『壹』 美國陶氏樹脂MR-575 LC NG的使用方法是什麼
陶氏離子交換樹脂的預處理方法:在大於樹脂層十厘米的乙醇里浸泡專大約五個小時屬,4--6小時,將乙醇或丙酮加入到試管中進行加水稀釋。樹脂進行裝柱完成後,將所有氣體排放出來。經過幾次強化再生以後,再取百分之五的氫氧化鈉進行處理等一系列工藝,最後用純水洗去乙醇,即可投入使用。與深 圳 恆 通 源聯絡,可以取得有關產品的種類選擇及最佳操作條件的建議.
『貳』 誰能告訴我一下反向液相色譜的工作原理嗎它與正向的有什麼區別嗎
高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。
1.液固色譜法 使用固體吸附劑,被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附-解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁,粒度5~10μm。適用於分離分子量200~1000的組分,大多數用於非離子型化合物,離子型化合物易產生拖尾。常用於分離同分異構體。
2.液液色譜法 使用將特定的液態物質塗於擔體表面,或化學鍵合於擔體表面而形成的固定相,分離原理是根據被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分配平衡過程。
塗布式固定相應具有良好的惰性;流動相必須預先用固定相飽和,以減少固定相從擔體表面流失;溫度的變化和不同批號流動相的區別常引起柱子的變化;另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由於塗布式固定相很難避免固定液流失,現在已很少採用。現在多採用的是化學鍵合固定相,如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。
正相色譜法 採用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環已烷),常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。
反相色譜法 一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用於分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛,據統計,它占整個HPLC應用的80%左右。
隨著柱填料的快速發展,反相色譜法的應用范圍逐漸擴大,現已應用於某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH值會使硅膠溶解,太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。
正相色譜法與反相色譜法比較表
正相色譜法 反相色譜法
固定相極性 高~中 中~低
流動相極性 低~中 中~高
組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出
從上表可看出,當極性為中等時正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線(如氨基鍵合固定相)。
3.離子交換色譜法 固定相是離子交換樹脂,常用苯乙烯與二乙烯交聯形成的聚合物骨架,在表面未端芳環上接上羧基、磺酸基(稱陽離子交換樹脂)或季氨基(陰離子交換樹脂)。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換,根據各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。
緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團作用強弱有關外,它還受流動相的pH值和離子強度影響。pH值可改變化合物的解離程度,進而影響其與固定相的作用。流動相的鹽濃度大,則離子強度高,不利於樣品的解離,導致樣品較快流出。
離子交換色譜法主要用於分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。
4.離子對色譜法 又稱偶離子色譜法,是液液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物後,在非極性固定相中溶解度增大,從而使其分離效果改善。主要用於分析離子強度大的酸鹼物質。
分析鹼性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽,如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種鹼性樣品形成很強的離子對。
分析酸性物質常用四丁基季銨鹽,如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。
