超滤浓缩抗体时沉淀

⑴ 常有的蛋白浓缩方法有哪些

蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1.丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2.免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3.硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析），选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！ 4.（低温）有机溶剂沉淀法：强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮……注意：Mg2+离子，pH值 5.聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀！ 6.超滤法：主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性！不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的！ 7.透析法：主要用于更换蛋白质的缓冲液！的有透析袋！不需要特殊的仪器！ 8.离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩！ 9.冷冻干燥法：在冷冻状态下让扬品种的液体升华 参考网址on http://www.bio1000.com/experiment/biochemical/351804.html

⑵ 为什么抗体配好后会出现黄的沉淀

你指的抗体配好后，是指的抗体溶液稀释好以后，还是直接干粉抗体溶解以后？
如果是稀释引起沉淀，可能需要查看稀释溶液中是否有什么物质会引起抗体沉淀，或者是溶液的pH值是否发生了改变，重新配稀释液再试试。
如果是溶解干粉的时候形成的沉淀，则通常沉淀有可能来自于冻干后无法复溶的抗体，或者是杂质。至于颜色来源，有可能是抗体上标记的染料的颜色，或者就是之前抗体粉剂就有一些泛黄了。无论是哪种原因，沉淀的出现都会造成抗体效价的下降，因为可能有一部分有效的抗体已经去到沉淀中，无法使用。当然也不排除抗体浓度很高，即使损失一部分沉淀，仍然有较高的效价的可能。

保证在溶解的时候，加入了足量的溶液，且充分溶解，例如可以在室温放置2h，间或来回颠倒混匀，以查看溶解度是否增加。如果确实有一部分不溶解，拍照后，低速离心，取上清测蛋白浓度（280nm），如果浓度太低了，则建议与厂家联系更换。如果浓度还可以的话，可以尝试继续实验。

⑶ 求教抗体怎样浓缩

抗体浓缩的方法有很多，你要是想简单的只是去除其中的水分，来浓缩的话，那可以通过冷冻干燥法来浓缩抗体；如果是想纯化抗体然后在浓缩的话，那方法就多了，硫铵沉淀法最常用，不过现在很多实验室都在用亲和层析柱来洗脱与吸附剂不同亲和力的蛋白，然后再冷冻干燥即可。 当然方法很多。谈了一下自己的想法，希望对你有帮助！

⑷ 的抗体，放置一段时间以后为什么会出现白色絮状沉

抗血清(兔抗鸡血清) 试剂 1.乙酸—乙酸钠缓冲液：60mmol/L,pH4.0 2.10×磷酸盐-NaCl 缓冲液(PBS):100mmol/LPBS,pH7.4.称NaCl 80g、Na2HPO4 12H2O 29g、KCl 2g 、KH2PO4 2g,加蒸馏水溶解,加入100mmol/LEDTA 20m1,用去离子水定容至l000mL.3.透析液 10mmoL／L Na2HPO4- KH2PO4缓冲液,含15mmol/LNaCl,pH7.2.4.硫酸铵 5.辛酸四、操作步骤 1.抗血清用4倍体积乙酸—乙酸钠缓冲液稀释,用0.1mol/LNaOH 调至血清稀释液为pH4.5； 2.室温下边搅拌(磁力搅拌器或电功搅拌器),边缓慢滴加辛酸(25mL/L 血清稀释液),滴加完后继续搅拌30min.3.离心(10000r/min,30min),收集上清夜,弃去沉淀； 4.上清液用多层纱布过滤； 5.按l/10体积加入10×PBS,用5mol/LNaOH 调至PH7.4.6.上清液4℃预冷,计算溶液总体积,在4℃按277g/L 加入硫酸铵粉沫(45％饱和度),边加边搅拌,加完后继续搅拌30min.7.离心(5000r/min、15min),弃去上清液.收集沉淀.8.沉淀用少量透析液溶解(一般为血清体积的1/10),透析并更换两次透析液或用Sephadex G-50脱盐.9.Ig 溶液在50~55℃水浴中加热20min,离心(5000r/min,20min),上清液-20℃保存或冻干保存.

