蒸餾檢測氮含量檢測原理

⑴ 用常量凱氏氮法測蛋白質含量，蒸餾時暴沸現象的解決辦法

這是因為沸石表面空氣已逃逸，故可以考慮用旋轉磁子，可以製造出足夠多的空氣，防止暴沸。

⑵ 試述用凱氏定氮法測定麵粉中蛋白質含量的原理，簡要步驟和計算公式。

測定蛋白質的方法可分為兩大類：一類是利用蛋白質的物理化學性質來推算，如密度、折射率、紫外吸收、熒光性等；另一類是利用化學方法來計算，如定氮、雙縮脲反應、染料結合反應、酚試劑反應等

主要測定方法有：雙縮脲法、染料結合法、酚試劑法、紫外分光光度法、水揚酸比色法、折光法、旋光法、近紅外光譜法.
目前蛋白質測定最常用的方法是凱氏定氮法，是通過測總氮量來確定蛋白質含量的方法。
凱氏定氮法是通過測出樣品中的總含氮量再乘以相應的蛋白質系數而求出蛋白質的含量,此法的結果稱為粗蛋白質含量：由於樣品中含有少量非蛋白質含氮化合物，如核酸、生物鹼、含氮類脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白質的含氮化合物.凱氏定氮法是測定總有機氮量較為准確、操作較為簡單的方法之一，可用於所有動、植物食品的分析及各種加工食品的分析，可同時測定多個樣品，故國內外應用較為普遍，是個經典分析方法[6]。至今仍被作為標准檢驗方法.此法可應用於各類食品中蛋白質含量測定
凱氏定氮法可分為全量法、微量法及經改進後的改良凱氏定氮法目前通常以硫酸銅作催化劑的常量、半微量、微量凱氏定氮法樣品質量及試劑用量較少，且有一套微量凱氏定氮器。在凱氏法改良中主要的問題是，氮化合物中氮的完全氨化問題及縮短時間、簡化操作的問題，即分解試樣所用的催化劑。常量改良凱氏定氮法在催化劑中增加了二氧化鈦[4].
在理化實驗室,檢驗食品中蛋白質的含量通常用微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法.接下來以大量的試驗來比較微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法的精確度的大小.
1.材料與方法：
1.1試驗材料
1.1.1試驗樣品
麵粉
1.1.2試驗葯品和試劑
所有試劑均為分析純；水為蒸餾水或同等純度的水。
硫酸銅；
硫酸鉀；
濃硫酸；
40％氫氧化鈉溶液：稱取40g氫氧化鈉溶於60mL蒸餾水中；
4％硼酸溶液：稱取4g硼酸溶於蒸餾水中稀釋至lOOmL；
0．1mol／L鹽酸標准滴定溶液；
甲基紅次甲基藍混合指示液：將次甲基藍乙醇溶液(1g／L)與甲基紅乙醇溶液(1g／L)按1+2體積比混合。
1.1.3儀器和設備：
實驗室常規儀器及下列各項：
凱氏燒瓶：500mL；
可調式電爐；蒸汽蒸餾裝置；
鉸肉機：
篦孔徑不超過4nm；
組織搗碎機；
粉碎機；
研缽：玻璃或瓷質；
化學消化器，
凱氏定氮儀，
空氣濾過器
1.2試驗方法
1.2.1微量凱氏定氮法
微量凱氏定氮法的原理
樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。然後取消化液的1/10加鹼蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收後再以標准鹽酸或硫酸溶液滴定[2]。根據標准酸消耗量可計算出蛋白質的含量。包括消化、蒸餾、吸收、滴定四個步驟
1.2.2全量凱氏定氮法
全量凱氏定氮法的原理
樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。然後取消化液的全部加鹼蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收後再以標准鹽酸或硫酸溶液滴定。根據標准酸消耗量可計算出蛋白質的含量。包括消化、蒸餾、吸收、滴定四個步驟
2 分析過程
試樣制備：固體樣品：取有代表性的樣品至少200g，用研缽搗碎、研細；不易搗碎、研細的樣品應切(剪)成細粒；干固體樣品用粉碎機粉碎；液體樣品：取充分混勻的液體樣品至少200g。粉狀樣品：取有代表性的樣品至少200g(如粉粒較大也應用研缽研細)，混合均勻；糊狀樣品：取有代表性的樣品至少200g，混合均勻；固液體樣品：按固、液體比例，取有代表性的樣品至少200g，用組織搗碎機搗碎，混合均勻；肉製品：取去除不可食部分、具有代表性的樣品至少200g，用鉸肉機至少鉸兩次，混合均勻。上述試樣應放入密閉玻璃容器中，於4°C冰箱內貯存備用，盡快測定。
2.1微量凱氏定氮法的分析過程
2.1.1樣品消化 :
步驟：准確稱取一定量的樣品，加入硫酸銅0.5g、硫酸鉀10g和濃硫酸20mL、玻璃珠數粒→小心移入乾燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中(固體或粉末用紙捲成紙筒送入)，輕輕搖勻，以45º斜支於有小孔的石棉網上→用電爐以小火加熱(或先燒瓶放在距電爐較遠處)，待內容物全部炭化、泡沫停止產生後→加大火力(或將燒瓶放在電爐上)，保持瓶內液體微沸→至液體變藍綠色透明後→繼續加熱微沸30min→關閉電爐，取下燒瓶、冷卻→轉移至100ml容量瓶中，加水定容
2.1.2 蒸餾與吸收：
按圖安裝好微量定氮蒸餾裝置。於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3容積處，加甲基橙指示劑數滴及硫酸數毫升，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠。在接受瓶中加入10ml40g/L硼酸及2滴混合指示劑，將冷凝管下端插入液面以下。准確吸取消化液10mL於反應管內，經漏斗再加入10mL氫氧化鈉溶液，用少量蒸餾水沖洗漏斗，夾好漏斗夾並水封，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水進行蒸餾。指示劑變綠色後繼續蒸餾10min，將冷凝管尖端提離液面繼續蒸1min

