核酸提取仪对纯水的要求

A. 核酸提取仪的主要步骤及方法

1. 环境温度：5℃～40℃；环境相对湿度；电压：50%~80%范围：100～240Vac，50/60 Hz。
2. 将仪器放在水平实验台上。
3. 放置仪器时应保证仪器周围10cm内无障碍物；多台仪器同时使用时，每台仪器之间的距离应不小于50cm。
4. 仪器主机通电之前，必须先用六角扳手取下磁棒架固定螺丝，否则通电运行将会损坏仪器。
5. 96孔板和磁力棒套的安装必须与对应的卡槽完全契合。
6. 请勿将该仪器安放在过度潮湿、高温或阳光直射等温度变化剧烈的区域，这可能会影响仪器的性能。
7. 请勿和其它大功率器件如离心机、空调等共用同一电源插座以免电源电压波动影响系统运行。
8. 请将适配器连接到仪器，把适配器与电源插座相连，并打开仪器开关。
9. 请勿在有潜在有害液体或气体的环境中操作该仪器。
10. 本仪器详细操作步骤，请参阅以下的说明。
1.5注意事项
1. 仪器应放在湿度低、灰尘少并远离水源的地方，室内应通风良好，仪器后方勿紧靠墙壁或堆放其他物品，以免影响散热。
2. 实验运行过程中禁止直接关闭电源开关。如果需要提前停止实验，请先在触屏软件上点击停止运行并确认后再关闭电源。
3. 裂解孔、洗涤孔和洗脱孔的样本体积应在50μL-1000μL，避免体积过多，溢出孔位。
4. 机器运行及测试进行时，请勿触摸加热条，以免烫伤。
5. 紫外灯开启灭菌时，请勿直视紫外光。
6. 移动仪器之前，请先切断电源，再用螺钉固定磁棒架。
7. 仪器长期不使用时，请拔掉插头，并用软布或塑料袋覆盖仪器，以防止灰尘进入。
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B. 生化仪纯水设备对进水水质有哪些要求

生化仪纯水设备根据市场要求及客户需求，保障生化仪及医院用水安全，集内合精湛的工艺配置组合设计而成，容最终符合中国药典GMP认证要求。生化仪纯水设备反渗透膜受到污染的主要原因是由金属氧化物沉积引起的，常见的有氢氧化铁、氢氧化铝、氢氧化锰等，还有微生物粘泥、水中的悬浮物与胶体物质在膜表面的沉积，以及碳氢化合物和硅酮基的油及脂类覆盖膜面，其特征为产水量增加或盐透过率增加或压差降增加。生化仪纯水设备对进水水质要求如下：

为了使生化仪纯水设备反渗透设备装置运转正常，取得预期的效果，在水进入反渗透设备装置之前，应当进行必要的预处理，以满足装置对进水水质的要求。

以上就是小编为大家介绍的全部内容，生化仪纯水设备反渗透主机应在以上原水条件下运行，检查你的原水是否在此限度内是很重要的，不符合此标准将会导致膜组元件的永久性不可恢复的污染和损坏，因此种情况而导致的膜污染和损坏不在系统的保质范围。

C. 核酸提取仪原理

1. 根据仪器型号大小不同划分 [1] 
1) 自动液体工作站
自动液体工作站是功能非常强大的设备，液体分液、吸液等自动完成，甚至能通过整合扩增、检测等功能，实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用，不太适合常规实验室提取核酸，一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个，一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作，需要比较大的资金。
2) 小型自动核酸提取仪
小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊性来达到自动提取核酸的目的，可以在任何实验室得到应用。
2. 根据提取原理不同划分
1) 采用离心柱法的仪器
离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法，通量一般在1-12个样本，操作时间和手工提取差不多，并不能提高实际工作效率，且价格昂贵，不同型号仪器的耗材也不能通用，仅适合经费充足的大型实验室使用。
2) 采用磁珠法的仪器
以磁珠为载体，利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸，在低盐高PH值下与核酸分离的原理，再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性，所以可设计成很多种通量，既可以单管提取，也可以提取8-96个样本，且其操作简单快捷，提取96个样本仅需30-45min，大大提高了实验效率，且成本低廉，因而可以在不同实验室使用，是目前市场上的主流仪器。

