wb用纯水压线不会稀释分离胶吗

A. wb实验中，为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致同样的电压可以吗

PH值不同,前者主要表现为浓缩效用,后者表现为电荷效用和分子筛效用.
浓缩效应主要在浓缩胶中完成,浓缩胶的pH6.8
,在这个pH条件下,缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离,
Gly的等电点为
6.0
,仅少数解离为负离子,在电场中移动速度很慢.酸性蛋白质在此pH下解离为负离子,三类离子的迁移速率为Cl一般蛋白质Gly
,电泳开始后,Cl离子泳动快,在其后留下一个低离子浓度区.
Gly在电场中移动很慢,造成移动离子的缺乏,于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区,在高压区内所有的负离子都会加速移动,当移到Cl离子区域时,高电压消失,蛋白质的移动速度慢下来,当以上稳定状态建立后,蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层,并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带,浓缩样品,从浓缩胶进入分离胶后,胶的pH升高,
Gly的离解度增大,泳动率上升,又因为它分子小,故超过所有的蛋白质分子,紧跟在Cl离子后,Cl离子迁移后,低离子浓度不再存在,形成了恒定的电场强度,因此,蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质,分子大小和形状,分离胶的孔径有一定大小,对不同相对质量的蛋白质来说,通过时收到的滞阻作用不同,即使静电荷相等的颗粒,也会由于这种分子筛的效应,把不同大小的蛋白质相互分开.

B. 我是WB新手。目的分子量180.应该用什么内参，分离胶的浓度选多少请高手指教

分子量180，有点大啊，可以试试6%分离胶
内参我们用的是GAPDH，你可以参考

C. wb 分离胶为什么不凝呢

冬天到了 胶凝的会慢很多的
前提是你东西都没问题的话

D. wb实验中，为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致同样的电压可以吗

浓缩胶的目复的使得loading的样品制能够在同一条水平线上进入分离胶，如果电压太大前端的蛋白容易在后面的蛋白赶上来前进入分离胶。而在分离是理论上（实际上也是）小电压长时间分离的效果会更好，但是在操作过程中没有必要等那么长的时间，所以就用大电压快点跑。

E. wb实验分离胶立马就凝固了行么

透明胶邮票粘在一起，要分而不损伤邮票的确是件很麻烦的事。用电吹风版或水泡等也不权失为好办法。但刚开始不要盲目用电吹风或水泡等办法用在邮票上，以免损伤邮票。你可以用透明胶粘在和邮票差不多的废纸上(最好是撕下废弃无用的邮票边纸上)做个试验，先用电吹风吹，如果没有效，再用水泡等方法。试验成功取得经验后，再用到邮票上。

F. 浓缩胶和分离胶分别发挥的作用。

1、浓缩胶的作用：

有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带，在电泳的时候可以看到样品被压成一条线。

2、分离胶的作用：

有分离分子的作用，为电荷效用和分子筛效用。当样品从浓缩胶进入分离胶时，由于蛋白的分子量不一样，其在分离胶中的泳动速度不一样，这样就能够分离目的蛋白，蛋白越大，所对应的分离胶浓度应该越小，比如90k以上的蛋白一般用6%的分离胶来分离。

(6)wb用纯水压线不会稀释分离胶吗扩展阅读：

分离胶和浓缩胶因为浓度不一样导致孔径不一样，蛋白在其中的泳动速度不一样。

浓缩胶的浓度通常为3.9%，浓度比较小；浓缩胶中的孔隙较大，起到的作用是为了让蛋白质混合物在进入分离胶之前都到达同一起跑线，以便在分离胶中更好的分开，因此一定要充分跑完浓缩胶之后再调电压。

分离胶的浓度从6%-15%不等，当样品从浓缩胶进入分离胶时，由于蛋白的分子量不一样，小分子的物质容易通过， 阻力小，迁移速度快；大分子的则受到较大 的阻力而被滞后。这样就能够分离目的蛋白。

G. 最近做WB，发现SDS-PAGE上样后开始电泳不久就看见LOADING BUFFER漏到分离胶和浓缩胶分界，请各位指教

一、可能是玻璃板没有加紧
二、浓缩胶没有凝固好，灌胶的问题
三、电压是否大了？我们常用浓缩胶80v,30min.
灌胶的问题可能性比较大，祝实验顺利

H. WB实验中9%和11.5%的分离胶凝固时间是否不同

western-blot中分离胶浓度的来选择取决于目的蛋白自分子量。 不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白。 而因为western blot的膜应该是完全覆盖SD

I. wb配分离胶时用无水乙醇压胶之后用不用水冲洗

不用水冲洗，直接加浓缩胶就好。