⑶ 用蒸餾-滴定法測定水中氨氮，其中蒸餾和滴定的原理方程式是什麼

滴定原理是用抄硫酸或者鹽酸滴定硼酸氨，生成硫酸銨或者氯化銨和硼酸；蒸餾原理具體是什麼我記得不是很清楚了，我不確定所以不能誤導你，反正最後就是蒸餾出的氨氣與硼酸反應生成硼酸銨，我現在在外地，手上沒有資料，你可以查閱魯如坤編寫的《土壤農化分析》，裡面有寫原理方程式，不過這本書可能比較難找，最好找找土壤學的教授看看有沒有，祝你好運，如果你不急以後可以再跟你交流。

⑷ 做水樣中氨氮的測定時為什麼要蒸餾

因為一般的氨氮測試要求實驗用水為嚴格的無氨水，一般的自來水中都或多或少內含有一些氨氮容，所以在使用這些水時必須進行無氨化處理。常用的製取無氨水有很多方法，簡述如下：
①蒸餾法，在水中加入幾滴濃硫酸至ph＜2，使得各種形態的氨氮轉化為不揮發性的銨鹽，再進行蒸餾，收集蒸餾液，這時候的蒸餾液就是嚴格的無氨水。
②向蒸餾水中加入幾毫升陽離子交換樹脂，可以出去余氨。
這些都是為了獲得嚴格的無氨水，防止給測試過程中帶來干擾。
我想你的做法意思應該是先調節ph在鹼性條件，使水中氨氮轉換為非離子形態的氨氮，在進行蒸餾去除非離子形態的氨氮-nh3-n。最後收集溶液，得到無氨水，這樣也是可以的，因為工業法就是用這種方法吹脫氨氮的。其實這和第一種方法所說的意思就是一個逆過程。

⑸ 急求氨氮蒸餾裝置的蒸餾的原理，以及所需的儀器

氨氮蒸餾是往含氨氮的水樣中加入一定量的NaOH，使pH提高到10以上，將氨氮(NH4+)轉化為氨水(NH3H2O)，再通過加熱蒸餾方式使氨水分解為NH3揮發出來，揮發出按一般以弱酸(如硼酸)吸收後進行檢測。
一般有專門的定氮儀，也可自行採用煤氣燈+帶冷凝管的三口燒瓶+洗氣瓶+吸收瓶構建。

