① 离心管和离心超滤管
离心管就来是一个简单的可自以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。
离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。
② 30kd超滤管最大转速多少
30kd超滤管最大转速4000rpm。最大不能超过4000g,离心5-8分钟,即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升。一般是用来分离血浆。血浆蛋白的分离将血清加入到30kd分子量的超滤管中,将超滤管嵌套进入嵌套管中,进行高速离心,转速12000转每分钟,离心10分钟。离心结束后,将嵌套管中的液体收集,得到初步的组织液。
③ 超滤管规格太小怎么放进离心机
1、首先将超滤内管插入所提供的一个微量离心管中。
2、其次向超滤管内管中加入不超过500微升的样本,并盖上盖子。
3、最后让盖子的连接带朝着转子的中央,用一个超滤管平衡即可。
④ 想问一下超滤离心管怎么使用啊还有它能不能重复使用
可以的,先用超声波洗干净,再用高压灭菌锅灭菌后,备用即可
⑤ 求助:第一次使用超滤离心管应该怎么处理
可能不同厂家的产品保存运输条件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。版权
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。
降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。
⑥ 超滤离心样品浓度
浓度为一毫升01mg。
超滤离心样品浓度标椎为01mg/ml,请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。
超滤离心浓缩管又称超滤离心管、或离心过滤器,其可用于实验室超滤应用,可实现较高的回收率、截留率和浓缩速度。
⑦ 取50ul国产Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白.
先回答你的问题:
Bradford溶液现在自己配也行(其实就是考马斯亮蓝溶液),不过买商品化的也很多,可以买Bradford蛋白定量试剂盒之类的东西。可以用这个试剂检测溶液中蛋白的浓度。如果要自己配,可以参考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超滤管的时候,保留在上方的是所需蛋白样品,超滤膜下方收集到的溶液就是流穿液。
这个意思应该是说,如果超滤完全保留蛋白,流穿液中理论是没有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕红色)是不应该引起溶液变色的。但是如果有蛋白,会与Bradford溶液反应,变成蓝色。但是也有问题,超滤膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比较大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白还是会进到流穿液的,会产生变色反应,而且肉眼观察变色,也没有办法给出具体蛋白的量,可能还是用仪器检测一下比较好。
⑧ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
⑨ 水处理超滤系统里面都包括什么
简单介绍3种水处理超滤系统:
1、选择膜+活性碳工艺
原水—格栅—调节池—膜处理—活性碳—消毒。
2、对优质杂排水、杂排水为中水水源的工艺
以物化处理为主 原水—格栅—调节池—混凝或气浮—过滤—消毒;
以物化+膜法为着眼点 原水—格栅—调节池—混凝—膜处理—消毒。
3、对杂排水和混合污水作为中水水源的工艺
以生化处理为主 原水—格栅—调节池—生物处理—沉淀—过滤—消毒;
用两段生化法工艺 原水—格栅—调节池—一段沉淀—二段沉淀—过滤—消毒。
工业超滤装置有板框式、管式、螺旋卷式,其中螺旋卷式应用较多。
超滤膜材料有醋酸纤维素(CA)、聚矾(PSF)、聚醚矾(PES)、聚碳酸盐树脂、聚丙烯腈(PAN)和聚合电解质络合物等。
超滤装置运行过程中,主要的运行维护内容是清洗滤膜,清洗方法分为物理方法和化学方法。
物理方法一般采用温水(40~50℃)冲洗。
化学方法是用化学清洗剂,如酸、碱、表面活性剂溶液等清洗。
对于不同种类的膜要慎重选择化学清洗剂,以防止化学清洗剂对膜的损害。经良好清洗的膜,透水率可恢复95 %~100%,超滤膜的使用寿命可达到一年以上。
在废水处理中,目前超滤主要用来去除污水中的淀粉、蛋白质、树胶、油漆等有机物,以及黏土、微生物等,此外在废水处理中还可用于污泥脱水,代替澄清池等,以及用于纯化甘醇。