離子對色譜法常用ODS柱(即C18),流動相為甲醇-水或乙腈-水,水中加入3~10 mmol/L的離子對試劑,在一定的pH值范圍內進行分離。被測組分保時間與離子對性質、濃度、流動相組成及其pH值、離子強度有關。
5.排阻色譜法 固定相是有一定孔徑的多孔性填料,流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔中,滯留時間長;大分子量的化合物不能進入孔中,直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用於分離高分子化合物,如組織提取物、多肽、蛋白質、核酸等。
色譜法的基本原理
利用樣品混合物中各組分理、化性質的差異,各組分程度不同的分配到互不相溶的兩相中。當兩相相對運動時,各組分在兩相中反復多次重新分配,結果使混合物得到分離。
兩相中,固定不動的一相稱固定相;移動的一相稱流動相。
分類:
根據流動相分—以氣體作流動相—氣相色譜——固定相為液體 氣-液色譜
固定相為固體 氣-固色譜
—以液體作流動相—液相色譜——固定相為液體 液-液色譜
固定相為固體 液-固色譜
—當流動相是在接近它的臨界溫度和壓力下工作的液體時——超臨界色譜
根據固定相的附著方式
—固定相裝在圓柱管中—柱色譜
—固定相塗敷在玻璃或金屬板上—薄膜色譜(平板色譜)
—液體固定相塗在紙上—紙色譜(平板色譜)
根據分離機理
—分配色譜—樣品組分的分配系數不同
—吸附色譜— 樣品組分對固定相表面吸附力不同
—體積排阻色譜—利用固定相孔徑不同,把樣品組分按分子大小分開
—離子交換色譜—不同離子與固定相商相反電荷間的作用力大小不同
根據極性
—流動相極性>固定相極性-反相色譜
—流動相極性<固定相極性-正相色譜
氣相色譜只適合分析較易揮發、且化學性質穩定的有機化合物,而HPLC則適合於分析那些用氣相色譜難以分析的物質,如揮發性差、極性強、具有生物活性、熱穩定性差的物質。所以,HPLC的應用范圍已經遠遠超過氣相色譜。
一、吸附色譜(adsorption chromatography)
又叫液固色譜法:流動相是液體,固定相是固體。
分離原理:固定相是固體吸附劑,吸附劑是多孔性微粒物質表面有吸附中心。樣品組分與流動相競爭吸附中 心。各組分的吸附能力不同,使組分在固定相中產生保留時間不同和實現分離。
固定相: 固定相通常是強極性的硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚醯胺等固體吸附劑。活性硅膠最常用。
流動相: 弱極性有機溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物,如正構烷烴(己烷、戊烷、庚烷等)、二氯甲 烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。
應用: 對於極性,結構異構體分離和族分離仍是最有效的方法,如農葯異構體分離、石油中烷、烯、芳烴的 分離。 缺點是容易產生不對稱峰和拖尾現象。
二、分配色譜
原理: 固定液機械的吸附在惰性載體上,樣品分子依據他們在流動相和固定相間的溶解度不同,分別進入兩相分配而實現分離。
固定相:將一種極性或非極性固定液吸附在惰性固相載體上。如全多孔微粒硅膠吸附劑。
根據極性不同分類:正相分配色譜—固定相載體上塗布的是極性固定液;
流動相是非極性溶劑;
可分立極性較強的水溶性樣品;
弱極性組分先洗脫出來。
反相分配色譜—固定相載體上塗布的是非極性或弱極性固定液;
流動相是極性溶劑;
強極性組分先洗脫出來。
液-液分配色譜固定相中的固定液體往往容易溶解到流動相中去,所以重現性很差,且不能進行梯度洗脫,已經不大為人們所採用。
三、鍵合相色譜
考慮分配色譜法中固定液的缺點,因此將各種不同的有機關能團通過化學反應共價結合到固定相惰性載體上,固定相就不會溶解到流動相中去了。
鍵合固定相優點:○ 對極性有機溶劑有良好的化學穩定性
○使色譜柱的柱效高、壽命長
○實驗重現性好
○幾乎適於各種類相的有機化合物的分離,尤其是k』寬范圍的樣品
○可以梯度洗脫
根據極性不同分類:正相鍵合相色譜—固定相極性>流動相極性
固定相:二醇基、醚基、氰基、氨基等極性基團的有機分子。
適於分離脂榮、水溶性的極性、強極性化合物
反相鍵合相色譜—固定相極性<流動相極性
固定相:烷基、苯基等非極性有機分子。如最常用的ODS柱或C18柱就 是最典型的代表,其極性很小。
適於分離非機性、弱極性離子型樣品,
是當今液相色譜的最主要分離模式。
正相HPLC(normal phase HPLC):
是由極性固定相和非極性(或弱極性)流動相所組成的HPLC體系。其代表性的固定相是改性硅膠、氰基柱等,代表性的流動相是正己烷。吸附色譜也屬正相HPLC。
反相HPLC(reversed phase HPLC):
由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系,與正相HPLC體系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基鍵合硅膠(ODS柱,Octa Decyltrichloro Silane),代表性的流動相是甲醇和乙腈。