⑹ 檢測氮含量的方法！

一、材料：各種乾燥、過篩（60～80目）的植物樣品。

二、儀器設備：消化管； 微量凱氏定氮蒸餾裝；三角燒瓶；微量滴定管； 量筒；容量瓶；燒杯；移液管等。

三、植物樣品中氮元素含量檢測實驗：

1、樣品提取分離：准確稱取烘至恆重的樣品0.1000g～0.5000g（依樣品含氮量而定，含氮1～3mg宜），置10ml離心管中，加入5ml5％三氯乙酸，90℃水浴中浸提15min，不時攪拌。

取出後用少量蒸餾水沖洗玻棒，待溶液冷卻後，4000rpm離心15min，上清液棄去。並用5％三氯乙酸洗沉澱2～3次，離心，棄去上清液，最後用蒸餾水將沉澱無損地洗入鋪有濾紙的漏鬥上，去掉濾液後，將沉澱和濾紙在50℃下烘乾，用於蛋白氮的測定。

2、樣品的消化：取4支消化管編號。1號管直接放入稱好的材料用於測定總氮，2號管放入上述烘乾的濾紙和沉澱，用於蛋白氮的測定，3號管放入同樣濾紙一張、4號管不加任何樣品作為空白對照，注意將樣品放入消化管底部。

向各消化管加濃硫酸5ml，混合催化劑0.3g～0.5g，將樣品浸泡數h或放置過夜後，在管口蓋一小漏斗，放在遠紅外消煮爐上加熱消化。開始時溫度可稍低，以防止內容物上升至管口。泡沫多時，可從小漏斗加入2～3滴無水乙醇。

到管口出現白色霧狀物時，泡沫已不再產生；此時可逐漸升溫，使內容物達到微沸。直到消化液變為清澈透明為止。

消化過程中，若在消化管上部發現有黑色顆粒時，應小心地轉動消化管，用消化液將它沖洗下來，以保證樣品消化完全。消化過程約需2～3h。

3、定容消化完畢待溶液冷卻後，沿管壁仔細加入10ml左右無氨蒸餾水，以沖洗管壁，再將消化液小心轉入100ml容量瓶中。以無氨水少量多次沖洗消化管，洗滌液並入容量瓶。冷卻後用無氨水定容至刻度，混勻備用。

4、蒸餾及滴定 以下幾步進行：

A、儀器的洗滌：先經一般洗滌後，還要用水蒸氣洗滌。可按下列方法進行蒸氣洗滌。先在蒸氣發生器中加入2／3體積的蒸餾水（事先加入幾滴濃硫酸，使其酸化，加入甲基紅指示劑，並加入少許沸石或毛細玻璃管以防止爆沸）。

打開漏斗下的夾子，用電爐或酒精爐加熱至沸騰，使水蒸氣通入儀器的各個部分，以達到清洗的目的。在冷凝管下端放置一個三角瓶接收冷凝水。然後關緊漏斗下的夾子，繼續用蒸氣洗滌5min。

沖洗完畢，夾緊蒸氣發生器與收集器之間的連接橡膠管，蒸餾瓶中的廢液由於減壓而倒吸進入收集器，打開收集器下端的活塞排除廢液。

如此清洗2～3次，再在冷凝管下端換放一個盛有硼酸－指示劑混合液的三角瓶，使冷凝管下口完全浸沒在液面以下0.5cm處，蒸餾1～2min，觀察三瓶內的溶液是否變色。

如不變色，表示蒸餾裝置內部已洗干凈。移去三角瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝管下口，關閉電爐，儀器即可供測定樣品使用。

B、標准硫酸銨測定為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術，並檢驗實驗的准確性，找出系統誤差，常用已知濃度的標准硫酸銨測試三次。

在三角瓶中加入20ml硼酸－指示劑混合液，將此三角瓶承接在冷凝管下端，並使冷凝管的出口浸入溶液中。注意在加樣前務必打開收集器活塞，以免三角瓶內液體倒吸。准確吸取2ml硫酸銨標准溶液，加到漏斗中。