⑸ 用疏水层析法分离一种蛋白质类药物的具体步骤

超滤是一种具有分子水平的薄膜过滤手段，超滤膜作为分离介质，以膜两侧的压力差为推动力，将不同分子量的溶质进行选择性分离。超滤过程一般是在常温低压下进行的，对分离热敏性、保味性和易发生化学变化的物质最为适用。在生物合成药物中主要用于大分子物质的分级分离和脱盐浓缩，小分子物质的纯化，医药生化制剂的去热原处理等。
1除热原
制剂中去除热原一般是利用活性碳反复吸附，该方法劳动强度大、损耗大、得率低。超滤去除热原的原理是使用小于热原分子量的超滤膜拦截热原，该方法已经得到美国食品与医药管理局认证，具有劳动强度小、产品得率高、产品质量好的优点。
上海第四制药股份有限公司采用卷式超滤器小装置，以截留分子量2万的膜进行了硫酸（双氢）链霉素药除热原试验，试验结果表明，采用超滤法代替传统的活性炭吸附热原，对于硫酸（双氢）链霉素生产是可行的。上海福达制药有限公司采用截留分子量1万的磺化聚醚砜膜（SPES），进行黄芪注射液的除热原超滤，再经活性炭吸附，使产品热原合格率从原来的经常波动到目前的100%合格。上海天厨味精厂采用截留分子量为1万的SPES超滤膜，对丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸等氨基酸溶液除热原，通过鲎试剂法测试结果，结果均为阴性。
由于药液有效成分（如黄酮类、生物碱类、总甙类等），其分子量都在1000以下。故对制药制剂尤其是注射剂使用超滤除热原是最适合的。空军北京医院药局用超滤法制备了复方丹参、茵栀花、生脉3种复方中草药注射液，所得超滤产品澄清度好，放置3个月后，无沉淀出现。用化学分析法对注射液中的鞣质、蛋白质、淀粉等项含量进行测定，结果显示超滤过的产品中，上述杂质的含量均低于卫生标准，除杂质的效果很好。实验证明，经超滤处理后的去热原注射液并不会使原方有效成分损失。如复方丹参超滤品测得的281nm光密度值较高，薄层层析检测出有原儿茶醛斑点，可见的斑点及其荧光点多且清晰。张英辉采用超滤法去除人参皂苷热原，结果发现：超滤法可有效的去除热原，又可有效的减少人参总皂苷的损失，该法简便、可靠、效果好，可用于去除人参皂苷热原。
北京中医药大学药厂对比了活性碳和超滤两种工艺，发现对清开灵注射液除热原，两种工艺均可行，但超滤法得到产品中：黄岑甙的含量高，产品颜色浅，微粒数量明显少。利用超滤膜过滤川参通注射液、冠舒注射液、松梅乐注射液及大输液中的热原，实验表明，药液通过超滤后，热原的截除率获得满意的结果，达到药典的规定，去除热原是可靠的。超滤不但可去除热原，还能去除大于膜孔的高分子物质，提高注射液的澄明度和稳定性，而且超滤膜孔径越小，脱色作用越明显。
2小分子精制
对于抗生素类的小分子物质，其传统的生产过程，要经过过滤、萃取、浓缩、结晶等工艺，存在过程冗长、收率低、能耗大等缺点，而且在精制过程中有微量大分子杂质残留，如蛋白质、核酸、多醣等，这些杂质可能对人体产生副作用。利用超滤膜可以除去大分子杂质，简化操作工艺。
青霉素是一种热敏性物质，其活性单位受环境影响较大，温度稍高或者处理时间延长均会导致活性单位降解。因此青霉素精制要求在15℃以下快速完成。目前青霉素精制过程中，需要加入十五烷基溴化吡啶作为破乳剂，而该破乳剂毒性大、价格昂贵，采用超滤工艺去除发酵副产品和残留物以及一些可溶性蛋白质，无需加入破乳剂，而且过程简单快捷。
超滤系统已应用于红霉素、青霉素、头孢菌素、四环素、林可霉素、庆大霉素、利福霉素等抗生素的过滤生产。美国Merck公司利用截留分子量为2.4万的超滤膜过滤头霉素发酵液，收率比铺有助滤剂层的鼓式真空过滤机高出2%,达到98%,材料费用降低2/3,设备投资费用减少20%。另外利用超滤膜可有效地对头孢菌素C发酵液进行加工处理，而不使膜堵塞或结垢，提高回收率，使得浓缩液中头孢菌素C的浓度比原发酵液中的更高。韩少抑等利用超滤膜提纯螺旋霉素，发现：截留分子量为5000的芳香聚酰胺超滤膜能去除蛋白等大分子杂质，起到纳滤预处理作用。