四、體積排阻色譜(SEC,size exclusion chromatograghy)
(又稱凝膠色譜和分子篩色譜)
原理: 以多孔凝膠(如葡萄糖,瓊脂糖,硅膠,聚丙烯醯胺等)作固定相,依據樣品分子量大小達到分離目 的。大分子不進入凝膠孔洞,沿多孔凝膠膠粒間隙流出,先被洗脫;小分子進入大部分凝膠孔洞, 在柱中被強滯留,後被洗脫。
根據樣品性質分類:凝膠過濾(GFC)—用於分析水溶性樣品,如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。
凝膠滲透(GPC)—用於分析脂溶性樣品,如測定高聚物的分子量。
SEC主要依據分子量大小進行分離,因此與樣品、流動相間的相互作用無關。因此不採用改變流動相的組成來改善分離度。
五、離子交換色譜
(ion exchange chromatography, IEC)
分離原理:使用表面有離子交換基團的離子交換劑作為固定相。帶負電荷的交換基團(如磺酸基和羧酸基)可以用於陽離子的分離;帶正電荷的交換基團(如季胺鹽)可以用於陰離子的分離。不同離子與交換基的作用力大小不同,在樹脂中的保留時間長短不同,從而被相互分離。
『叄』 為提高蛋白質鹽析分離效率,應採取哪些措施
採取何種分離純化方法要由所提取的組織材料、所要提取物質的性質決定。對蛋白質、多肽提取分離常用的方法包括:鹽析法、超濾法、凝膠過濾法、等電點沉澱法、離子交換層析、親和層析、吸附層析、逆流分溶、酶解法等。這些方法常常組合到一起對特定的物質進行分離純化,同時上述這些方法也是蛋白、多肽類物質分析中常用的手段,如層析、叫泳等。
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1.1 高效液相色譜(HPLC)
HPLC 的出現為肽類物質的分離提供了有利的方法手段,因為蛋白質、多肽的HPLC 應用與其它化合物相比,在適宜的色譜條件下不僅可以在短時間內完成分離目的,更重要的是HPLC 能在制備規模上生產具有生物活性的多肽。因此在尋找多肽類物質分離制備的最佳條件上,不少學者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何選擇固定相材料、洗脫液種類、如何分析測定都是目前研究的內容。
1.1.1 反相高效液相色譜(RP-HPLC)
結果與保留值之間的關系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結構的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數,Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質與結構進行分析,得出了不同氨基酸組成對保留系數影響的關系,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,可減少在柱上的保留時間;在10~60 氨基酸組成的肽中,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時間,而含5~25 個氨基酸的小肽中,非極性氨基酸增加可延長在柱上的保留時間。
同時有不少文獻報道了肽鏈長度、氨基酸組成、溫度等條件對保留情況的影響,並利用計算機處理分析得到每種多肽的分離提取的最佳條件。
肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據蛋白質、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點,使用專一性較強的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內切酶(endopeptidase)]作用於特殊的肽鏈位點將多肽裂解成小片斷,通過一定的分離檢測手段形成特徵性指紋圖譜,肽圖分析對多肽結構研究合特性鑒別具有重要意義。
利用胰蛋白酶能特意性作用於Arg 和Lys 羧基端的肽鏈的性質,通過RP-HPLC 法採用C18 柱檢測了重組人生長激素特徵性胰肽圖譜。同時胰島素的肽圖經V8 酶專一裂解也製得,並可鑒別僅相差一個氨基酸殘疾的不同種屬來源的胰島素。人類腫瘤壞死因子的單克隆抗體結構也應用酶解法及在線分析技術確定了肽圖,便於鑒定分析。此項技術已經在新葯開發中得到廣泛應用。
1.1.2 疏水作用色譜(Hydrophobic interaction chromatogrphy,HIC)