四、結果計算：

樣品中總氮量（％）＝0.010×(V3—V0)×100×14/(W×1000×10)×100×氮的回收率樣品中蛋白氮含量（％）＝0.0100×(V1－V2－V0)×100×14/(W×5×1000)×100×氮的回收率。

回收率（％）＝0.0100×(V－V0)×14/(2.0×0.6×100)×100。

(6)蒸餾檢測氮含量檢測原理擴展閱讀：

一、葯劑空白高的問題：

造成葯劑空白高主要原因是過硫酸鉀純度不夠。空白高於0.030 ，就需要提純過硫酸鉀。提純方法就是二次結晶過硫酸鉀：

1、（可以同時做兩份）在1L的大燒杯中加入約800mL水，50 攝氏度的水浴鍋上加熱（水浴鍋的溫度要用溫度計檢測下是不是正常，以免超過60攝氏度。過硫酸鉀在60 攝氏度以上會分解）。

我的經驗是先加入90 克過硫酸鉀，用一濾紙蓋在上面（避免污染），溶解速度慢， 可以邊做別的事邊提純，有空就去攪拌幾下，全部溶解之後（速度較慢）。

用勺子逐漸向燒杯中加入過硫酸鉀，一次不要加太多，溶了再加，直至不管怎樣攪拌，隔了近一小時多都不能溶解為止（剛好有一丁點兒不能溶解），這個過程挺漫長。

2.把完全溶解的飽和溶液放在室溫中自然冷卻，用一干凈的塑料袋包住燒杯口， 並用皮筋扎緊，再放進冰箱里（調到低溫度），放置一晚上，重結晶。建議同時用一個1L 的廣口瓶放一瓶無氨水在冰箱里冷藏（用於沖洗用）。

3.重結晶一夜後，第二天早上拿出來立即倒掉上清液，重結晶的晶體會結成一塊沉在瓶底，但其實結構很鬆散，用鋼勺什麼的弄兩下就離散開了，然後再清洗：用冰好的無氨水清洗幾遍，盡量不要讓下面的結晶流失。

4.二次結晶：清洗後的燒杯里只剩下下面的結晶，向燒杯中加入約400ML 的無氨水，攪拌溶解，這次跟次結晶不同的是向燒杯中慢慢地加入無氨水，一開始可以一次稍多點水 （看結晶的多少），剩下不多時要等久些，加的水也要少，直到有一丁點兒結晶不能溶解為止。

5.然後重復第2步驟（二次結晶）、第3步驟（清洗）。

6.清洗後倒掉上清液，把結晶移入一250ML的燒杯中，然後放入50攝氏度烘箱烘乾即可 （烘箱里的溫度要用溫度計檢測是否正常）。烘乾箱里不要放入其它物品，以免再次污染。

烘乾時間較長，（我的烘了二天三夜）可以晚上放烘乾箱里烘，白天放在50 度水浴鍋上蒸干一定。完全烘乾後的葯品跟原來的葯品一樣鬆散乾燥，攪動會發出清脆的聲音。

7 ．烘乾後的葯品從烘箱里拿出要放在乾燥器里冷卻一小時以上。冷卻後用干凈的聚乙烯瓶裝好蓋緊。

8.實驗過程中加鹼性過硫酸鉀的時候一定要避免加在瓶口處。

二、總氮取水體積：

因為鹼性過硫酸鉀消解紫外分光光度法測定總氮取水樣量為10ML時，測定范圍為0.20mg/l7.00mg/l。總氮高於7 mg/l時要適當減少取水樣量。

如果取5ML水樣再稀釋至10ML 進行測定的話，高檢出限是14 mg/l。當總氮高於14 mg/l 時取水量就要再減少進行測定。我一般是取2ML水樣進行測定。

出水總氮低時可以取5ML水樣進行測定。 吸取水樣時要取靜止一定時間後的上清液。

三、要用新鮮的無氨水：

整個總氮的測定過程中所用的無氨水，包括加葯前稀釋至10ML 用的無氨水，消解後加的無氨水，以及測定吸光值時參比樣用的無氨水，都必須使用同一瓶水。 以免不同無氨水不同帶來的誤差。