磁珠法核酸提取仪的基本原理
磁珠法核酸提取仪一般分为抽吸法和磁棒法两种 [2]  ：
1. 抽吸法，也叫移液法，是通过固定磁珠、转移液体来实现核酸的提取，一般通过操作系统控制机械臂来实现转移。提取过程如下:
1) 裂解：在样品中加入裂解液，通过机械运动及加热实现反应液的混匀及充分反应，细胞裂解，释放核酸。
2) 吸附：在样品裂解液中加入磁珠，充分混匀，利用磁珠在高盐低PH值下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸，在外加磁场作用下，磁珠与溶液分离，利用吸头将液体移出弃至废液槽，吸头弃掉。
3) 洗涤：撤去外加磁场，换用新吸头加入洗涤缓冲液，充分混匀，去除杂质，在外加磁场作用下，将液体移出。
4) 洗脱：撤去外加磁场，换用新吸头加入洗脱缓冲液，充分混匀，结合的核酸即与磁珠分离，从而得到纯化的核酸。

D. 核酸提取或纯化技术主要有哪几类

核酸提取或纯化技术主要有三类：

1、传统方法（操作复杂，耗时长）

2、离心柱法（试剂盒）

3、磁珠法（可单独采购磁珠或买成品试剂盒）

其中，磁珠法可实现自动化操作，是目前比较主流的方法。

核酸提取应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。

(4)核酸提取仪对纯水的要求扩展阅读：

核酸提取的注意事项：

1、仪器的安装环境：正常的大气压(海拔高度应该低于3000m)、温度20-35℃、典型使用温度25℃、相对湿度10%-80%、畅通流入的空气为35℃或以下。

2、避免将仪器放置在靠近热源的地方，如电暖炉；同时为防止电子元件的短路，应避免水或者其他液体溅入其中。

3、进风口和排风口均位于仪器背面，同时避免灰尘或纤维在进风口聚集，保持风道的畅通。

4、核酸提取仪离其他竖直面至少10cm。

5、仪器接地：为了避免触电事故，仪器的输入电源线必须接地。

6、远离带电电路：操作人员不得擅自拆解仪器，更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成，不要在接通电源的情况下更换元件。

E. 核酸pcr步骤

一、个人三级防护穿戴

带一次性帽子、佩戴医用N95、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一层乳胶手套、外层一次性隔离衣、防护目镜、第二层乳胶手套、穿戴完毕后应尽快通过专用缓冲间或者走廊，进入核酸提取区（专业核酸提取实验室）。


二、样本灭活处理

核酸检测须有两名工作人员快速通过进入实验室，进行灭活实验操作。生物安全柜内需配备吸水棉与消毒酒精、有条件可配备吸水台布，对样本溢洒时进行紧急处理；打开二级容器，用75%酒精消毒物体表面，检测样本管密闭性后进行灭活处理，灭活条件（56℃，30min，恒温样本灭菌仪等多种方式），取出酒精灭活管用酒精擦拭外表，将样本放入到生物安全柜内。

三、手工核酸提取

操作人员进入试剂配置区或者单独的洁净实验室。

一、试剂区准备

根据说明说要求，在AW1中加入无水乙醇130mL，在AW2中加入无水乙醇160mL，计入无水乙醇后及时做好标记，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，并颠倒混匀使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而后通过传递窗传送到样本处理区，或者由专人送到核酸提取实验室中。

二、样本的裂解

用1.5ml的无菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已灭活的待提取核酸的待测样本，涡旋振荡15s，室温静止10min。将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物，防止污染。裂解完成后，加入560μl无水乙醇，振荡混匀15s，将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物，防止污染。

向离心柱加入裂解产物630μl，8000转离心1min，若离心机在生物安全柜之外，每次使用都需进行外表面消毒。更换新废液收集管，要从离心机中小心取出离心柱，将上层离心柱转移到新收集管中，继续将剩余裂解产物630μl加入离心柱中，若样本体积大于140μl时需重复此步骤，直到全部裂解产物都过柱离心，8000转离心1min，小心将离心柱转移到新的收集管中。

