⑴ DNA纯化的方法
DNA纯化
首先利用琼胶电泳将不同分子量的DNA片段分开,将某一特定分子量区域的琼胶切下,利用DNA extraction kit将DNA从琼胶中溶出并浓缩.
实验材料
( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列试剂来自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube
实验步骤
A.将欲分离之DNA混合物以0.7%琼胶电泳分离.
B.电泳后,将琼胶置於紫外光箱上观察,把含有欲纯化之DNA片段的琼胶部位切下.
C.将步骤B的琼胶以蓝色微量吸管尽可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分钟,每2-3分钟摇晃数次,直至琼胶完全溶解.
E.将步骤D琼胶溶液全部吸入DF Column,并套上Collection Tube(收集过滤液).
F.8000rpm离心1分钟,将过滤液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm离心1分钟,过滤液倒掉.
H.14000rpm离心2分钟.
I.将DF Column转移至上另一乾净的微量离心管.加入15ml Elution Buffer,室温静置2分钟.
J.14000rpm离心2分钟,微量离心管内之液体即为纯化的DNA片段.
K.取0.5ml纯化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%琼胶电泳,与marker比较,估计DNA的浓度.
⑵ 回收dna胶时若要稀释是用depc水稀释吗
DNA比较稳定，DEPC主要是处理RNase的，在有RNA样品时使用。
不太明白，如果是胶回收，一般都直接用试剂盒，里面带的buffer就可以用。
你说的应该是回收以后的稀释吧。主要看稀释后样品做什么用，一般用超纯水稀释就可以了。
⑶ DEPC水的制备过程，方法
无RNA酶灭菌水DEPC水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。
DEPC水：
泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。
配75％乙醇的DEPC水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。
⑷ 如何用depc水稀释dna浓度
DNA比较稳定,DEPC主要是处理RNase的,在有RNA样品时使用.不太明白,如果是胶回收,一般都直接用试剂盒
⑸ 纯化DNA时，试剂盒中说漂洗液使用前要先加无水乙醇，请问是直接把它加到购买的试剂中，还是加到每次所需的
直接加到购买的试剂中，一般15ml加60ml酒精，作用是洗去样品中的盐离子
⑹ depc处理水和depc水处理的区别
DEPC处理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水。不含杂质RNA、DNA和蛋内白质。
depc水处理是用DEPC对水进行容处理的手段方法。
⑺ depc处理水可以稀释dna酶吗
RNA提取没必要用DNA酶处理主要用途关仅仅扩某基所谓定量RT-PCR则DNA酶处理或者引物需跨exon.
比用QIAGENRNase-freeDNase处理加DNase结束除DNase（蛋白）buffer等能影响期操作素所酶解DNA必须纯化RNA（QIAGEN纯化柱）RNA才用于定量实验即使做real-time PCR都要加管仅加RNA作阴性照（排除DNA污染）
⑻ DEPC水和DEPC处理水的区别如何配制
使用浓度是1000mL水中加100微升的DEPC.
⑼ DEPC水和DEPC处理水怎么处理掉
DEPC处理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水。不含杂质RNA、DNA和蛋白质。depc水处理是用DEPC对水进行处理的手段方法。
⑽ 提取RNA时用于沉淀DNA的NaOAC如何自制，用DEPC水配制吗
一切与提取RNA有关的液体试剂，必须用DEPC水配制，这是最基本的要求，因为RNA降解酶的分布太广了，无处不在，放不胜防啊