四、密封事項：

比色管蓋子用生料帶纏好，這樣密封性更好，防止氨氮跑出。

生料帶對葯劑沒影響不會影響結果。但纏在蓋子上的生料帶要保持完好無損，以免碎屑掉入比色管內，影響吸光值，從而影響化驗結果。比色管蓋子一定要塞緊，然後用紗布和繩子扎緊。紮好後把紗布邊沿往下拔， 使紗布緊密包住蓋子。

五、滅菌鍋的溫度滅菌鍋的溫度設定為125度，消解時間設定為1小時。

六、趁熱拿出消解結束後，待滅菌鍋壓力降為0 後，馬上打開放氣閥放氣，放氣後馬上打開滅菌鍋蓋，立即拿出裝比色管的燒杯，把總氮的比色管（壓住總氮比色管的蓋子）趁熱多次搖勻，放回燒杯中，自然冷卻。

七、加入1+1鹽酸後，10分鍾之後測定吸光值（只要是10 分鍾後就行，時間長些不要緊，但要避免污染。）。分光光度計要預熱30分鍾以上，測定總氮的吸光值時，要先測220 波長的吸光值，全部測完了再測275波長的吸光值。

⑺ 用蒸餾法測定氮的濃度時，產生的氨氣通入硫酸，為什麽測得的硫酸濃度

你好
用納氏試劑或滴定測定氨氮則用50mL硼酸吸收用水楊酸-氯酸鹽則用50mL0.01mol/L硫酸吸收沒聽說用蒸餾水版做預處理建權議用絮凝做預處理測氨氮預處理間絮凝間20mins（需要試試驗確定氫氧化鈉硫酸鋅加入量比例）用蒸餾蒸餾間需要約200mins
蒸餾絮凝測氨氮預處理主要確定測氨氮：納氏試劑、滴定、水楊酸-氯酸鹽

⑻ 測定三氮時,怎麼檢驗蒸餾水中不含硝酸根離子

測定三氮時，蒸餾水中可能含有，NH3(氨)或NH4+(銨根)，NO2-（亞硝酸根），NO3-（硝酸根）。

NH3(氨內)或NH4+(銨根)，加入氫氧化鈉加容熱，用濕潤的紅色石蕊試紙檢驗變藍即可。

NO2-（亞硝酸根），加入鹽酸，降低ph到1.7以下，亞硝酸鹽和氨基苯黃酸反應生成重氮鹽，再與N-（1-萘基）-乙二胺反應生成紅色染料。

NO3-（硝酸根），加入氯化銀溶液生成白色沉澱即可檢出。

⑼ 測量蛋白質氮含量的常用儀器

食品中蛋白質含量測定（凱氏定氮法）
（5009．5-2003食品中蛋白質含量測定）
一、目的與要求
1、學習凱氏定氮法測定蛋白質的原理。
2、掌握凱氏定氮法的操作技術，包括樣品的消化處理、蒸餾、滴定及蛋白質含量計算等。
二、實驗原理
蛋白質是含氮的化合物。食品與濃硫酸和催化劑共同加熱消化，使蛋白質分解，產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，留在消化液中，然後加鹼蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後，再用鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量來乘以蛋白質換算系數，即得蛋白質含量。
因為食品中除蛋白質外，還含有其它含氮物質，所以此蛋白質稱為粗蛋白。
三、儀器與試劑
（一）試劑
1、硫酸銅（CuSO4•5H20）
2、硫酸鉀
3、硫酸（密度為1.8419g/L）
4、硼酸溶液（20g/L）
5、氫氧化鈉溶液（400g/L）
6、0.01mol/L鹽酸標准滴定溶液。
7、混合指示試劑：0.1%甲基紅乙溶液液1份，與0.1%溴甲酚綠乙醇溶液5份臨用時混合。
8、黃豆粉。
（二）儀器
微量定氮蒸餾裝置：如圖3- 所示。

