离子交换层析的影响

㈠ pH值是如何影响离子交换分离的

离子交换色谱中，PH的影响极大。要知道为何能够利用pH梯度改善分离选择性？就得知道其原理：版
离子色谱权是利用相反电荷之间的相互作用来分离的，当检测物质带负电荷时，要选择阴离子色谱柱，阴离子色谱柱带正电荷的配基，进行阴离子-阳离子交换，结合带负电荷的分子，经过交换后检测物质的带负电荷的分子就会吸附色谱柱上，然后在用高盐洗脱，洗脱的组分先后进入检测器，就达到了检测的目的。
当检测物质带正电荷时，道理类似，自己想吧。
pH梯度可以改变检测物质电荷、偏离等电点的程度，从而影响带正/负电荷的分子（或离子）与色谱柱的结合能力（可以认为是牢固程度），洗脱时的难易程度就改变，从而改变了分离选择性。

㈡ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性

1，离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大，需要重回新填充答。同时，也造成固定床填充过程操作麻烦，而且密封性要求高。2，蛋白质分离纯度问题，如果在出峰之后再行切换接收馏分，而在峰行下降后提前切换，虽可以保证纯度，但蛋白分离收率则会下降。3，由于交换层析介质决定，不同蛋白质相互分离效果也不确定，这种分离，也易造成各蛋白峰重叠，造成分离纯度下降。4，自动化程度不高。主要也是受固定床以及树脂交换饱和当量无法保持长期稳定造成的。无法像液相色谱柱那样，可以在标样标定后，建立方法，自动分离目标蛋白。5，不过，规模化分离纯化蛋白质过程，使用这种层析法，还是具有一定优势的。
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详细资料请参考：
离子交换层析: http://proct.bio1000.com/100474/

㈢ 什么因素可影响离子交换柱层析法分离氨基酸

柱温；
柱长径比；
进料量；
进料浓度；
洗脱速度；
洗脱液pH；
交换柱配体的极性强弱；
树脂交联度；
树脂粒径等因素都会有影响。

㈣ 离子交换色谱中缓冲液浓度的影响

主要体现在以下几个方面：
1、分离能力：缓冲液浓度的变化会影响离子交换树脂上的离子交换作用，从而影响不同离子之间的分离效果。通常情况下，随着缓冲液浓度的增加，同种姿森早离子之间的排斥力会增强，而不同离子之间的吸引力会减弱。
2、保留时间：缓冲液浓度的变化还会影响离子交换的保留时间。一般来说，缓冲液浓度越高，保留时间越长，反之亦然。
3、pH值：缓冲液的浓度和组成也会对溶迹雀液的pH值产生影响，进而影响离子交换的分离效果和保留时间。在离子交换色谱分析中春陵，选择合适的缓冲液浓度和组成可以通过调节溶液的pH值来优化分离效果。

㈤ 柱层析原理及影响因素

柱层析总的原理，就是让目标蛋白结合在层析填料（树脂）上，然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来，以达到纯化的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考
免疫亲和层析
原理：亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上，且蛋白质与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学相互作用，可以是由于静电学的相互作用或是分子间疏水的相互作用，也可以是范德华力或氢键结合力产生的。
影响因素：主要是亲和标签的完整程度，缓冲液的组分。
离子交换层析
原理：离子交换对分子的分离是基于它们表面净电荷的差异。以蛋白质为例，它由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说，其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的，而离子交换层析正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。
影响因素：主要是缓冲液的pH值，盐浓度。
疏水相互作用层析
原理：疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下，任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用，而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。
影响因素：环境温度，盐浓度。
凝胶过滤层析
凝胶过滤根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。以蛋白质为例，因为分子不与凝胶填料结合，故缓冲液成分不会直接影响分辨率。
影响因素：蛋白质分子量。

㈥ 请教离子交换层析与亲和层析方面的问题

亲和层析是通过层析介质表面键合的配基与目标物质特异性吸附，然后非目标物流穿，再改变流动相是目标物质的特异性吸附消失，从而达到纯化目的。凝胶层析是通过层析介质孔径的设定，使分子量大小相差比较大的物质通过的路径不一样，从而达到分离效果。离子交换是通过层析介质表面的带电荷的基团与目标之间产生吸附，通过改变盐浓度使吸附力的大小改变，从而使不同的物质解吸的速度不一样，达到分离的效果。离子交换又分阴离子交换和阳离子交换。一般来说以上三种，离子交换应用面最广，亲和特异性最好，体积排阻的话只能对分子量差距很明显的物质进行分离。

㈦ 交换容量的影响因素

影响交换容量的因素很多，主要可以分为两个方面，一方面是离子交换剂颗粒大小、颗粒内孔隙大小以及所分离的样品组分的大小等的影响。这些因素主要影响离子交换剂中能与样品组分进行作用的有效表面积。样品组分与离子交换剂作用的表面积越大当然交换容量越高。一般离子交换剂的孔隙应尽量能够让样品组分进入，这样样品组分与离子交换剂作用面积大。分离小分子样品，可以选择较小孔隙的交换剂，因为小分子可以自由的进入孔隙，而小孔隙离子交换剂的表面积大于大孔隙的离子交换剂。对于较大分子样品，可以选择小颗粒交换剂，因为对于很大的分子，一般不能进入孔隙内部，交换只限于颗粒表面，而小颗粒的离子交换剂表面积大。本文来自:博研联盟论坛
另一些影响因素如实验中的离子强度、pH值等主要影响样品中组分和离子交换剂的带电性质。一般pH对弱酸和弱碱型离子交换剂影响较大，如对于弱酸型离子交换剂在pH较高时，电荷基团充分解离，交换容量大，而在较低的pH时，电荷基团不易解离，交换容量小。同时pH也影响样品组分的带电性。尤其对于蛋白质等两性物质，在离子交换层析中要选择合适的pH以使样品组分能充分的与离子交换剂交换、结合。一般来说，离子强度增大，交换容量下降。实验中增大离子强度进行洗脱，就是要降低交换容量以将结合在离子交换剂上的样品组分洗脱下来。本文来自:博研联盟论坛

㈧ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性

1. 因为抄离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附，在某些情况下可能难以判断结合的蛋白质是否为当初设计的目的蛋白。

2. 离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷，如果蛋白质结构比较特殊，可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。

3. 离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。

㈨ 离子交换层析名词解释

解释：

离子交换层析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子提纯中得到最广泛应用的方法之一。

离子交换层析分离蛋白质是根据在一定pH 条件下，蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸型的羧甲基纤维

离子交换层析分离蛋白质是根据在一定pH 条件下，蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸型的羧甲基纤维

离子交换层析分离蛋白质是根据在一定pH 条件下，蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸型的羧甲基纤维

㈩ 离子交换层析层析柱上样体积大会导致什么

影响分辨率。离子交换层析层析柱上样体积大会受外界影响较大，体积可能随离子强度和pH变化有较大改变，影响分辨率。离子交换层析是一种根据被分离物质的分子表面电荷性质来分离的吸附层析，通过电荷性质分离相反电荷性质之间的作用，蛋白质上的电荷与填料表面的电荷相互作用。