不是一碼事，HRP和AP是酶，二抗上掛了酶，要給相應的底物才能顯色，內顯色方式可以通過發容熒光也可以不發熒光（例如給予ECL底物，其中的H2O2和魯米諾在HRP的作用下，能在黑暗中發出熒光；也可以給予雙氧水和DAB，反應產生棕色不溶於水的物質）；FITC為異硫氰酸熒光素，本身就是黃綠色熒光，二抗結合後可直接在熒光顯微鏡下觀察；生物素一般也是掛在二抗上的，利用卵白素分別連接生物素標記的第二抗體和生物標記的酶，由酶催化底物，生成終產物，這個終產物也是不溶於水的。
G. DAPI和FITC標記的熒光抗體可以同時在熒光顯微鏡下觀察到嗎
DAPI和FITC標記的熒光抗體可以同時在熒光顯微鏡下觀察到
DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合，內因此DAPI對生物體而言，也被視容為一種毒性物質與致癌物。 CM-Dil是標記細胞膜的,而DAPI是標記細胞核的可以是活細胞,一人做兔子的膀胱腫瘤，他說在14天的時候很強，21天的時候比較弱，再長的時間就沒有檢測過。
H. 熒光素fitc標記抗體的方法 是什麼方法
免疫熒光技術是將熒光素如異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)與相應抗體（或抗原）以化學的方法結合，將熒游標記抗體（或抗原）與標本中相應的抗原結合形成熒游標記的抗體- 抗原復合物，用熒光顯微鏡觀察。在鏡下見到有熒光存在即推斷有抗原抗體復合物的存在，根據已 知的抗體（或抗原）即可推知另一個未知抗原（或抗體）的存在。
直接免疫熒光法直接免疫熒光法是利用熒光色素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合，以鑒定未知抗原。本法具有操作簡單、時程短、特異性高的優點，但也 存在缺點如不能檢查抗體，敏感性較差。
（1）在標本上滴加熒光素標記抗體，放入濕盒中。37℃溫育30min。
（2）PBS 沖洗後，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。
（3）PBS浸泡1～2min，風干。
（4）緩沖甘油封片。在熒光顯微鏡下觀察。
進行直接免疫熒光法時應注意：①溫育時一定要將玻片放在濕盒中，以防液體蒸發。②用PBS浸泡時應不斷振盪。
2. 間接免疫熒光法間接免疫熒光法以熒光素標記抗球蛋白抗體，抗體與相應抗原結合後，熒游標記的抗球蛋白抗體與已結合的抗體發生作用，從而推知抗原或抗體的 存在。間接熒光技術可以用已知的抗原檢測未知的抗體，也可用已知的抗體測出未知抗原。現以檢測流行性熱病毒抗體（IgM）為例介紹如下：
（1）將待測病人血清加至抗原片（流行性熱病毒感染的Vero-E6細胞片）上，每個稀釋 度加2孔，最後2孔加PBS做對照。將玻片放置濕盒中，37℃溫育 60min。取出玻片，棄去反應液，用PBS洗滌5min，風干。
（2）加入1∶40稀釋的FITC標記的羊抗人IgM，37℃溫育60min。取出玻片，按步驟2洗滌，風干。
（3）PBS甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。陽性結果：在細胞膜及細胞質中可見顆粒狀熒光顆粒，細胞核 呈紅色。
注意事項：溫育時將玻片放在濕盒中，以防液體蒸發。選擇低溫、乾燥、潔凈的環境風干。
I. FITC標記的二抗是綠熒光還是紅熒光
5mmol#47。
(3)抗原抄對照?
參考見解。因未免疫動物襲的血清中無特異性抗體:標本直接滴加二抗:標本加同種動物的未免疫血清:最好是同一視野在未用熒光激發下進行對照:如果你做的是石蠟切片免疫組化，看是否非特異性染色，應呈陰性反應(1)你的二抗是用FITC標記的，目的是使DNA變性;2N鹽酸需要使用，呈陰性反應，如果是用過氧化物酶做標記.0-9，為避免熒光分解，後者能使玻片透明，分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光，在加抗免疫球蛋白熒光抗體;L pH9，這個對照必須有。
做間接法免疫熒光染色，目的是看自發熒光，以PBS沖洗後，如何設置對照.5的碳酸氫鹽緩沖液;
(3)關於免疫酶染色。
(2)陰性對照，脫蠟後直接在熒光顯微鏡下觀察，就必須用3%H2O2以去除內源性過氧化物酶。
(1)空白對照，讓Br抗體能夠充分地與已經摻入的Br結合;
(2)封片最好用甘油加0
J. 如何用FITC熒光素標記細菌（細菌，熒光素標記
免疫熒光技術是將熒光素如異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)與相應抗體（或抗原）以化學的方法結合，將熒游標記抗體（或抗原）與標本中相應的抗原結合形成熒游標記的抗體- 抗原復合物，用熒光顯微鏡觀察。在鏡下見到有熒光存在即推斷有抗原抗體復合物的存在，根據已 知的抗體（或抗原）即可推知另一個未知抗原（或抗體）的存在。直接免疫熒光法直接免疫熒光法是利用熒光色素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合，以鑒定未知抗原。本法具有操作簡單、時程短、特異性高的優點，但也 存在缺點如不能檢查抗體，敏感性較差。（1）在標本上滴加熒光素標記抗體，放入濕盒中。37℃溫育30min。 （2）PBS 沖洗後，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。（3）PBS浸泡1～2min，風干。（4）緩沖甘油封片。在熒光顯微鏡下觀察。進行直接免疫熒光法時應注意：①溫育時一定要將玻片放在濕盒中，以防液體蒸發。②用PBS浸泡時應不斷振盪。 2. 間接免疫熒光法間接免疫熒光法以熒光素標記抗球蛋白抗體，抗體與相應抗原結合後，熒游標記的抗球蛋白抗體與已結合的抗體發生作用，從而推知抗原或抗體的 存在。間接熒光技術可以用已知的抗原檢測未知的抗體，也可用已知的抗體測出未知抗原。現以檢測流行性熱病毒抗體（IgM）為例介紹如下：（1）將待測病人血清加至抗原片（流行性熱病毒感染的Vero-E6細胞片）上，每個稀釋 度加2孔，最後2孔加PBS做對照。將玻片放置濕盒中，37℃溫育 60min。取出玻片，棄去反應液，用PBS洗滌5min，風干。（2）加入1∶40稀釋的FITC標記的羊抗人IgM，37℃溫育60min。取出玻片，按步驟2洗滌，風干。（3）PBS甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。陽性結果：在細胞膜及細胞質中可見顆粒狀熒光顆粒，細胞核 呈紅色。注意事項：溫育時將玻片放在濕盒中，以防液體蒸發。選擇低溫、乾燥、潔凈的環境風干。