圖3- 微量凱氏定氮裝置
1、電爐； 2、水蒸氣發生器（2L平底燒瓶）；3、螺旋夾a；
4、小漏斗及棒狀玻璃塞（樣品入口處）；5、反應室；6、反應室外層；
7、橡皮管及螺旋夾b；8、冷凝管；9、蒸餾液接收瓶。
四、實驗步驟
1、樣品消化
稱取黃豆粉約0.3g（±0.001g），移入乾燥的100mL凱氏燒瓶中，加入0.2g硫酸銅和6g硫酸鉀，稍搖勻後瓶口放一小漏斗，加入20mL濃硫酸，將瓶以450角斜支於有小孔的石棉網上，使用萬用電爐，在通風櫥中加熱消化，開始時用低溫加熱，待內容物全部炭化，泡沫停止後，再升高溫度保持微沸，消化至液體呈藍綠色澄清透明後，繼續加熱0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷後，無損地轉移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻備用，即為消化液。
試劑空白實驗：取與樣品消化相同的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸，按以上同樣方法進行消化，冷卻，加水定容至100mL，得試劑空白消化液。
2、定氮裝置的檢查與洗滌
檢查微量定氮裝置是否裝好。在蒸氣發生瓶內裝水約三分之二，加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。
測定前定氮裝置如下法洗滌2~3次：從樣品進口入加水適量（約占反應管三分之一體積）通入蒸汽煮沸，產生的蒸汽沖洗冷凝管，數分鍾後關閉夾子a，使反應管中的廢液倒吸流到反應室外層，打開夾子b由橡皮管排出，如此數次，即可使用。
3、鹼化蒸餾
量取硼酸試劑20mL於三角瓶中，加入混合指示劑2~3滴，並使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夾a關閉，螺旋夾b開啟的狀態下，准確吸取10.0mL樣品消化液，由小漏斗流入反應室，並以10mL蒸餾水洗滌進樣口流入反應室，棒狀玻塞塞緊。使10mL氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應室，用少量水沖洗立即將玻塞蓋堅，並加水於小玻杯以防漏氣，開啟螺旋夾a，關閉螺旋夾b，開始蒸餾。通入蒸汽蒸騰10min後，移動接收瓶，液面離開凝管下端，再蒸餾2min。然後用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准備滴定。
同時吸取10.0mL試劑空白消化液按上法蒸餾操作。
4、樣品滴定
以0.01mol/L鹽酸標准溶液滴定至灰色為終點。
5、數據記錄
項 目 第一次 第二次 第三次
樣品消化液（mL）
滴定消耗鹽酸標准溶液（mL）
消耗鹽酸標准溶液平均值（mL）
五、結果計算

式中 X——樣品蛋白質含量（g/100g）；
V1——樣品滴定消耗鹽酸標准溶液體積（mL）；
V2——空白滴定消耗鹽酸標准溶液體積（mL）；
c——鹽酸標准滴定溶液濃度（mol/L）；
0.0140 ——1.0mL鹽酸 標准滴定溶液相當的氮的質量（g）；
m——樣品的質量（g）；
F——氮換算為蛋白質的系數，一般食物為6.25；乳製品為6.38；麵粉為5.70；
高梁為6.24；花生為5.46；米為5.95；大豆及其製品為5.71；肉與肉製品為
6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵5.30。
計算結果保留三位有效數字。
六、注意事項及說明
1、本法也適用於半固體試樣以及液體樣品檢測。半固體試樣一般取樣范圍為2.00g~5.00g；液體樣品取樣10.0mL~25.0mL（約相當氮30mg~40mg）。若檢測液體樣品，結果以g/100mL表示。
2、消化時，若樣品含糖高或含脂及較多時，注意控制加熱溫度，以免大量泡沫噴出凱氏燒瓶，造成樣品損失。可加入少量辛醇或液體石蠟，或硅消泡劑減少泡沫產生。
3、消化時應注意旋轉凱氏燒瓶，將附在瓶壁上的碳粒沖下，對樣品徹底消化。若樣品不易消化至澄清透明，可將凱氏燒瓶中溶液冷卻，加入數滴過氧化氫後，再繼續加熱消化至完全。
4、硼酸吸收液的溫度不應超過40℃，否則氨吸收減弱，造成檢測結果偏低。可把接收瓶置於冷水浴中。
5、在重復性條件下獲得兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%
七、思考題
1、預習凱氏定氮法測定蛋白質的原理及操作。
2、蒸餾時為什麼要加入氫氧化鈉溶液？加入量對測定結果有何影響？
3、在蒸汽發生瓶水中、加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸的作用是什麼？若在蒸餾過程中才發現蒸汽發生瓶中的水變為黃色，馬上補加硫酸行嗎？
4、實驗操作過程中，影響測定準確性的因素有哪些？