HIC 是利用多肽中含有疏水基因,可與固定相之間產生疏水作用而達到分離分析的目的,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點。利用GIC 分離生產激素(GH)產品的結構與活性比EP-GPLC 分離的要穩定,活性較穩定。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點,將大腸桿菌表達出的經鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ。通過HIC 柱純化、折疊出高生物活性的產品。不同人尿表皮生長因子(EGF)也利用HIC 純化到了,均具有良好的生物活性。HIC 可將未經離子交換柱的樣品純化。而RP-HPLC 則不能達到這一要求。
1.1.3 分子排阻色譜(Sizs-Exclusion chromatogrphy,SEC)
SEC 是利用多肽分子大小、形狀差異來分離純化多肽物質,特別對一些較大的聚集態的分子更為方便,如人重組生長激素(hgH)的分離,不同結構、構型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,從而可分離不同構型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,此PEC 具有半衰期長、作用強的特點。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析。
1.1.4 離子交換色譜(Iron-Exchange chromatography,IEXC)
IEXC 可在中性條件下,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽。其可分為陽離子柱與陰離子柱兩大類,還有一些新型樹脂,如大孔型樹脂、均孔型樹脂、離子交換纖維素、葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠樹脂等。在多肽類物質的分離分析研究中,對多肽的性質、洗脫劑、洗脫條件的研究較多,不同的多肽分離條件有所不同,特別是洗脫劑的離子強度、鹽濃度等對純化影響較大。Wu 等報道利用離子交換柱層析法,探討分離牛碳酸酐異構體和牛血清白蛋白、雞血清白蛋白酶的提取條件,獲得了有價值的數據供今後此類物質分離研究。
1.1.5 膜蛋白色譜(Chromatography of Membrane Protein,CMP)
CMP+分離強蔬水性蛋白、多肽混合物的層析系統,一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白後形成SDS-融膜蛋白,並由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(P-端),又具有陽離子鈣(C-端),與固定相結合主要決定於膜蛋白的大小、SDS 結合量有關。利用原子散射法研究cAMP的分離機制發現,樣品與SDS 結合後在離子交換柱上存在SDS 分子、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,從而達到分級分離的目的。
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『肆』 色譜法分幾種
2. 液相色譜法 (liquid chromatography 簡稱 LC)用液體作流動相的色譜法。 3. 超臨界流體色譜法 (SFC) 用超臨界狀態的流體作流動相的色譜法。 超臨界狀態的流體不是一般的氣體或流體 , 而是臨界壓力和臨界溫度以上高度壓縮的氣體 , 其密度比一般氣體大得多而與液體相似 , 故又稱為 「 高密度氣相色譜法 」 (二)按分離原理分 1. 吸附色譜法( adsorption chromatography ): 根據吸附劑表面對不同組分物理吸附能力的強弱差異進行分離的方法。 如:氣一固色譜法、液-固色譜法——吸附色譜 2. 分配色譜法 (partition chromatography ): 根據不同組分在固定相中的溶解能力和在兩相間分配系數的差異進行分離的方法。 如:氣-液色譜法、液-液色譜法——分配色譜 3. 離子交換色譜法(ion exchange chromatography ) 根據不同組分離子對固定相親和力的差異進行分離的方法。 4. 排阻色譜法( size exclusion chromatography): 又稱凝膠色譜法 (gel chromatography ), 根據不同組分的分子體積大小的差異進行分離的方法。 其中:以水溶液作流動相的稱為凝膠過濾色譜法 ;以有機溶劑作流動相的稱為凝膠滲透色譜法。 5. 親合色譜法 (affinity chromatography) 利用不同組分與固定相共價鍵合的高專屬反應進行分離的方法。 (三)按固定相的形式 1. 柱色譜法(column chromatography ): 固定相裝在柱中 , 試樣沿著一個方向移動而進行分離。 包括 填充柱色譜法:固定相填充滿玻璃管和金屬管中 開管柱色譜法:固定相固定在細管內壁(毛細管柱色譜法) 2. 平板色譜法 (planer chromatography ): 固定相呈平面狀的色譜法。 包括 紙色譜法: 以吸附水分的濾紙作固定相; 薄層色譜法:以塗敷在玻璃板上的吸附劑作固定相。