dmso溶解药物后过滤

1. 我是做药物筛选的，用Hela细胞筛选药物时，MTT染色后，吸取培养基，加完DMSO之后有部分孔不溶（蓝紫色固体

加完DMSO之后MTT并不会很快溶解，需要震荡加速溶解，时间不定。
那你需要确定药物的浓度是否过大、药物溶解性、是否可能与MTT有反应等潜在的原因.

2. DMSO如何溶解

1. 用油泵减压蒸出来
2.若用水洗，建议用乙醚萃取。乙醚的效果会比EA好些。它对DMF，DMSO溶解度稍小。
2. 我用的DMSO 主要是,加入3倍的水,再用乙醚萃取,尝试一下吧,祝成功
3. 产物不溶于水的都可以采用水洗除去dmf与dmso 加大量水 有机溶剂萃取 收集有机相 饱和食盐水洗 干燥 过滤 旋蒸溶剂即可
4. 这两种溶剂都不是太好处理，DMSO极性更大一些，沸点也更高，黏度更大，稳定性更差，要除尽更困难。DMF通常用旋蒸再加用低沸点溶剂带几次一般还是可以除尽的，但DMSO要除尽非常困难，旋蒸不太容易蒸去，水洗也存在这个问题，而且要多次洗，易造成产物损失。在反应过程中，DMSO对碱稳定性不够，易产生自身歧化反应，如果闻到恶臭味就说明产生了歧化反应或分解反应。在100度下反应用DMF足够了。
5. 一般反应（前提是这两种溶剂均不参与反应）可能还是倾向于用DMF多些，DMSO粘度大些，去除相对要难一点，去除这两种溶剂，一般可在既有产物又有溶剂的混合物中加入适量水，装有产物的瓶子外面用干冰+丙酮使其结冰，转至冻干机冻干即可得到较为干净的产物
6. 极性小的化合物，后处理水洗就好了，冰水：DMF或DMSO 10：1 （体积比）肯定能洗掉的，
如果你的产物的极性比较大的话，可以试试装一个硅胶柱，然后把DMF或者DMSO的反应液直接上柱，然后用DCM冲洗，DMF或者DMSO会很快的冲下来，当然还会带有一些杂质，然后再改变洗脱剂的比例把产物冲下来就好了

3. MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜（DMSO）溶解甲瓒后溶液颜色深的孔 吸光度反而低

MTT原理
\x09MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名：噻唑蓝.是一种黄颜色的染料.
\x09MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济. 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害.
MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好. 需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数.在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内.
\x09MTT一般最好现用现配,过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了.
\x09MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
\x09配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解.PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L.
普通MTT法实验步骤：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细
\x09胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2: 培养细胞：同一般培养条件,培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）.3：呈色：培养3-5天后,每孔加MTT（噻唑蓝）溶液（5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,
\x09终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液.
\x09每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分融解.4：比色：选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为
\x09横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线.
药物MTT法实验步骤贴壁细胞：1: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-
\x0910000 孔,（边缘孔用无菌PBS填充）.2: 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上,
\x09细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午
\x09加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况3: 5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4h.若药物与MTT能够反应,
\x09可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液.5: 终止培养,小心吸去孔内培养液.6: 每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解.在酶联免
\x09疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值.7: 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介
\x09质、培养液、MTT、二甲基亚砜）.
悬浮细胞：1: 收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640（无血清）培
养基40ul ；②加Actinomycin D（放线菌素D有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100g/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔）,共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）.每板设对照（加100l 1640）
2: 置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4 h.（悬浮细胞推荐使用
WST-1,培养4 h后可跳过步骤4）,直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）
\x094、离心（1000转x10min）,小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解.在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值.
\x095、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜DMSO）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）,每组设定3复孔.
注意事项：(1) 选择适当得细胞接种浓度.(2) 避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验.在呈色后尽量吸尽孔
\x09内残余培养液.(3) 设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照.其他试验步骤保持一致,
\x09最后比色以空白调零.
(4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间,超出这个范围就不是直线关系.
\x09(5) 用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适
\x09根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液,便于
\x09DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定
\x09(6) 一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值.

