1. 蛋白樹脂是什麼化學性質穩定嗎
蛋白樹脂通常是指受熱後有軟化或熔融范圍,軟化時在外力作用下有流動傾內向,常溫下是固態、半固容態,有時也可以是液態的有機聚合物。嚴格來講,樹脂是一種酚醛結構的化學物質,種類有很多,廣泛應用於我們的輕工業和重工業當中,我們日常的生活當中也經常時候到,比如塑料、樹脂眼鏡,塗料、松香。
樹脂有天然樹脂和合成樹脂之分。天然樹脂是指由自然界中動植物分泌物所得的無定形有機物質,如松香、琥珀、蟲膠等。合成樹脂是指由簡單有機物經化學合成或某些天然產物經化學反應而得到的樹脂產物。
化學性質很穩定。 希望對你有所幫助
2. 呃,為什麼載體蛋白的數量會限制協助擴散的速率,讓運輸速率不再隨濃度增大而增大
因為載體蛋白的數量限制
3. 做Ni-NTA樹脂純化蛋白時時沒有層析柱怎麼辦可以用其他的什麼東西代替柱子嗎
(2) 與三價金屬離子螯合劑亞氨基二乙酸製成的Ni-IDA-瓊脂糖相比,Ni-NTA-瓊脂糖的非特異性吸附內明顯減少,可讓使用容者獲得更高純度的目標蛋白
(3) 支持變性包涵體蛋白的柱上復性,起到分離、復性同時進行的效果
(4) 可耐受溶液中更高濃度的還原試劑(β巰基乙醇最高可用到20mM)。
(5) 瓊脂糖基質在pH 3-12的范圍內保持穩定,可以耐受反復的在位清洗(CIP)。
(7) 可以反復使用和再生5-10次. 基質: 帶有Ni2+高度交聯的6%瓊脂糖; 平均顆粒大小: 90um; 動態結合載量: Breakthrough capacity at 10%,150 cm/h:大約40 mg histidine-tagged 蛋白質/ml 填料; 金屬離子載量: 大約 15 µmol Ni2+/ml 填料; 化學穩定性: 40°C 放置一周: 0.01 M HCl, 0.1 M NaOH 12 h: 1 M NaOH, 70% 乙酸30 min: 30% 2-異丙醇1 h: 2% SDSpH穩定性:3-12 Store:2-8°C
4. 為什麼細胞膜上的載體蛋白數量和大小會影響到它的選擇透過性
細胞在協助擴散和主動運輸中;承擔著運輸蛋白質的作用,所以載體蛋白數量就決定著選擇透過性
5. 做ni柱蛋白純化時加樹脂0.5ml可以么
Ni離氫氧根離反應氫氧化鎳沉澱所Ni柱需要先用EDTA螯合掉鎳離再用氫氧化鈉沖洗避免沉澱物質堵塞柱
另外羅氏產 cOmplete His 直接用NaOH沖洗
6. 蛋白質含量最高的脂蛋白是
正確答案:E
解析:脂蛋白是由脂質和載脂蛋白構成的一類物質,密度由其所含的脂質和載脂蛋白所決定
。HDL中的載脂蛋白含量近50%,蛋白質含量最高,密度最大
。因此本題最佳答案是E
。
7. 哪種大孔吸附樹脂能除去蛋白質和色素
我要做一個有關檢測菠菜蛋白質含量的測定,採用雙縮脲法(有722N分光光...
答:可以用凝回膠答啊,凝膠除色素的效果還是很不錯的 還有你可以用一種大孔吸附樹脂對葉綠素的去除能里很強。這么會用到菠菜做蛋白質實驗的,菠菜一般應該不用呀。
8. 您好,我還有個問題,克隆載體表達蛋白量很小,為什麼很多實驗還是採用,克隆載體與基因片段重組....
