『壹』 分子筛，亲和，离子交换三种层析方法比较，具体蛋白质样品如何选择此类方法
现在做异源表达亲和用的多，因为可以在目标蛋白上加入譬如6xHis这样的标记，然后用镍柱分离
根据目标蛋白的分子量，用分子筛根据大小来获得目标蛋白，同时还可以除去杂质
离子交换需要你知道目标蛋白的性质，除非对该蛋白很熟悉才用
『贰』 分离纯化常用的色谱分离方法有哪些它们的原理是什么
1、色谱方法根据分离机制的不同可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶过滤内（分子容筛）色谱和亲和色谱等。2、（1）吸附色谱法是指混合物随流动相通过吸附剂时，由于该吸附剂对不同物质有不同的吸附力而使混合物分离的方法。（2）分配色谱系法是利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。（3）离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法进行分离。（4）凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。（5）亲和色谱法是将相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。
『叁』 国家推荐分离方法除了膜法还有什么
你的问题不具体，常用的化工和生化工程方面的分离方法包括：层析（离子交换、分子筛、亲和层析）、离心、沉淀、盐析、萃取、蒸馏/分馏、等等。根据物料要求选择合适的分离方法。
『肆』 请教离子交换层析与亲和层析方面的问题
亲和层析是通过层析介质表面键合的配基与目标物质特异性吸附，然后非目标物流穿，再改变流动相是目标物质的特异性吸附消失，从而达到纯化目的。凝胶层析是通过层析介质孔径的设定，使分子量大小相差比较大的物质通过的路径不一样，从而达到分离效果。离子交换是通过层析介质表面的带电荷的基团与目标之间产生吸附，通过改变盐浓度使吸附力的大小改变，从而使不同的物质解吸的速度不一样，达到分离的效果。离子交换又分阴离子交换和阳离子交换。一般来说以上三种，离子交换应用面最广，亲和特异性最好，体积排阻的话只能对分子量差距很明显的物质进行分离。
『伍』 亲和层析的原理
4 亲和层析
4.1 原理 亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统.这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别.常用的生物亲和关系有酶-底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子,抗体-抗原,激素-受体蛋白、载体蛋白,外源凝集素-多糖、糖蛋白、细胞表面受体,核酸-互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等 〔10,11〕 .
4.2 离子交换剂 亲和层析的层析剂可分为3个部分:
（1）载体,载体起支架作用,一般是偶联凝胶或多孔玻璃珠.
（2）间臂,由于生物大分子的空间位阻作用,需加一间臂,其长度具有重要作用.太长则增加了非特异性疏水吸附作用,太短则起不到应有的作用.
（3）配基,这是亲和层析的核心物质,在分离中起特异性吸附欲分离物的作用.配基一般分为天然配基（包括糖结合配基和蛋白质结合配基）、染料配基、氨基酸类亲和配基、核苷酸及核苷酸类似物配基和仿生配基等几类.其中利用计算机辅助设计的仿生配基 〔12～15〕 和膜层析 〔16〕 代表了亲和层析的发展方向.不仅是配基本身的结构,它们与载体的连接方法也与层析的分离能力有关 〔17〕 .
4.3 影响因素与洗脱 亲和层析中配基与欲分离物吸附作用的大小主要与配基的空间结构有关,因此可以用分子间相互作用的平衡常数K D 来衡量亲和作用强度 〔18〕 .但它们的结合力仍不外乎对应的功能基团之间的氢键、静电作用、疏水作用等.所以,除了可改变配基以改变亲和层析的作用强度以外,还可以通过改变pH和离子强度的方法来改变配基与生物大分子之间的亲和力,从而达到洗脱的目的 〔19〕 .但由于亲和层析的多样性,洗脱的条件常常需要通过实验来获得.除此以外,还可运用其它配基、抑制剂等物质与出层析剂上的配基或生物大分子产生竞争性结合,达到洗脱的目的,这种方法被称为专一性洗脱.专一性洗脱可以获得很高的分辨能力,但洗脱剂的价格较高,所以常与普通洗脱配合使用.值得注意的是,在洗脱时,会有少许配基与蛋白质一同被洗脱下来,因此常在其后加一凝胶层析以除去小分子的配基.
4.4 应用及举例 在实际使用中,配基与欲分离蛋白质之间的亲和力要控制在一定的范围之内,这是因为若亲和力太低,则分离的效果不好;若亲和力太高,则洗脱太困难.因此配基与欲分离蛋白质之间的K D 值一般控制在10 -4 10 -6 之间
『陆』 要通过分子筛、离子交换、亲和层析从一稀蛋白混合物中纯化出目的蛋白，上述三种层析的顺序怎么安排合理
浓度低的话可以先亲和，减小体积。然后离子交换，最后分子筛，顺便除盐。但离子交换下来体积不能太大。否则就要先分子筛了。
『柒』 离子交换层析和亲和层析都可以用来分离所有的蛋白质吗
理论上来说离子交换层析可以用来分离所有的蛋白质，但亲和层析只能内分离能和其特异性结容合或者说带tag的蛋白质。
从实际应用来说，离子交换层析不可能能用来分离所有的蛋白质。这是因为其分辨率没有办法达到分离所有蛋白质。而且蛋白与蛋白之间可能存在其他的相互作用，造成某个盐浓度下被洗脱的蛋白可能会吸附其他蛋白一起被洗脱，达不到分离的效果
亲和层析就更不可能分离所有的蛋白质了，不管是哪种亲和层析都有对应可以特异性吸附的亲和标签蛋白。如果没有亲和标签，所有的蛋白都是不能吸附的
『捌』 蛋白分离纯化所使用的填料有哪些
从方法上来讲，主要是亲和层析、离子交换、分子排阻（分子筛）、疏水层析和反相层析这5种；但具体到每个实验，就会根据您的实验目的（蛋白的纯度、活性、量产以及用途的不同），以及蛋白本身的性质不同（真核或原核、水溶性、稳定性、有无修饰、理化性质等），来设计合理的纯化方法，进而选择不同类型、分辨率和性价比的填料。
一般科研实验室，有限考虑亲和层析填料，若有更高的纯度要求，再考虑不同分辨率的离子交换或分子筛填料。
蛋白纯化，GE的填料是最丰富，也是最稳定的，你可以参考最新的GE 凝胶选择指南。
如，我在文库钟搜的2014版的：
http://wenku..com/link?url=XIgERGPVdEqYRPs-_IG_-