|||色譜法(又稱層析法)根據其分離原理可分為:吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等。吸附色譜法是利用被分離物質在吸附劑上被吸附能力的不同,用溶劑或氣體洗脫使組分分離;常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚醯胺等有吸附活性的物質。分配色譜是利用被分離物質在兩相中分配系數的不同使組分分離;其中一相被塗布或鍵合在固體載體上,稱為固定相,另一相為液體或氣體,稱為流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質在離子交換樹脂上交換能力的不同使組分分離;常用的有不同強度的陽、陰離子交換樹脂,流動相為水或含有機溶劑的緩沖液。分子排阻色譜法又稱凝膠色譜法,是利用被分離物質分子量大小的不同導致在填料上滲透程度不同使組分分離;常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等,根據固定相和供試品的性質選用水或有機溶劑作為流動相。 色譜法又可根據分離方法分為:紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。所用溶劑應與供試品不起化學反應,純度要求較高。分析時的溫度,除氣相色譜法或另有規定外,系指在室溫操作。分離後各成分的檢出,應採用各品種項下所規定的方法。採用紙色譜法、薄層色譜法或柱色譜法分離有色物質時,可根據其色帶進行區分,分離無色物質時,可在短波(254nm)或長波(365nm)紫外光燈下檢視,其中紙色譜或薄層色譜也可噴以顯色劑使之顯色,或在薄層色譜中用加有熒光物質的薄層硅膠,採用熒光猝滅法檢視;柱色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法可用接於色譜柱出口處的各種檢測器檢測;柱色譜法還可分部收集流出液後用適宜方法測定。|||氣相色譜法系採用氣體為流動相(載氣)流經裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。物質或其衍生物氣化後,被載氣帶入色譜柱進行分離,各組分先後進入檢測器,用記錄儀、積分儀或數據處理系統記錄色譜信號。 高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,經進樣閥注入供試品,由流動相帶入柱內,在柱內各成分被分離後,依次進入檢測器,色譜信號由記錄儀或積分儀記錄。 氣相色譜和液相色譜各有其優缺點和應用范圍: 氣相色譜採用氣體作為流動相,由於物質在氣相中的流速比在液相中快得多,氣體又比液體的滲透性強,因而相比液相色譜,氣相色譜柱阻力小,可以採用長柱,例如毛細管柱,所以分離效率高。 由於氣相色譜毋需使用有機溶劑和價格昂貴的高壓泵,因此氣相色譜儀的價格和運行費用較低,且不易出故障。 能和氣相色譜分離相匹配的檢測器種類很多,因而可用於各種物質的分離與檢測。特別是當使用質譜儀作為檢測器時,氣相色譜很容易把分離分析與定性鑒定結合起來,成為未知物質剖析的有力工具。 氣相色譜不能分析在柱工作溫度下不汽化的組分,例如,各種離子狀態的化合物和許多高分子化合物 氣相色譜也不能分析在高溫下不穩定的化合物,例如蛋白質等。 液相色譜則不能分析在色譜條件下為氣體的物質,但卻能分離不揮發、在某溶劑中具有一定溶解度的化合物,例如高分子化合物、各種離子型化合物以及受熱不穩定的化合物(蛋白質、核酸及其它生化物質)。|||色譜法分類 (一)按兩相物理狀態分 1. 氣相色譜法 (gas chromatography 簡稱 GC)用氣體作流動相的色譜法。 2. 液相色譜法 (liquid chromatography 簡稱 LC)用液體作流動相的色譜法。 3. 超臨界流體色譜法 (SFC) 用超臨界狀態的流體作流動相的色譜法。 超臨界狀態的流體不是一般的氣體或流體 , 而是臨界壓力和臨界溫度以上高度壓縮的氣體 , 其密度比一般氣體大得多而與液體相似 , 故又稱為 「 高密度氣相色譜法 」(二)按分離原理分 1. 吸附色譜法( adsorption chromatography ): 根據吸附劑表面對不同組分物理吸附能力的強弱差異進行分離的方法。 如:氣一固色譜法、液-固色譜法——吸附色譜 2. 分配色譜法 (partition chromatography ): 根據不同組分在固定相中的溶解能力和在兩相間分配系數的差異進行分離的方法。 如:氣-液色譜法、液-液色譜法——分配色譜 3. 離子交換色譜法(ion exchange chromatography ) 根據不同組分離子對固定相親和力的差異進行分離的方法。 4. 排阻色譜法( size exclusion chromatography): 又稱凝膠色譜法 (gel chromatography ), 根據不同組分的分子體積大小的差異進行分離的方法。 其中:以水溶液作流動相的稱為凝膠過濾色譜法 ;以有機溶劑作流動相的稱為凝膠滲透色譜法。 5. 