⑽ 凱氏定氮法測定食品中蛋白質含量的原理和基本操作方法是什麼

原理：有機含氮化合物與濃硫酸共熱消化，氮轉化為氨，再與硫酸結合成硫酸銨。硫酸銨與強鹼反應，放出氨。將氨蒸餾到過量的標准無機溶液中，再用標准鹼溶液進行滴定。根據測得的氨量，計算樣品的總氮量。

、試劑與材料：

濃硫酸、硫酸鉀-硫酸銅粉末(稱取80g硫酸鉀和20g硫酸銅(五水)，0.3g二氧化硒研細混合)、30%氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0.01M標准鹽酸、混合指示劑(田氏指示劑)儲存液(取50ml0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅溶液混合，儲存於棕色瓶中備用。此指示劑在PH5.2為紫色;PH為5.4為暗灰色或灰色;PH5.6為綠色;變色點為PH5.4)、硼酸-田氏指示劑混合液(100ml2%硼酸溶液，滴加約1ml田氏指示劑，搖勻後，溶液呈紫紅色)、蛋白質樣品、容量瓶、吸管、凱氏燒瓶、凱氏定氮蒸餾裝置、微量滴定管、電爐

三、操作方法

1、樣品處理：固體樣品，應在105℃乾燥至恆重。液體樣品可直接吸取一定量，也可經適當稀釋後，吸取一定量進行測定，使每一樣品的含氮量在0.2-1.0mg范圍內。

2、消化：取一定量樣品，於50ml乾燥的凱氏燒瓶內。加入300mg硫酸鉀-硫酸銅混合粉末，再加入3ml濃硫酸。用電爐加熱，在通風廚中消化，瓶口加一小漏斗。先以文火加熱，避免泡沫飛濺，不能讓泡沫上升到瓶頸，待泡沫停止發生後，加強火保持瓶內液體沸騰。時常轉動燒瓶使樣品全部消化完全，直至消化液清澈透明。

另取凱氏瓶一個，不加樣品，其它操作相同，作為空白試驗，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質，以對樣品進行校正。

3、蒸餾：將微量凱氏蒸餾裝置洗滌(先用水蒸氣洗滌)干凈。將凱氏燒瓶中的消化液冷卻後，全部轉入100ml的容量瓶，用蒸餾水定容至刻度。

吸取20ml稀釋消化液，置於蒸餾裝置的反應室中，加入10ml30%氫氧化鈉溶液，將玻璃塞塞緊，於漏斗中加一些蒸餾水，作為水封。

取一三角瓶，加入10ml硼酸-田氏指示劑混合液，置於冷凝管之下口，冷凝管口應浸沒在硼酸液面之下，以保證氨的吸收。

加熱水蒸汽發生器，沸騰後，夾緊夾子，凱氏蒸餾。三角瓶中的硼酸-指示劑混合液，吸收蒸餾出的氨，由紫紅色變為綠色。蒸餾15min，讓硼酸液面離開冷凝管口，再蒸1-2min以沖洗冷凝管口。空白試驗按同樣操作進行。

4、滴定：樣品和空白均蒸餾完畢後，用0.01M標准鹽酸滴定，至硼酸-指示劑混合液由綠色變回淡紫色，即為滴定終點。

四、計算 樣品總氮量(mg)=(A-B)×c×14×100/20

式中：A：樣品滴定時消耗的標准鹽酸體積 B：空白滴定時消耗的鹽酸體積 C：標准鹽酸的當量濃度 14：氮的相對分子量 20：用於蒸餾的稀釋消化液體積 100：稀釋消化液的體積

樣品中粗蛋白含量(mg)=樣品總氮量(mg)×6.25