取500μl AW1加入离心柱中（注意，此处加样操作时务必将移液器吸头接触离心柱内壁缓慢加样），8000转离心1min。小心取出离心柱，更换新的收集管。

取500μl AW2加入离心柱中，14000转离心3min，小心取出离心柱，更换新的离心柱上端收集管，置于离心机中使用最大转速离心1min，以确保将AW2中的残液完全离心干净。

取无菌1.5mlEP管收集核酸，将离心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脱液AVE加入到离心柱中（注意：洗脱液应尽量全部覆盖住离心柱膜），用EP管管盖盖住离心柱，使用无菌剪刀剪去原离心柱管盖。

室温静止1min，将其放入离心机中8000转离心1min，回收核酸。丢弃离心柱，EP管中即为获取的提取核酸，做好标记与登记。

四、用仪器提取核酸

首先按照说明说准备核酸提取试剂，将200μl灭活样本添加到核酸提取试剂中，根据核酸提取仪的设置程序上机提取核酸，等仪器操作结束，提取核酸完成，回收核酸。

五、PCR体系配置

根据检测样本数量配制体系，将配制好的PCR体系充分混匀并离心后，将其通过传递窗送至样本处理核酸加样区，或单独的样本加样实验室。按照每孔分装20μL反应体系，进行分装，在各孔分别加入5μL待测样本核酸或阴阳对照物（请注意每次检测器包含1个阳性对照和3个阴性对照且阴性对照需随机分布），密封PCR管，有条件时模板加样尽量在单独的生物安全柜进行。

工作人员将配好的PCR管通过传送窗口送至PCR扩增区，或由专人送至PCR扩增实验室，上机检测。

六、上机检测及结果分析

工作人员进入基因扩增分析实验室，从传递窗取出PCR反应管，上机前需混匀并离心反应体系，按试剂盒说明说设置扩增参数并分析判读结果。分析结果时，严格阅读说明说充分了解试剂盒灵敏度、方法学局限性等综合判读实验结果。

为防止扩增污染，反应结束后的PCR扩增管严禁开盖并装入密封带中装入指定的垃圾桶中。

七、检测后的消毒处理

样本处理完成后，工作人员应用75%的酒精消毒处理外层手套并脱下外层手套，放入生物安全柜中的生物垃圾桶中。检测完成后，生物安全柜台面和地面应用0.5-1%的有效氯消毒剂或75%乙醇进行擦拭。将安全柜内产生的医疗垃圾用三层垃圾袋密封，并将其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需标记医疗垃圾信息。实验结束后，生物安全柜以及实验室均要进行紫外灯照射消毒，时间至少30min。

实验操作人员，应有他人用0.5-1%的有效氯消毒剂或75%乙醇对一次性隔离衣均匀喷雾消毒处理，而后脱去隔离衣将检测医用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人员在离开二级实验室后，应在缓冲区或走廊按顺序摘脱个人三级防护用品，首先应带新的外层手套，摘掉护目镜并置于75%乙醇中消毒，自上而下、自内向外翻转脱掉一次性防护服，脱去外层手套，摘除、一次性帽子、脱一次性鞋套。脱掉手套，病毒防护服均需进行高压灭菌处理。高压前后医疗垃圾严格区分。

