⑴ 透析袋的具體使用方法
透析已成為生物化學實驗室最簡便最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜製成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為「保留液」,袋(膜)外的溶液稱為「滲出液」或「透析液」。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比於膜的厚度,正比於欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比於膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素(再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等)製成的透析膜,目前常用的是美國美國光譜醫學公司(spectrum,上海歐韋達儀器科技有限公司是中華區特約總經銷)和美國Union Carbide (聯合碳化物公司,上海歐韋達儀器科技有限公司是華東區特約經銷商)生產的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類,單位為道爾頓(D)。
商品透析袋製成管狀,其扁平寬度為8 mm~77 mm不等。為防乾裂,出廠時都用10%的甘油處理過,並含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其它生物活性物質有害,用前必須除去。
1.將透析管剪成適當長度(10-20cm)的小段,即成透析袋。
2.在大體積的2%(m/v)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。
3.將透析袋用蒸餾水徹底漂洗。
4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
5.透析袋冷卻後存放於4度,應確保透析袋始終浸沒在液體中。
註:從此步起用透析袋時一定要戴手套操作。
6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋裡外加以清洗。
註:也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水,松動瓶蓋,於20psi(1.40kg/cm2)高壓滅菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
使用後的透析袋洗凈後可存於4℃蒸餾水中,若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼乾的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重復使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鍾,再用蒸餾水洗凈,即可使用。
美國美國光譜醫學公司生產的透析袋大部分是預處理過的,即用型,使用前只需用蒸餾水沖洗即可使用,spectra/por7系列和生物技術級的透析袋基本不含硫化物和重金屬離子。
使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特製的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設計與製作各種簡易的透析裝置。美國美國光譜醫學公司生產的各種型號的透析設備,由於使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
選用透析袋需要知道目的物質的分子量,每次處理的樣品量,同一批次的平行試驗,是否需要保持目的物質的活性來選擇,目前國內使用的透析袋主要由上海歐韋達儀器科技有限公司提供,該公司能提供專業的技術指導。
⑵ 什麼是小分子水
我們都知道水分子是H2O,既兩個氫原子和一個氧原子;即水是有氫氣和氧氣組成的,所以說水是有生命的.
科學家們應用核磁共振技術觀察到水中水分子的結構.正常水是在140—150赫茲每個水分子團有13—15個水分子組成,稱為大分子團水.世界衛生組織規定,進入100赫茲以內每個水分子團有5—7水分子組成,稱為小分子團水.又稱為五角水或六角水.人們都知道雪片就是六角形的,海水,胎兒的羊水都是小分子團水.
水是以分子團的結構存在的,研究發現水分子團越大活性越小,這種水也越不好喝,不易吸收,而且存在胃腸和腎臟中,產生腹脹和浮腫的現象.而水分子團越小活性越大,這種水也好喝,喝了軟滑、口感好、微微甘甜、具有潔凈、含氧量越高,它能去除有機物,去除治病毒素,去除異色異味,去除重金屬,保留有機礦物質,活化等特性.越喝越想喝,喝後不產生飽脹感,促進生命活力,進入體內能很快吸收,滲入細胞內,使水的營養生理功能接近人體細胞內的水,還有緩解代謝疾病和促進生長的作用.這就是小分子團.
氧化意味著腐敗或者老化.當被氧化時,氧化還原電勢值(ORP)上升.當我們變老時,由於所有細胞正在氧化,身體中的氧化還原電勢值增加.不利的數值會引起過度的腐敗和過早的老化.在人體里,氧化是由於失去一個電子的氧分子的自由基所導致.因為這些自由基設法「偷取」所需要的電子以獲得穩定,因此變得非常不穩定和非常容易發生「反應」.
何為小分子團水
李時珍在我國醫葯名著《本草綱目》中首先提到「葯補不如食補,食補不如水補」.
現代世界科學屆公認:小分子團水是人體健康與長壽的源泉.據科學家廣泛研究調查,最終發現俄羅斯高加索地區、廣西的巴馬村的長壽者壽命高達120多歲,其主要原因是他們身體的70%的水細胞組織健康,這與長年飲用的天然弱鹼性小分子團水有直接的關系.
小分子團水直徑小、滲透力強,溶解力強,更容易進入細胞內,把人體必需的營養等輸送到細胞內,能更好地把沉積在細胞內的細菌、病毒等有害物質進行溶解排出體外,從而達到增強機體提高免疫力的目的.
長壽村的天然小分子團水,水分子團是由5-6個左右的水分子組成,稱為小分子團水,具有高滲透、高擴散力、高溶解力、高含氧量、弱鹼性的特性.
而我們平時飲用的水,包括自來水、純凈水、礦泉水、蒸餾水、這些水的分子團是13-18個左右的水分子組成,稱為大分子團水,不容易被人體吸收,因為不容易穿透人體細胞膜.