维生素C是人体必需的一种营养成分，在医学和营养学上有着广泛的应用。目前，维生素C的生产方式主要有两种：莱式法和两步发酵法。其中两步发酵法是我国科技人员首创的生产工艺，此工艺工程中常采用加热沉淀法去除杂质，既耗能又造成有效成分古龙酸损失，收率也低。采用超滤膜系统代替加热沉淀法去除发酵液中残留的菌丝体、蛋白质和悬浮微粒等杂质，省去了预处理、加热、离心等工序，既节约了能耗又提高了古龙酸的收率。
中药中有效成分的分子量大多不超过1000，而无效成分如淀粉、多糖、蛋白质、树脂等杂质的相对分子质量均在5万以上。因此，用截留分子量适宜的超滤膜能够很容易地将两者分开。与传统的化学分离方法相比较，膜分离的方法不仅效率高、操作简便，而且成本低、经济效益好，所以越来越多地被人们所采用。
3大分子精制
随着生物技术的发展，大分子类药物数量急剧增加，由于该类产品具有热不稳定性，超滤的低温快速过滤特性成为该类物质精制的重要方法。
利用截留分子量为2万PS管式超滤膜系统浓缩植酸酶发酵液的实验显示，植酸酶的浓缩倍数可以达到6.53倍，浓缩收率为99.69%，截留率为99.93%。
利用PAN超滤膜从藏牦牛血中分离纯化凝血酶的实验显示，所得凝血酶平均比活为38.24IU/mg，比传统方法所得比活提高2倍。
利用超滤膜从猪血中纯化SOD的方法有三个优点：①除去大量的小分子杂质；②浓缩SOD可节省随后使SOD沉淀所需的溶剂；③能大大提高后续热变性纯化的效果，SOD总回收率达62%，比活性达5000U/mg。
在丙种球蛋白制品的生产过程中将超滤技术用于蛋白质的脱醇和浓缩。
将超滤技术用于人血白蛋白浓缩和脱醇。
采用超滤法浓缩分离免疫初乳中的抗体，以上这些应用都取得了良好浓缩效果。
用超滤法把高分子多糖类化合物单独分离出来，制备具有特殊药理作用的药物，使中药不同分子量组分用于不同的治疗目的，达到药物的综合利用，是膜分离的重要功能。
选用截留分子量为5万的PS超滤膜替代醇沉法处理板蓝根水提液，实现了高效、节能。
利用CA超滤膜浓缩银耳浸提液，其产品收率较常规浓缩方法提高了22.4%，同时缩短了浓缩时间。
采用超滤一渗滤法，改进香菇多糖的提取纯化工艺，提高产品收率、降低生产成本。
用超滤法代替透析法去除海洋真菌多糖提取液中的小分子杂质，结果表明超滤法所得产品的得率和多糖含量都高于透析对照组，另外多糖中的色素大部分会被超滤膜吸附，这对提高粗品多糖含量是有利的。
中空纤维超滤膜可以有效提取六味地黄汤活性多糖，工艺简单，生产周期短。
4膜蒸馏
膜蒸馏是利用疏水性微孔膜将两种温度不同的水溶液分隔开，在膜两侧水蒸气压力差的作用下，热侧的水蒸气通过膜孔进入冷侧，在冷侧冷凝下来。膜蒸馏与常规蒸馏中的蒸发－传送－冷凝过程相同。两者都以气－液平衡为基础，都需要蒸发潜热以实现相变。相对于常规分离过程，其优点是：①理论上100％分离离子、大分子、胶体、细胞及其他不挥发性物质；②操作温度比传统蒸馏过程低；③操作压力比过程低；④对膜的机械性能要求低；⑤适于特种物质分离，而且可以分离极高浓度的物质，甚至可以产生结晶；⑥高效。将膜蒸馏用于热敏性物质的浓缩，能很好地发挥其低温浓缩的特性。青霉素作为抗生素应用于临床已有50年历史，一般采用溶媒萃取法提取，但提取过程复杂。利用直接接触式膜蒸馏浓缩青霉素水溶液，浓缩过程比较稳定。益母草和赤芍是中医临床常用中药，水苏碱和芍药苷是两者指标性成分，皆为水溶性，沸点比水高。将真空膜蒸馏法用于益母草与赤芍提取液的浓缩是可行的，具有效率高、耗能少、操作方便的优点，且有效成分的截留率为100%。

