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溶解引物用纯水可以吗

发布时间:2022-06-26 21:13:06

Ⅰ 做配药品,稀释引物,PCR实验中,对水的要求要很高么

配制一般化学试剂使用二级水即可。

配制生化试剂,包括引物稀释、PCR所用水,以及转膜、核酸抽提等,必须使用二次蒸馏水或一级水。

Ⅱ 如何溶解引物

根据引物的浓度,一般加300-600ul水,稀释成10pmol/ul的工作浓度

Ⅲ 合成的引物怎么溶解

◆干粉引物溶解稀释方法:
收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失.引物保存在高浓度的状况下比较稳定.如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融.引物一般配制成10-100pmol/uL(umol/L).
引物管上标有1OD 相当于多少umol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算:
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相当于umol 数×10000
例如,您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035umol ,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为10umol/L,那么只需用350ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可.
◆液体引物再稀释可用下列公式:
稀释引物要达到的浓度(pmol/ul)=母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)÷(汲取母液的体积(ul)+加水量(ul))
引物一般来的时候是干粉.这种状态能保存最长的时间.
如果用的话要先离心,5分钟(12000转).然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其实就是tris盐酸和EDTA的混合液.理论上用TE保存好,不容易降解.
一般配的时候要先配成储存液(浓度是100umol/L),在配成使用液(浓度是10umol/L).这样的好处是引物不容易降解.
引物忌讳反复冻溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就应该分装.使用液放在4度(2/3个月没问题的),储存液放在-20度.
引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/L,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100uM的,有的习惯于稀释成20uM,也有的稀释成10uM的.建议稀释成20uM的浓度,因为如果你稀释成100uM,当你所做PCR的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差;如果是稀释成10uM,引物浓度过低,容易降解.不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解.

Ⅳ 溶解引物时可以用的depc水代替双蒸水

当然可以,depc水本来就是双蒸水配的,而且还用depc去除了RNA酶,又高温高压过,我觉得比双蒸水更好些呢,我就喜欢用DEPC水,就是配的时候得小心些~

DEPC本身有毒,但是配成DEPC水后经过高温高压就无毒了

Ⅳ 溶解引物需要什么水

先离心!然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液(约100μM),保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高,浓度过高有两个弊端:一是容易形成引物二聚体(primer-dimer),二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时,容易产生非特异性产物。一般说来,用低浓度引物不仅经济,而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
1 引物的分子量如何计算? 比如:AAGCTTTTACCGC的分子量是多少?
2 OD值,1个OD值是不是等于40UG。
3 质量数,质量数的含义是什么,怎么计算?
4摩尔数(μmol)和终浓度(pM)和稀释水量(μl)
是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数?具体的公式是什么呢?
合成引物的单子上应该有算法:
1OD=33ug
1个碱基的分子量=324.5
(以上为近似值,通常都这样用)
1条引物的分子量=碱基数*324.5
质量数=OD*33ug
摩尔数=质量数/分子量
先离心的原因是什么?
因为引物合成后是干粉状的,在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上,直接打开有些粉末可能会飘出去,引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底,可以避免这种现象的发生。
然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于-20度保存。
订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.
注意分装!

Ⅵ 稀释引物用去离子水可以吗

用一般的纯化水就可以了,我们一般都用哇哈哈水,呵呵

Ⅶ 合成的引物该怎么处理,用超纯水还是什么稀释

如果短期内不用,不开管-20度保存就行,开管了,用超纯水稀释就可以,一般按照说明书稀释就行,稀释后-20度保存,我用的-20度保存5年还能用,不过没评价效果降低到什么程度

Ⅷ 大家溶解引物是用dd水还是TE缓冲液

TE是弱碱性,适合于引物的保存,引物若在酸性下比较不稳定。用H2O的话,更适合于后续的PCR操作。
如果你直接使用的就可以用ddw,要保存还是用TE的好哈!

Ⅸ pcr用超纯水

最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了
一般用的是灭菌的双蒸水
保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别

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