1. 制備細胞膜的方法
活動目標
1．體驗用哺乳動物紅細胞制備細胞膜的基本方法。
2．使用高倍顯微鏡觀察制備細胞膜過程中細胞的變化。
背景資料
生物膜的研究發展迅速。要研究生物膜的組成、結構及功能，首先必須分離出純凈的細胞膜。分離得到的哺乳動物的紅細胞膜，一般稱為「血影」。哺乳動物成熟的紅細胞中沒有一般真核細胞所具有的細胞核和細胞器，容易用它制備純凈的細胞膜。此外，哺乳動物的血液也比較容易獲得，因而是研究細胞膜的理想材料。
從哺乳動物的紅細胞中分離細胞膜，第一步是將血液收集在加有抗凝劑的容器內，用低速離心的方法從血液中分離出紅細胞，然後用等滲緩沖液反復洗滌，經多次離心，去除血漿。第二步是在紅細胞中加入低滲緩沖液，由於低滲溶液的作用，大量水分進入細胞，使紅細胞脹破而溶血。第三步是將溶血的紅細胞反復而充分地高速離心、洗滌，去除血紅蛋白和其他的細胞內含物，最終獲得比較純凈的紅細胞膜。
操作指南
1．材料 新鮮的哺乳動物血液
2．用具 離心機，離心管，滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙，小燒杯。
3．試劑 檸檬酸鈉或肝素（抗凝劑），生理鹽水（質量分數為0．9%的NaCl溶液），蒸餾水或清水。
4．操作要點
教師在實驗前做以下准備工作。
准備一定量的新鮮的哺乳動物血液，如羊血或豬血，在冰箱中靜置一晝夜。用滴管將上清液吸去。再吸取1 mL的沉澱物，放入離心管中，加入生理鹽水2 mL，在2 000 r/min條件下離心5 min。去除上清液，在沉澱中再加入生理鹽水2 mL，再離心一次，去除上清液，留沉澱備用。以上操作的目的是洗去血漿成分，避免血漿對血細胞的緩沖作用，從而使紅細胞的溶血現象更加明顯。
學生的實驗操作如下。
（1）取一個5 mL的小燒杯，加入生理鹽水2～3 mL。
（2）用滴管在沉澱的下層吸取一小滴血細胞，滴入小燒杯的生理鹽水中，以達到稀釋紅細胞的目的，以免觀察時，由於細胞密度太大，影響觀察效果。
（3）取另一個滴管，在小燒杯中輕輕攪拌，然後吸取少量的血細胞稀釋液，在載玻片的中央滴很小的一滴，加蓋玻片。
（4）先在低倍鏡下觀察紅細胞的正常形態，可見其邊緣完整發亮。
（5）在蓋玻片的一側加一滴蒸餾水或清水，在另一側非常小心地用吸水紙慢慢地吸引，防止把紅細胞全部吸入吸水紙中而影響觀察。邊加水邊觀察，注意紅細胞的形態變化。紅細胞會隨著水流向一側漂移，觀察時注意移動玻片。紅細胞體積逐漸變大，變得非常鼓脹，在視野中可以找到少數脹破的紅細胞，它們已失去完整發亮的邊緣，變成彌散狀。
5．需要注意的幾個問題
（1）製作臨時裝片時，紅細胞必須稀釋，而且取紅細胞的量要少。
（2）在高倍鏡下觀察，待觀察清晰時，在蓋玻片的一側滴加蒸餾水，同時在另一側用吸水紙吸引。上述操作均在載物台上進行，並隨時調整鏡筒高度，持續觀察細胞的變化。在蓋玻片一側滴加蒸餾水的量要少，不能讓蓋玻片處於漂浮狀態；同時在另一側用吸水紙吸引時要小心，不要將血細胞吸走。
（3）要想取得好的觀察效果，所用顯微鏡的放大倍數應在400倍以上。
（4）操作中要認真觀察才能看到連續的變化過程。
1．分析實驗原理
2. 制備細胞膜時為什麼要用生理鹽水稀釋新鮮的血液，能否直接用蒸餾水
用生理鹽水是為了保持滲透壓，防止在稀釋的時候發生細胞破裂。不能用蒸餾水。
3. 制備細胞膜
首先是制備一定量的細胞，細胞的來源可以是培養細胞，也可以是某種組織。培養細胞的收集相對簡單一些，直接用胰酶將細胞從培養瓶上消化下來，製成細胞懸浮液。比較易碎的組織細胞的收集如肝、脾等，可採用勻漿的方法，稍加研磨就可製成細胞懸液。有些結締組織，直接研磨不易分離出細胞，可先用適量的膠原酶處理。
細胞制備出來後，進行勻漿處理。勻漿的方法有多種，如用高速打碎機破碎，低滲，玻璃珠與細胞共振盪，凍融法，超聲波打碎等。可根據實驗需要和實驗室條件來選擇。無論選擇哪種方法，都要盡可能保持膜的完整性。整個操作過程要避免過於激烈，pH、離子強度和滲透壓等條件要適中，一般常用中性和等滲溶液。
勻漿產生的細胞裂解物，可通過一系列差速離心再加上一個梯度離心來分離細胞膜與細胞器，梯度是根據細胞器的大小、密度和沉降特性來設計的。勻漿分步分離的第一步是差速離心，在一系列的離心過程中離心力逐漸加大，並且將細胞器加入到具有密度梯度的介質中離心，常用的分離介質有蔗糖、甘油、葡聚糖等。由於每種細胞器的大小和沉降特性不同，因此可被分離出來。如果只是分離細胞中的某種細胞器，可直接根據那種細胞器所對應的相對離心力，在細胞勻漿後進行離心分離。哺乳動物紅細胞的結構比較簡單，其細胞膜可用低滲離心的方法分離出來。如果是獨特的細胞膜，可根據表面電荷的密度採用電泳的方法分離，也可根據大小採用凝膠過濾的方法分離
4. 在制備細胞膜的實驗中，把紅細胞放入蒸餾水的目的是（）A．溶解細胞膜B．清洗細胞C．使紅細胞吸水漲
在制備細胞膜的實驗中，把紅細胞放入蒸餾水的目的是使哺乳動物紅細胞吸水漲破，流出血紅蛋白，制備純凈的細胞膜，所以C正確．
故選：C．
5. 為什麼用紅細胞制備細胞膜的時候要用蒸餾水呢
因為蒸餾水不含有其他元素,水勢最高,紅細胞在蒸餾水中就一定會大量吸水漲破,燃後就可以提取細胞膜!!!!
6. 制備細胞膜時為什麼要用生理鹽水稀釋新鮮的血液，能否直接用蒸餾水
用生理鹽水是為了保持滲透壓，防止在稀釋的時候發生細胞破裂。不能用蒸餾水。