4. 药物溶于DMSo后加水稀释，析出怎么处理

水是该药物的不良溶剂，DMSO容易溶解的药物，在水中并不一定容易溶解。因此该药物的DMSO溶液加水稀释后，因溶解度降低就析出了，这是很正常的现象。

在细胞膜上打洞，使细胞内的水分子能渗透出来，从而防治冷冻细胞时，细胞内冰晶的形成，而破坏细胞。所以在做细胞冻存时它是必不可少的。

但DMSO又能损伤细胞使用它时需要有一定浓度，一般采用的是终浓度10％就行了。最大浓度药物的DMSO含量是0一般来说，培养基中浓度为小于0.5%就可以了。

(4)dmso溶解药物后过滤扩展阅读：

无色粘稠液体。可燃，几乎无臭，带有苦味，有吸湿性。除石油醚外,可溶解一般有机溶剂。 能与水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二恶烷和芳烃化合物等任意互溶，不溶于乙炔以外的脂肪烃类化合物。

有强烈吸湿性，在20℃，当相对湿度为60%时，可从空气吸收相当于自身重量70%的水分。该品是弱氧化剂，不含水的二甲基亚砜对金属无腐蚀性。含水时对铁；铜等金属有腐蚀性，但对铝不腐蚀。

对碱稳定。在酸存在时加热会产生少量的甲基硫醇；甲醛；二甲基硫；甲磺酸等化合物。在高温下有分解现象，遇氯能发生激烈反应，在空气中燃烧发出淡蓝色火焰。

5. 【求助】请问有Dmso做溶剂的反应，后处理怎么操作

有机溶剂萃取，水洗；乙醚最好，和DMSO不太互溶产物要是溶于水的话就加适量有机溶剂，放冰箱里冻，然后趁冷过滤，最后剩很少量的DMSO根据你的需要考虑要不要过柱子

6. 细胞实验，DMSO溶解药物，求助给位

你好，DMSO是一种细胞保护剂，它的作用机理是在细胞膜上打洞，使细胞内的水分子能渗透出来，从而防治冷冻细胞时，细胞内冰晶的形成，而破坏细胞。所以在做细胞冻存时它是必不可少的，但DMSO又能损伤细胞使用它时需要有一定浓度，一般采用的是终浓度10％就行了。最大浓度药物的DMSO含量是0一般来说，培养基中浓度为小于0.5%就可以了，但据实验观察小于0.25%肯定没有问题。相关要求不超过1%祝你健康

7. 如何除去聚合产物中的DMSO溶剂

晚上好，如果确定聚合物里的溶剂只有DMSO一种，可以用真空干燥的方式来脱除，对于高沸点其他液相溶剂比如难挥发的邻苯二甲酸酯、脂肪酸酯和苯甲醇效果也很好，请酌情参考。DMSO是极性非质子溶剂不比无水甲乙醇那么易燃，把你的聚合物尽可能碾成薄片，如果能耐100度以下更好（穷得叮当响就买个真空脱泡桶+2L的旋片泵插上慢慢抽吧）。

8. 10%的DMSO溶解的药物需要过滤除菌吗

建议还是滤菌，来保险一些自。药物的话，用DMSO溶解后，再加入培养基培成母液，然后过滤；冻存液的配置可采用两种方法，方法一是：把DMSO拿去高压消毒；方法二是，直接配好冻存液，再过滤一遍，分装成10ml的小管，可以保存在－20度中，。因为虽然说DMSO不长菌，但是你有可能接触DMSO的瓶口、瓶壁，还是存在污染的可能性，安全起见，还是应过滤一次的。

9. 做mtt实验时，自由药用dmso溶解后用pbs稀释后又析出怎么办

加完DMSO之后MTT并不会很快溶解，需要震荡加速溶解，时间不定。
那你需要确定物的浓度是否过大、物溶解性、是否可能与MTT有反应等潜在的原因.

10. 100%DMSO溶解药物以后下一步再用什么稀释

100%DMSO溶解药物以后下一步再用什么稀释
为了保证DMSO在细胞悬液里的浓度不大于0.1%,
就不好继续用DMSO继续稀释药物了。