親合色譜法 (affinity chromatography) 利用不同組分與固定相共價鍵合的高專屬反應進行分離的方法。 (三)按固定相的形式 1. 柱色譜法(column chromatography ): 固定相裝在柱中 , 試樣沿著一個方向移動而進行分離。 包括 填充柱色譜法:固定相填充滿玻璃管和金屬管中 開管柱色譜法:固定相固定在細管內壁(毛細管柱色譜法) 2. 平板色譜法 (planer chromatography ): 固定相呈平面狀的色譜法。 包括 紙色譜法: 以吸附水分的濾紙作固定相; 薄層色譜法:以塗敷在玻璃板上的吸附劑作固定相。|||還有一種現在常用的色譜即:高速逆流色譜,它屬於液-液分配色譜。利用樣品中各組分在兩相溶劑間分配比的差異,進行分離。它是不用固態載體的全液態的液-液分配色譜技術.優點:高效提純,能將樣品中有效成分提純至98%以上理論回收率為100% ,不存在樣品的不可逆吸附,極大地避免了樣品的變性問題操作簡單,無需太多樣品前處理等。相對於HPLC,溶質的分離原理僅於分配有關,避免了HPLC柱子與柱子之間的重現性差的現象。現在廣泛用於天然產物的制備分離。相關書籍參考《高速逆流色譜分離技術及應用》曹學麗 編著 化學工業出版社|||一)按兩相所處的狀態分類 液體作為流動相,稱為「液相色譜」(liquid chromatograp-hy);用氣體作為流動相,稱為「氣相色譜」(gas chromatogr-aphy)。固定相也有兩種狀態,以固體吸附劑作為固定相和以附載在固體上的液體作為固定相,所以層析法按兩相所處的狀態可以分為: 液-固色譜(liquid-solid chromatography)液-液色譜(liquid-liquid chromatography) 氣-固色譜(gas-solid chromatography) 氣-液色譜(gas-liquid chromatography)(二)按層析過程的機理分類 吸附層析(adsorption chromatography )利用吸附劑表面對不同組分吸附性能的差異,達到分離鑒定的目的。分配層析(partition chromatography)利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(或溶解度)不同,而使之分離的方法。 離子交換層析(ion-exchange chromatography )利用不同組分對離子交換劑親和力的不同,而進行分離的方法。凝膠層析(gelchromatography)利用某些凝膠對於不同組分因分子大小不同而阻滯作用不同的差異,進行分離的技術。 (三)按操作形式不同分類 柱層析(colum chromatography)將固定相裝於柱內,使樣品沿一個方向移動而達到分離。紙層析(paper chrmatography)用濾紙作液體的載體(擔體support),點樣後,用流動相展開,以達到分離鑒定的目的。薄層層析(thin layper chromatography)將適當粒度的吸附劑鋪成薄層,以紙層析類似的方法進行物質的分離和鑒定。 >|||色譜法根據其分離原理可分為:吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等 色譜法又可根據分離方法分為:紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。
『伍』 怎樣去除水中 的硫酸鹽
1、如果水量較少:可採用化學方法,加入鋇鹽(如氯化鋇),使硫酸根變成硫酸鋇沉澱,然後過濾除去。
2、如果水量較多:可採用離子交換器了,通過一台陰離子交換器+一台陽離子交換器串聯在供水迴路中,即可達到目的。
Ba^(2+) + (SO4)^(2-)=(BaSO4)↓
陰離子交換器 又叫陰床,作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離子。
陽離子交換器 又叫陽床,根據其樹脂再生所用葯劑可分為氫型和鈉型;鈉離子交換器即軟化器是用於去除水中鈣離子、鎂離子,製取軟化水的離子交換器。
幾種重要硫酸鹽
硫酸鈣
自然界中的硫酸鈣以石膏礦的形式存在。含有兩個結晶水的硫酸鈣(CaSO4·2H2O)叫做石膏(也叫生石膏)。將石膏加熱到150℃,就會失去大部分結晶水而變成熟石膏(2CaSO4·H2O)。熟石膏與水混合成糊狀後會很快凝固,轉化為堅硬的生石膏。
利用石膏的這一性質,人們常利用它製作各種模型和醫療上用的石膏綳帶。在水泥生產中,可用石膏調節水泥的凝固時間。在石膏資源豐富的地方可以用它來制硫酸。
硫酸鋇
天然的硫酸鋇稱為重晶石,它是製取其他鋇鹽的重要原料。硫酸鋇不容易被X射線透過,在醫療上可用作檢查腸胃的內服葯劑,俗稱「鋇餐」。硫酸鋇還可以用作白色顏料,並可做高檔油漆、油墨、造紙、塑料、橡膠的原料及填充劑。
硫酸亞鐵
硫酸亞鐵的結晶水合物俗稱綠礬(FeSO4·7H2O)。在醫療上硫酸亞鐵可用於生產防治缺鐵性貧血的葯劑,在工業上硫酸亞鐵還是生產鐵系列凈水劑和顏料氧化紅鐵(主要成分為Fe2O3)的原料。