⑹ 抗体制备透析过程中出现蛋白沉淀会不会堵塞层析的柱子

抗体制备透析过程中出现蛋白沉淀当然会堵塞层析的柱子
需要将透析后的样品高速离心或者点45膜过滤后再上样层析柱，层析柱柱头上方有一层保护填料的膜。有沉淀的样品很容易先堵塞上膜，造成其余样品无法进入而堵塞柱子。即使通过了上膜沉淀也会附着在填料上，造成流动相空间减少柱子被堵塞。

⑺ 卵黄抗体肌是什么

对于家禽来讲，高滴度的抗体不仅产生在血清中，在卵黄中也会产生。因此，可以用特异性的弱毒苗或组织灭活苗多次免疫接种健康禽，待其卵黄内抗体滴度达到一定高度后，收集其所产之卵，制备卵黄抗体，同样可用于特异疫病的紧急预防和治疗。卵黄抗体，也称高免卵黄液。

⑻ 抗体形成的材料是什么

1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。 2. 腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。 4. 采用ELISA法检测抗原特异性MAb。 5. 在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5 mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。

⑼ 纯化的单克隆抗体，超滤浓缩的时候会把磷酸盐离心掉导致抗体的缓冲环境变成水吗

不会的。。。
超滤浓缩对于缓冲液成分不会有任何改变的，因为PBS中的磷酸根离子回也好答，氯离子也好，钠离子也好都是很小的离子，可以在溶液中自由扩散，不会因为超滤离心就被甩到下层滤液中去。
你可以做个简单的实验，取一定体积PBS溶液测一下pH值和电导率值，之后用超滤管去离心。取出上层未被滤完的溶液再测一下pH值和电导率值，会发现pH值和电导率值和之前测的是一样的。即可证明未被滤完的溶液还是PBS溶液，而不是水。

