『壹』 为什么做细胞实验的PBS缓冲液不含钙离子和镁离子
为什么做细胞实验的PBS缓冲液不含钙离子和镁离子
含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T)
配制方法为:称取磷酸二氢钾(KH2PO4),磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),氯化钠(NaCl),氯化钾(KCl),吐温-20 ,加水。
PBS:Phosphate Buffered Saline
PBS 1L配方pH7.4:
磷酸二氢钾(KH2PO4):0.27g,
磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g,
氯化钠(NaCl):8g,
氯化钾(KCl)0.2g,
加去离子水约800mL
充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。高温高压灭菌后室温保存。 PBS缓冲液(pH7.2~7.4):
NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L
PBS缓冲液一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用,具体试剂一般也有不同的比例配方,在针对性上就有了更好的效果。
1x PBS缓冲液就是使用0.1M的PBS配置,可直接使用,2x PBS就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。0.01M的PBS一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。
『贰』 为什么做细胞实验的PBS缓冲液不含钙离子和镁离子
因为:PBS中加来入了Na2HPO4和0.24g KH2PO4,他源们能与钙离子和镁离子,金属离子结合生成沉淀,
附:
0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
『叁』 D-Hanks液和PBS有什么区别
一、含义不同:PBS为磷酸缓冲盐溶液,D-Hanks液为(不含有钙和镁离子)平衡盐溶液。
二、用途不同:PBS是常用的用于生物学研究的一个缓冲溶液,D-Hank's常用于配制胰酶溶液、细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
三、配置方法不同:
PBS配置方法:先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL。
D-Hanks液配置方法:
1、将原液A和原液B与双蒸水(18份)混合后,分装于200ml小瓶中,10磅高压蒸气灭菌15分钟,临用前用无菌的5.6% NaHCO3调pH至7.2~7.6,最后除去钙和镁离子即D-Hanks液。
2、原液A:将NaCl(160g )、MgSO4·7H2O( 2g )、KCl (8g)、Mg Cl2·6H2O (2g)、 CaCl2(2.8g)溶于1000ml双蒸水。
3、原液B:将Na2HPO4·12H2O(3.04g)、KH2PO4(1.2g)、葡萄糖(20.0g)溶于800ml双蒸水后加100ml0.4%酚红溶液再加蒸馏水到1000ml。
(3)去钙离子镁离子的pbs扩展阅读:
1、Hanks 液为生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液,简称H。主要用于配制培养液,稀释剂和细胞清洗液,而不能单独作为细胞组织培养液。
2、PBS的用途:主要用于一些化学实验中不影响实验反应的情况下调节pH值,以便让实验的化学反应在最佳条件下进行。部分用于食品或是饲料行业加工。
3、PBS可以为三种溶液的英文缩写,分别是磷酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲盐水及 磷酸盐缓冲钠,其配制方法不同,pH值不同,发挥的生物学作用亦不完全相同。
『肆』 如何去掉水中钙离子,镁离子
1、煮沸法
由于碳酸钙不溶,碳酸镁微溶,所以碳酸镁在进一步加热的条件下还可以与水反应生成更难溶的氢氧化镁。由此可见水垢的主要成分为碳酸钙和氢氧化镁。
2、石灰——纯碱法 (工业用)
在这种方法中,暂时硬度加入石灰就可以完全消除,HCO3-都被转化成CO32-。而镁的永久硬度在石灰的作用下会转化为等物质的量的钙的硬度,最后被去除。反应过程中,镁都是以氢氧化镁的形式沉淀,而钙都是以碳酸钙的形式沉淀。
3、离子交换法
这种方法中用到的离子交换剂,有无机和有机两种。无机离子交换剂,如沸石等;有机离子交换剂包括:碳质离子交换剂——磺化酶,阴阳离子交换树脂等。而且一般的离子交换剂在失效后还可以再生。
(4)去钙离子镁离子的pbs扩展阅读:
钙离子的检验
焰色反应:若某物质的焰色为砖红色,则该物质含Ca2+
1、取一铂丝用稀盐酸酸洗后灼烧,反复多次,直至火焰变为无色.
2、将钙产品放在碾钵中用,玻璃棒碾成粉末.
3、用铂丝分别蘸一些粉末放置酒精灯上灼烧,观察火焰的颜色.
水中钙离子的测定
测定钙、镁离子的可靠方法为重量法,这种方法手续繁琐,分析速度慢,目前常用的方法是EDTA络合滴定法,EDTA络合滴定法适用于工业循环冷却水中钙含量在2-200mg/l,镁含量在2-200 mg/l的测定,也适用于其他工业用水及生活用水中钙、镁离子含量的测定。
『伍』 D-Hank’s 液与PBS的区别
PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液,一般选择K2HPO4和KH2PO4配制,因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液,称量不同质量的磷酸盐,也可以用pH计调溶液的pH。PBS一般用作支持电解质。其配置方法如下:采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液,按以下步骤进行:(1) 配制1/15mol/L KH2PO4,即每升水中溶解9.078克KH2PO4; (2) 配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O,即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;(3) 将18.2%(体积分数)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;最终 测定PBS液的PH值约为7.4。
Hank\'s配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14; NaHCO3 0.35;KH2PO 4 0.06;Glucose 0.34(g/l);
D-Hank' s:不含钙离子、镁离子、葡萄糖。
『陆』 如何去除钙镁离子
除去钙、镁离子的方法那就是加入碳酸钠,因为碳酸钙和碳酸镁都是沉淀,所以之后可以通过过滤的方式除去。根据你给的数据,每升溶液中加入碳酸钠11.34克,刚好可以完全除去两种离子。除去后剩下是钠离子本身就是盐的一种成分,所以不影响品质。