❶ 求免疫熒光DHE染色具體步驟和細胞流式的具體步驟
細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鍾，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鍾，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鍾，PBS洗三遍。5.，一抗4度濕盒內過夜，也可37度2小時，感覺前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室溫2小時，或者37度1半小時，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然後直接照熒光片。8，蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。
❷ 塗片為什麼要用蒸餾水的緩沖水沖洗
緩水流：防止把已經解離的烘乾的細胞沖跑 沖洗：把解離液洗掉，因為其主要成分是鹽酸，呈酸性，而用來染色的二苯胺或甲基綠呈鹼性，會中和，影響染色效果
❸ 細胞he染色時沒有用到二甲苯為什麼還要用酒精脫水
染色流程(1)二甲苯（Ⅰ） 15min (2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min (3)100%乙醇（Ⅰ） 5min (4)100%乙醇（Ⅱ） 5 min (5)80%乙醇 5min (6)蒸餾水 5 min (7)蘇木精液染色 5 min (8 ) 流水稍洗去蘇木精液 1-3 s (9) 1%鹽酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (13)蒸餾水過洗 1-2 s (14) 0.5%伊紅液染色 1-3 min (15) 蒸餾水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s (18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s (19) 無水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min (21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min (22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min (23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min (24) 中性樹膠封固 註：①第（10）、（11）步可省去,（12）步沖水時間需延長至20-30min.②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇.* 冷凍切片HE染色步驟：（1）冰凍切片固定 10～30 s （2）稍水洗 2 s （3）蘇木精液染色（60℃） 30～60 s （4）流水洗去蘇木精液 10 s （5）1%鹽酸乙醇 3 s （6）稍水洗 2 s （7）促藍液返藍 10 s （8）流水沖洗 15～30 s （9）0.5%曙紅液染色 30～60 s （10）蒸餾水稍洗 2 s （11）80%乙醇 2 s （12）95%乙醇 2 s （13）無水乙醇 2 s （14）石炭酸二甲苯 3 s （15）二甲苯（Ⅰ） 3 s （16）二甲苯（Ⅱ） 3 s （17）中性樹膠封固.註：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇.染色結果：細胞核藍色,胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色.4．12 切片脫水透明 切片經HE染色後,要徹底脫水透明,才能用中性樹膠封蓋.如果脫水不徹底,封片後呈白色霧狀,鏡下觀察模糊不清,且容易褪色.切片1-2級無水乙醇脫水,也可使用石碳酸二甲苯進行脫水.石碳酸有較強脫水能力,但長時間可使切片脫色,因此要經過多次二甲苯以使石碳酸完全除去.
❹ 既然洗滌劑是瓦解細胞膜，那為什麼在雞血細胞的時候不用洗滌劑，那或者植物細胞在研磨之後不用蒸餾水
雞血細胞吸水可以漲破，非常方便，沒有必要用洗滌劑。植物細胞有細胞壁，吸水不會漲破，所以加洗滌劑，目的就是瓦解細胞膜。
❺ 觀察DNA和RNA在細胞中的分布實驗時，為什麼用蒸餾水沖洗載玻片為什麼要沖洗圖片
沖洗之前不是滴上甲基綠和吡咯紅葯水了么，將玻片外面的多餘葯水沖洗掉。 烘乾是要將細胞固定在玻片上，起到穩固的作用。
❻ 蒸餾水沖洗塗片的目的
解、在實驗步驟中，水解用的試劑是鹽酸，水解之後進行沖洗，然後再進行染色，所以沖洗的目的是去除鹽酸，防止對實驗結果的干擾．
故選：B．
❼ 「觀察DNA和RNA在細胞中的分布」實驗中，沖洗塗片時為什麼用蒸餾水緩水流沖洗
是為了沖洗掉鹽酸防止鹽酸影響觀察效果，是因為染色劑是鹼性染色劑會與鹽酸中和
❽ 為什麼要烘乾載玻片為什麼要用蒸餾水沖洗細胞不是肯定會被沖走嗎
可能你儀器中存在一些有機物沒有除去,可能是原先實驗的殘留物,新儀器的話應該是你沒有除油導致的,可以先蒸餾乙醇一次烘乾後再蒸餾水,或者蒸餾水多做幾次就可以了
❾ 請問台盼藍染色（區分死細胞與活細胞）和結晶紫染色的染液的配製方法以及染色的步驟是怎麼樣的謝謝！
一. 台盼藍配製：4％台盼藍母液：稱取4克台盼藍，加入少量蒸餾水研磨，加0.9%NaCl至100毫升，用濾紙過濾，4℃保存。或者直接用0.9%的生理鹽水或者PBS配成母液 用的時候用生理鹽水或者PBS稀釋 。
台盼藍染色步驟：
1.、4%台盼藍母液：稱取4g台盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。（也可買Gibco的成品）; T
2、胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，並作適當稀釋。
3、染色：細胞懸液與0.4%台盼藍溶液以9:1混合混勻。（終濃度0.04%）
4、計數：在三分鍾內，分別計數活細胞和死細胞。
5、鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。
6、統計細胞活力：活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100%
二. 結晶紫配製：
結晶紫 2.0g
草酸銨 0.8g
95％酒精 20ml
餾水 80ml
先將結晶紫溶於酒精，草酸銨溶於蒸餾水中，然後將兩液混合，靜置48小時使用。此染液穩定，置密閉的棕色瓶中可儲存數月。
結晶紫染色步驟：
1．在96孔細胞培養板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。
2．用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標准品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。
3．甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定細胞30秒鍾。
4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鍾。
5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置於吸水紙上吸干水分。自然乾燥或37℃烘乾。此板可以在室溫中長期保存。
6．測定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脫色，充分振盪後在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標准品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性