⑽ 生物制药纯化段用哪些化学品

1、抗体：（1）澄清目前我们最常用的的技术方法是离心和深层过滤。在实验室级别的样品制备和纯化，从效率和经济成本方面考虑，通常会使用离心的方法去除细胞和大部分颗粒碎片。在大规模的情况下一般使用深层过滤，相比较离心，深层过滤在大规模发酵料液的处理过程中效率更高，对设备要求较低（与离心机比较），并且目前市面上复合材料的深层过滤器具有去除HCP和DNA等杂质的效果。因此不同情况下应选择不同的方案。（2）亲和深层过滤之后，在绝大部分情况下会使用亲和层析。亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。Protein A由于其与抗体Fc片段良好的特异亲和性，较高的纯化倍数，工艺的简易性而被用于大多数抗体纯化工艺中的捕获阶段。亲和层析的填料价格较为昂贵，因此亲和层析可能需要设计通过几次循环层析来捕获这一批产品的目标蛋白。在这里要考虑和平衡好时间长短和经济成本的影响。时间太长，对上样液中目标蛋白的稳定性不利；循环次数太低，填料需求量太大，生产成本会提高。（3）离子交换层析离子交换层析有阴离子层析和阳离子层析。依据蛋白的酸碱性，极性，所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对填料上的离子交换剂有不同的结合和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来。这两种层析根据蛋白的特性来选择结合或者穿透模式进行纯化。其中，往往会有一个离子交换层析主要用来分离目标蛋白中的酸性、中性和碱性组份；另一个离子交换层析用于少量杂质，如：HCP、DNA、内毒素等物质的分离。（4）疏水层析疏水层析从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类，利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质进行分离。在某些单抗纯化的工艺中会用到疏水层析。疏水层析在去除多具体、DNA、HCP和内毒素等杂志方面都有很好的效果。但要注意的是，这种层析方法往往缓冲液条件比较极端（盐浓度很高，硫酸铵浓度甚至可以达到2摩尔）因此对一些蛋白可能会产生不利的影响。另外，由于疏水层析洗脱下的目标蛋白可能会含有较高的盐浓度，在超滤换液的过程中会需要更多的换液次数和体积。（5）超滤和换液超滤的原理：以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，；当料液流过膜表面时，超滤膜表面密布的许多细小的微孔只允许小分子物质通过而成为透过液，而料液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对蛋白的纯化、分离和浓缩的目的。最后还可以通过不断置换蛋白液中的缓冲体，达到换液的效果。单抗的超滤除了选择超滤膜包之外，还可以选择中空纤维柱。但行业中基本都是选择超滤膜包。虽然两者各有优势，但却选择超滤膜包，其中很大的一个原因是超滤膜包的耐压能力比中空纤维强（超滤膜包8bar，中空纤维3bar），精纯后的单抗往往稳定性比较好，所以选择超滤膜包似乎更加合适。2、重组蛋白（1）菌体收集菌体收集一般有离心和中空纤维两种方法。离心收集菌体，一般会用管式离心机；中空纤维收集菌体则是通过中空纤维的过滤，进行菌体的收集。收集菌体我们往往首先想到的是离心，但是放大无疑是离心机的软肋。中空纤维有开放式的通道，能够处理高固含量（菌体发酵液）、高粘度（菌体裂解液）和剪切力敏感型样品（质粒），并且具有良好的线性放大能力。因此推荐选择中空纤维，具体见后面的菌体洗涤步骤的描述。在这一步如果是收集和洗涤大肠杆菌，推荐使用透过孔径为500、750KD 或 0.1、0.2um 的 1 mm 内径的中空纤维（2）洗涤菌体菌体在收集之后，因为在过程中菌体和很多杂质都被一同收集了，所以之后有必要进行洗涤，把大量的颗粒、可溶或不可溶的杂质去除掉。这样可以减少在后续纯化中的杂质；另一方面，因为去除了大量的酶，因此对产品的活性也会有一定的保护作用。菌体洗涤主要有两种方法。第一种方法，前一步骤收集的菌体用合适的缓冲液把菌体混悬在洗涤的Tank中，进行洗涤。然后让菌体自然沉降，之后再置换菌体洗涤液混悬。以上步骤重复2~3次，之后收集沉降的菌体液，进行离心。第二种方法，中空纤维。如果菌体收集时使用的是离心法，则需要用合适的缓冲液把菌体混悬在洗涤的Tank中，之后一边搅拌防止菌体沉降，一边置换洗涤液。如果之前是用中空纤维收集的菌体，则可以在之前的设备上继续操作，置换和洗涤菌体。因此在大规模菌体收集和洗涤的应用中，我会优先选择中空纤维，一套设备多种用处。中空纤维无论在成本、能耗、人力、时间、场地等方面都有很大的优势。除此之外在粗纯的过程中，中空纤维还有出色的应用。