病毒相关垃圾需在120度，30min条件进行湿热高压处理，以高压试纸条变色为有效，而后作为普通医疗垃圾处理。

F. 基因测序，pcr对纯水有什么要求

PCR产物直接测序技术现已成为分子生物学和基因组学研究中的一个重要技术,广泛用于基因突变检测、遗传性疾病诊断、单核苷酸多态性研究、基因组重叠序列群等.与传统克隆测序技术相比较,直接对PCR扩增的DNA进行测序,省去了耗时的克隆步骤,避免了传统的细菌培养,模板提取等重复性操作,可以从少量的原始样品中得到正确的DNA序列信息.PCR产物直接测序技术具有快速、简便、稳定经济的优点. 试验试剂 PCR扩增的双链DNA模板长约20个核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶测序胶 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 测序反应缓冲液：40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 终止缓冲液：95% 甲酰胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚蓝,0.05% 二甲苯腈试验步骤： 1、 4个微量离心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC温浴5min,备用. 2、 在一个空的微量离心管中加入1pmol的PCR扩增双链DNA,10pmol测序引物,2μl 5×测序缓冲液,加双蒸水至总体积10μl,96OC加热8min,冰浴泠却1min,4OC 10000g离心10s. 3、 加入2μl预冷的标记混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,测序酶2U,加水至15μl,混匀后置冰上2min,标记新合成的DNA链. 4、 在第1步骤的4个管中各加入3.5μl标记反应混合物,37OC温浴5min.每管各加入4μl终止液. 5、 样品在80OC的水浴中热变性5min,每一泳道加2μl 加到测序胶上,电泳分离这些片段. 注意事项： 1.?PCR产物要有一定的长度(>200bp),因为测序结果两端20-30bp的电泳峰图的准确性较低. 2.?纯化PCR产物可通过离子交换层析使扩增的DNA段与反应剩余的dNTP及引物分离；也可通过琼脂糖凝胶电泳,将PCR产物与非特异性扩增产物和引物分离开来；如果扩增的特异性较高时,可直接通过酚：氯仿抽提,乙醇沉淀的方法来纯化. 3.?测序引物设计原则类似于PCR引物设计,可在DNA合成仪上合成20个左右的核苷酸作为引物,经过高压液相层析或聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后,即可用作测序引物. PCR循环测序法 PCR循环测序法是将PCR扩增和核酸序列分析技术相结合,从而形成的一种测定核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增测序.该方法采用PCR仪加热使DNA模板变性,在TaqDNA聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增标记的DNA分子. PCR循环测序法与以往的测序方法相比,其优点在于：大大减少所需的模板量；能提高测序反应产生的信号,降低了操作的复杂性,且聚合酶的用量减少；可在小量制备的模板上进行筛选反应；高温下进行的测序反应使DNA聚合酶催化的聚合反应能够通过模板二级结构的区域；双链闭环DNA可以直接作为反应模板应用,不用作预先碱变性处理.由于PCR循环测序法能够简单、快速地检测特定序列,因此, PCR循环测序法在核酸序列分析研究中受到广泛的重视. 试验试剂： DNA测序试剂盒 dNTP ddNTP 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素 TEMED(N,N,N‘,N’-四甲基乙二胺) 过硫酸铵 6%测序胶：6%丙烯酰胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×测序缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明胶,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 终止混合液：ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 终止缓冲液：95%甲酰胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚蓝,0.05%二甲苯腈试验步骤 1、 4个小离心管,每个小管加入3μl的终止混合液,将管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×测序缓冲液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加双蒸水到30μl彻底混匀,每管7μl加入上面4个小管中. 3、 反应液上加30μl的石蜡油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30个循环,可根据具体的情况进行适当的调整循环条件及循环次数. 5、 反应结束后在油层下加入5μl的终止缓冲液并用加样枪混匀. 6、 上样前将样品在大于80OC的水浴中热变性5min,每一道加2μl加到测序胶上,电泳分离这些片段. 注意事项： 1、 制备测序模板：PCR 扩增的产物可以经过低熔点的琼脂糖凝胶电泳纯化回收后,用于序列分析；可经过柱层析纯化,去除PCR 反应后剩余的dNTP和引物后,用于序列分析.PCR 产物也可不经纯化直接用于测序,但是这种测序产生的结果较差,建议测序之前应进行PCR产物的纯化.各种标准的质粒制备方法所纯化出的质粒均可作为测序模板使用.用标准方法制备的M13噬菌体、粘粒、λDNA都适合用作测序模板用.但要注意的是反应体系中不应有与引物互补的非目的基因序列,否则将会导致测序实验的失败. 2、 测序引物：测序引物是指合成的与测序模板链特异性互补的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶对引物的5‘端进行标记,反应体系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的标记引物；也可用α-32P-dATP标记新合成的DNA链.引物的浓度不宜高,否则容易形成引物二聚体,或产生非特异性的扩增引物. 3、 酶：各种缺乏3‘—5‘端外切活性的耐热DNA聚合酶都可以用于循环测序,其中TaqDNA聚合酶在DNA测序中最为常用.虽然应用PCR循环测序法能够简单、快速的进行基因序列的测定,但仍未能适应大规模DNA序列测定的需要,而PCR循环测序法、荧光标记和自动测序仪的联合使用成为大规模基因组测序的主要技术.该技术是采用荧光标记引物或双脱氧核苷三磷酸,反应产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,经特定的DNA序列分析仪和分析系统处理待测的DNA序列.它的应用减轻了DNA序列测定的工作量,提高了测序的效率.