轉基因動物模型是聯系分子、細胞水平研究和整體動物研究的橋梁自1980年Gordon首次採用原核顯微注射開展動物轉基因研究以來,已有十多種主要的轉基因動物製作方法,如原核顯微注射法、逆轉錄病毒侵染法、精子介導法、胚胎幹細胞法,體細胞核移植法等這些轉基因動物制備方法各有優缺點原核顯微注射法製作轉基因動物DNA整合效率低,整合位點不定,技術難度大,應用於高等哺乳動物時的效率很低精子介導基因轉移技術技術存在隨機性和不確定性胚胎幹細胞法制備的轉基因首建動物一般是嵌合體,不易實現外源基因的自然繁殖傳代,且建立幹細胞系的難度較大,應用受到限制體細胞核移植法操作難度大,且外源基因的表達與否受整合位點附近基因的影響 相對而言,慢病毒侵染法在可操作性、胚胎發育率、移植妊娠率、目的基因整合效率、目的基因表達率、陽性個體的選育等方面比上述幾種技術均有顯著的優勢1976年,Jaenish首次用逆轉錄病毒Retroviruses感染胚胎製作轉基因動物獲得成功逆轉錄病毒的RNA進入細胞後,逆轉錄成DNA前病毒,利用逆轉錄病毒的整合酶及其特異的末端核苷酸序列,將DNA前病毒整合到染色體上,從而將其攜帶的外源基因也插入到染色體上慢病毒lentivirus屬逆轉錄病毒的亞科,具有逆轉錄病毒的基本結構gag、pol和env,不同之處在於慢病毒包含4個輔助基因,vif、vpr、nef、vpu和2個調節基因tat和rev其中調節基因tat和rev分別編碼兩個反式激活因子Tat蛋白和Rev蛋白,Tat蛋白在慢病毒基因組復制和轉錄延伸過程中發揮重要作用,Rev蛋白則可促使其基因的表達由早期向晚期轉化HIV-1DNA前病毒的主要結構基因及其排列形式與其它逆轉錄病毒相同,為5LTR-gag-pro-pol-env-3LTR,其中gag基因編碼病毒的核心蛋白,pol基因編碼病毒復制所需的酶類,env基因編碼病毒的包膜糖蛋白,pro基因則編碼切割蛋白前體所需的蛋白酶慢病毒載體Lentiviralvector,LV廣泛用於體外細胞的轉染和基因治療的研究目前用LV成功轉染的細胞有神經細胞、視網膜感光細胞、肌細胞,肝細胞、早期胚胎細胞等,用LV製作的轉基因動物有小鼠、大鼠、豬,牛等LV的優勢在於1轉染效率高,能夠感染分裂期和靜息期細胞,能轉染多種組織2整合到宿主基因組中的目的基因能持久穩定的表達,不易形成嵌合體,一般能自然繁殖傳代3LV經改構後,不在宿主細胞內增殖,也不會導致寄主細胞的死亡,免疫源性極小,生物安全性高LV用於轉基因動物模型制備也有一定的局限性1一是制備難度較大,不易獲得高滴度、高純度的病毒2LV在宿主基因組上的整合一般是隨機的,可能幹擾插入位點及其附近基因表達3雖可通過控制病毒的滴度來調節轉入基因的拷貝數,但是不容易實現整合拷貝數的精確控制4攜帶目的基因的容量較小<10kb,當需要插入大片段DNA時,會限制制備LV的滴度5LV前病毒DNA在宿主基因上是多位點隨機整合,當轉基因啟動子的表達需要多拷貝時應選擇原核顯微注射法 LV技術與siRNA結合使用,可以相對容易地在轉基因動物細胞中對特定基因實現RNAi效應RNAi效應的核心是一段20-25nt的與靶基因mRNA互補或不完全互補的短RNA,通過它和靶基因mRNA鹼基配對引導沉默復合體RISC降解mRNA或阻礙其翻譯要實現表達如此短的一段siRNA片段,轉基因載體的長度可以控制在很合適的范圍內4~5kb,對插入目的基因容量有限<10kb的LV來說十分理想,因而LV在制備RNA干擾轉基因動物模型上的優勢更加明顯 本實驗通過慢病毒介導高效地研製了eGFP轉基因小鼠,建立了慢病毒介導的轉基因小鼠制備技術體系,並利用該技術制備了樹突狀細胞DentrenticCells,DCs特異性干擾Rab32基因表達的RNA干擾小鼠模型,進一步驗證了利用該技術體系在小鼠樹突狀細胞實現對特定基因進行抑制的可行性與有效性 