流动相过滤超声

⑴ 高效液相色谱的流动相要经过过滤，那标准品和待测样品需不需要过滤呢我是用大鼠脑里的纹状体测的。

当然要过滤，尤其是一些溶解性不好的样品~

样品用针式过滤器就可以。我一般就使用0.22um针头过滤器

生物制品配置时尽量用薄膜滤过的溶剂，最后注入进样瓶前用针头过滤器过滤.我做中药检测时一般提取后滤纸过滤，进样前用0.45nm的过滤下就好了。

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⑵ 液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题

1、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

2、做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。

3、流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。

4、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置或更长时间。

5、在更换两种互不相容的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后再用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。

⑶ 高效液相色谱仪操作流程

高效液相色谱仪操作流程为开机、超声、排气、走基线。

1、开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤，有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）

注意：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。

数据分析：

色谱得到的原始数据为色谱图，我们需要对途中的色谱峰进行积分，获得峰面积，并根据实验需要，使用不同的方法进行定量计算，比如外标法，内标法，面积百分比法等。

仪器还可以得到光谱或者质谱信息，我们可以通过色谱柱数据软件的对应功能得到光谱图及质谱图，获得定性信息。

获得所需信息后，可以利用色谱软件将结果输出成不同格式的报告，或将处理好的结果导入其他软件（如统计分析）进行二次处理。

⑷ 乙腈水流动相需要超声吗

需要。将20体积的乙腈和80体积的水混匀，用有机膜抽滤，超声脱气。乙腈在纯度满足要求的前提下，还需要超声而且要过滤后才能用作流动相。

⑸ 高效液相色谱的流动相要经过哪些处理

流动相要先过滤，超声脱气后方可使用。
另外选用试剂是要选用色谱级的专，过滤时选择合属适的滤膜。流动相最好现配现用，不要保存太长时间。
使用旋转蒸发仪上的真空泵 抽空气20min，可以达到脱气的作用。使用滤膜过滤掉杂质。
流动相必须过滤膜，用前要超声除气泡半个小时左右，否则基线不稳
仪器和色谱柱先要用有机溶剂（如乙腈等）好好清洗一下，待基线平衡后才能进一步工作，乙腈和水混合的流动性最好先超声抽滤脱气，准备工作做好了会节省好多时间。
若用色谱纯的乙腈和超纯水做流动相，流动相可以不用过滤膜，但超纯水需要超声约30分钟脱气。

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⑹ 高效液相色谱法测定时,流动相合样品均应先过滤和超声波,为什么

流动相需要过滤、超声，过滤是除去固体杂质或异物，同时驱除溶解的气体，超声进一步驱内除溶解的气容体。样品需要过滤，防止不溶性物质堵塞系统的管路，样品不需要超声，超声过程往往伴随温度升高，样品一旦温度升高液体的体积会改变，浓度发生变化，影响到结果的准确性。

⑺ 为什么高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤，脱气

用于高效液相色谱的流动相必须事先除气，否则容易在系统中逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性，甚至使其无法检测。

噪音增加，基线不稳定，突然跳跃。此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。溶解气体也会引起溶剂ph值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。

常用的除气方法有加热沸腾、抽真空、超声波、吹氦等。

高效液相色谱（hplc）是色谱的一个重要分支。以液体为流动相，高压输液系统，将不同极性的单溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入固定相色谱柱。分离柱中的组分后，用检测器检测。实现了样品的分析。

(7)流动相过滤超声扩展阅读：

液相色谱-质谱联用（LC-MS）可增加额外的分析能力，准确识别和量化细胞和组织裂解物、血液、血浆、尿液和口服液等复杂样品基质中的微量化合物。

流动相和固定相都是液体。流动相与固定相应不相容（极性不同，避免固定液流失），界面清晰。当样品进入色谱柱时，溶质分布在两相之间。达到平衡后，遵循高效液相色谱的计算公式。

公式中cs溶质在固定相的浓度、cm溶质在流动相的浓度、vs固定相的体积和vm流动相的体积。llpc与gpc有相似之处，即分离顺序取决于k值较大的组分的保留值，但也存在差异。在gpc中，流量对k的影响较小，而llpc流量对k的影响较大。

⑻ 液相色谱的流动相配置完成后是先过滤还是先进行超声

过滤后，超声效果会更好，或者可以减少时间

⑼ 液相色谱法中应该怎么解释组分的洗脱顺序

使用高效液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。

用等度洗脱进行色谱分离时，由不同溶剂构成的流动相的组成，如流动相的极性、离子强度、pH值等，在分离的全过程中皆保持不变。用梯度洗脱进行色谱分离时，在洗脱过程中含2种或两种以上不同极性溶剂的流动相组成会连续或间歇地改变，其间可调节流动相的极性，改善样品中各组分间的分离度。

使用梯度洗脱时，也会使干扰分离的强保留杂质组分在较短的时间内从柱中清楚，使色谱柱保持干净状态，以进行下一次的分析。梯度洗脱一般是指流动相的组成随分析时间的延长呈现线性变化，即线性梯度洗脱，可用于反相和正相高效液相色谱仪及离子对色谱法。

(9)流动相过滤超声扩展阅读：

注意事项：

1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。