G. PCR实验室的都需要什么设备

PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域，每个区域所用的设备不同，下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备？

样品制备区：

生物安全柜 ：防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散

样本低温冰箱：零下20摄氏度，-80℃ 保存样本及DNA

高速台式冷冻离心机：收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境

水浴锅或者金属浴：用于DNA杂交过程中水浴控温

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

混匀仪：移取样本前需要混匀

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

低温摇床：用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养

磁力搅拌器：加速溶解固体内容物

核酸扩散区：

基因扩增仪：基因检测DNA/RNA扩增

荧光定量PCR仪：核酸定量分析

核酸提取仪：样品DNA/RNA提取

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

纯水装置：用于PCR,DNA测序需要超纯水

产物分析区：

电泳仪：水平电泳用于核酸DNA/RNA检测，垂直电泳用于蛋白检测，转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测

凝胶成像系统/紫外检测仪：用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照；紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察，不能连接电脑

电炉：电泳琼脂凝胶加热融化

H. 核酸检测实验室主要仪器有哪些

1、核酸提取仪
核酸提取仪是实验室的必备仪器，应用配套的核酸提取试剂能够自动完成样本核酸的提取工作。核酸提取仪是通过磁珠提取法研制出来的一种高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备。可以利用机器磁棒架上的磁棒，将吸附有核酸的磁珠移动至不同试剂孔内，经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱等处理，即可得到高纯度的核酸。

2、离心机
离心机也是实验室最基本的仪器，主要是血液离心和DNA、RNA样品核酸提取时用。这里推荐湖南可成离心机。

迷你离心机可使用可成Super MiniStar迷你离心机，微型离心机外观新颖独特，灵巧多用，配备两种离心转子和多种试管套，适用于1.5ml、0.5ml、0.2ml离心管和PCR用0.2ml,8连排离心管。
台式高速离心机使用可成台式高速离心机1-16K，该机型体积小，占用空间小，微机控制，配微量转子，离心速度上升快，离心效率高，常用于DNA样品核酸提取。
台式低温高速离心机可用可成台式高速冷冻离心机 1-16KR，此机型体积小巧，设计紧凑，进口高能效环保制冷系统，具有优良的温度控制性能，制冷快，是RNA样品核酸提取的理想选择。
台式低速离心机推荐使用可成台式低速离心机4-5N，此机型采用无碳刷变频电机，操作宁静噪音低，可快速分离血清。且离心腔内设有独立紫外线灭菌装置，能使细菌、病毒丧失生存力及繁殖力进而消灭细菌、病毒，达到消毒灭菌成效。

I. 全自动核酸提取仪介绍.

全自动核酸提取仪介绍：全自动核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸提取工作的仪器。广泛应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。

上海旦鼎国际贸易有限公司是实验室配套仪器和生命科学仪器的专业提供商。公司NP968全自动核酸提取仪是使用通用磁珠法提取核酸的高科技产品，具有自动化程度高，提取速度快，结果稳定，操作简便的优点。利用一般生化专用的96孔反应盘，可同时操作1-32个样品，可广泛应用于常规科研、基因组学、疾控系统、食品安全、法医等领域。使用本仪器只需加入样品与以磁珠为载体的全自动核酸提取试剂于96孔专用反应盘中，选择或编辑适当程序后执行即可。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组，可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA和RNA。