研究內容及結果 在第一部分,本課題開展了通過慢病毒載體介導、結合卵周隙顯微注射、以eGFP為報告基因的轉基因小鼠制備方法學研究,探討了通過卵周隙顯微注射重組慢病毒對胚胎發育的影響,以及通過此法研製轉基因小鼠的效率結果1建立並優化了三質粒慢病毒包裝系統,獲得了滴度達到1×109TUml以上的注射用重組慢病毒通過卵周隙顯微注射,胚胎的2-細胞卵裂率為81.8%11891453,與無處理組無顯著差異在2-細胞期,每一視野下胚胎陽性率>90%11781189,說明包裝的病毒成功並高效地轉染小鼠胚胎2將注射後發育至2-細胞的胚胎通過輸卵管壺腹部穿刺移植法移植後,假孕母鼠妊娠率為42.8%1228,很大程度上避免了傘部移植法出血導致的胚胎存活率下降,提高了移植成功率3eGFP首建鼠陽性率為60.8%73120、轉基因小鼠的總體研製效率轉基因小鼠數注射胚胎數為5.0%731453,說明卵周隙顯微注射對胚胎2-細胞卵裂率幾乎無影響,表明慢病毒載體輔以卵周隙顯微注射法製作轉基因動物高效可行4將eGFP陽性首建小鼠採用近交方法建系,至第6個世代,熒光觀察發現超排獲得的胚胎全部呈eGFP陽性,且新生鼠陽性率為100%,說明eGFP基因可以通過種系傳代 在第二部分,採用了基於siRNASmallinterferingRNA的RNA干擾策略、利用第一部分建立的轉基因平台製作轉基因小鼠模型轉基因RNA干擾載體FcdGW-Rab32的表達產物siRNA-Rab32可在小鼠樹突狀細胞dendriticcells,DCs中特異性干擾Rab32基因,報告基因為eGFP由於DCs中並沒有熒光素酶基因,構建了在DCs中特異性干擾熒光素酶基因的載體質粒FcdGW-FF3作為對照結果1FcdGW-Rab32和FcdGW-FF3組的2-細胞卵裂率分別為79.8%408511、75.8%317418,受體妊娠率分別為35.7%514、33.3%412,移植胚胎體內存活率分別為2.7%11408、2.8%9317,轉基因首建鼠陽性率分別為54.5%611、66.7%69,轉基因小鼠總體研製效率分別為1.2%6511、1.4%6418,除胚胎體內存活率和總體研製效率外,其他數據與第一部分的結果相當2經PCR檢測和耳廓皮膚真皮層DCs熒光觀察結果表明,FcdGW-Rab32和FcdGW-FF3轉基因小鼠已被建立,目的基因已經正確整合至轉基因小鼠基因組中,且能通過種系傳代3流式細胞儀檢測BMDC表明,eGFP只在小鼠的DCs內特異性表達,說明我們所採用的CD11c啟動子具備較好的定向表達能力4通過相對熒光定量,FQ-PCR對DCs的Rab32基因表達情況進行檢測,結果顯示Rab32基因的表達下調78.3%,特異性地實現了對DCs的Rab32基因產生Geneknock-down的干擾效應 研究結論 1.本課題成功建立了以慢病毒介導、結合卵周隙顯微注射、以eGFP為報告基因的轉基因小鼠制備技術體系,獲得了可穩定傳代的eGFP轉基因小鼠,證實該技術體系有較高的轉基因效率 2.將慢病毒介導的轉基因動物技術與RNAi技術相結合,首次建立了在小鼠DCs特異性抑制Rab32基因的RNA干擾小鼠模型,驗證了該轉基因技術體系的在制備轉基因小鼠模型的有效性,提示此技術路線在研究樹突狀細胞抗原交叉遞呈的調控方面有一定的應用價值
9. D213大孔離子交換樹脂能吸附多大分子量的蛋白
???你吸附時間不夠吧
10. 含有共價偶聯的ATP的樹脂經常被用來純化的蛋白質是什麼
能與ATP結合的蛋白,如激酶之類。