（3）破菌破菌主流的方法有：高压匀浆机破菌 和 菌体裂解—碱裂解。高压匀浆机破菌：个人认为，高压匀浆机破军效率较低，对设备要求较高，破菌之前还要把菌体做相应比例的稀释和混悬，破菌过程中噪音大，能耗也较高。但其一直是比较成熟且可靠的破菌方法，一直在被行业使用。碱裂解：碱裂解法由于具有操作简便、重复性好等优点,已成为目前最为广泛应用的破菌方法，但是一些蛋白在碱裂解的过程中容易失活，因此要做评估和实验比较。除此之外还有使用细菌溶解酶破菌，如果使用这个方法，在产品的检测项目中要加入残留检测。（4）粗纯与单抗相比，微生物破菌后，其杂质负荷非常高，很难直接使用深层过滤的方法进行处理，所以粗纯方法很不相同。当破菌完成后，料液不推荐直接上色谱，因为杂质含量太高会影响层析的的分辨率，降低了目标蛋白的载量，并且还可能损害树脂的再生。粗纯可以用萃取的方法，如PEG沉淀、硫酸铵沉淀或硫酸钠沉淀等方法。如果目标蛋白是在沉淀中，则在沉淀之前还有必要进行离心去除微生物碎片。因此在规模越大的纯化中这种方法越难操作。我们推荐中空纤维进行粗纯，中空纤维还可以有效去除细胞碎片。之后再用更小孔径的中空纤维进行换液，可以有效去除RNA、色素和部分 HCP、HCD 等杂质，以减少层析阶段的负荷并且可以浓缩样品，减小上样的体积和时间。注意：在菌体收集、洗涤、粗纯的过程中，超滤膜包不可替代中空纤维。虽然两者都是切向流，但两者的结构设计还是有很大的不同，粘稠的料液容易堵死超滤膜包。相比而言，中空纤维的设计更适合处理高粘度且固体含量高的样品。（5）精纯如果目标蛋白本身带有标签，则可以考虑使用亲和填料。比如带有His标签的蛋白，我们可以用Ni亲和填料进行纯化。但如果蛋白不带标签，则可以考虑使用离子交换、疏水层析以及其他层析方式进行精纯。精纯的层析往往需要2步甚至3步，这里不详述。在这里我们要注意的一点是：重组蛋白与单抗相比，往往不太稳定，容易失活和沉降，在开发过程中要尤为注意到这点。（6）超滤超滤参考单抗。3、病毒样颗粒：病毒样颗粒（VLP）是与病毒极为相似的分子，但由于它们不含病毒遗传物质而具有非传染性。它们可以是天然存在的，也可以通过病毒结构蛋白的单独表达而合成，然后可以自组装成病毒样结构。来自不同病毒的衣壳蛋白的组合可用于创建重组VLP。这几年大家谈论最多的病毒样颗粒产品有HPV疫苗，除此之外，还有HFMV等疫苗。VLP可以在多种细胞培养系统中产生，包括细菌，哺乳动物细胞系，昆虫细胞系，酵母和植物细胞。我们就以酵母胞内表达的产品为例，因为酵母胞内表达的产品通常纯化比较具有挑战性。如果要了解动物细胞表达的纯化方法，可以参考后面“慢病毒纯化”的内容。（1）菌体收集、洗涤菌体、破菌、粗纯这几部分可以参照前面重组蛋白纯化的方法，但在这要注意的是，中空纤维的选择因菌体的不同，选型要有所调整。举个例子：果是收集和洗涤的是大肠杆菌，推荐使用透过孔径为500、750KD 或 0.1、0.2um 的 1 mm 内径的中空纤维，如果微生物是酵母，则推荐使用通过孔径为0.45 um、0.65 um或1 um的中空纤维进行菌体的收集和清洗。（2）精纯VLP与单抗和重组蛋白相比，其分子量要大很多，显微镜下一般在20~100纳米之间，它的稳定性较差。纯化过程中应尽量选择温和的条件，否则VLP容易出现在形状不规则、不均一或残缺的情况。精纯一般有1~3个步层析和超滤换液组成（根据产品的质量要求而定）。常规的层析组合如下：离子交换层析：捕获VLP，一般离子交换层析对VLP的载量都不高（10mg/ml左右）。分子筛复合填料：如Core 700（根据VLP的大小进行选择），以穿透的模式进一步纯化。它比传统的分子筛纯化有着巨大的优势，第一，载量大。甚至可以一次性上样相当于10倍以上柱体积的样品。第二，它具有吸附小分子杂质的作用（根据填料型号不同，吸附杂质大小的上限也不同），可以进一步去除DNA、HCP、内毒素、VLP碎片等杂质。疏水层析：可以去除一些不规则或者聚集的VLP，以及其他微量杂质。但疏水层析条件比较剧烈，可能会对对产品有有着负面影响。（3）超滤与超滤膜包相比，中空纤维剪切力更低。VLP对剪切力的耐受力较低，建议使用剪切力小的中空纤维，起到降低对产品的负面影响。如果可以去掉超滤步骤则更好。4、慢病毒纯化目前慢病毒培养的的主流是贴壁细胞和悬浮细胞（动物细胞）。（1）澄清过滤无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，发酵液中都会存在一些细胞、颗粒和脂质体，因此有必要进行澄清过滤。慢病毒的澄清过滤一般不推荐使用深层过滤膜包，因为深层过滤膜包容易把病毒一同去除掉。可以尝试使用中空纤维或囊式滤器进行过滤，如：0.45μm孔径，收集透过液。之后的精纯可以根据产品的情况进行模块组合，一般有：浓缩、离子交换层析、分子筛，以上的模块组合不分先后，根据产品情况决定。最后超滤换液。下面我们阐述。浓缩或换液，有些公司的产品病毒表达量较低，或者产品中的培养基和者其他杂质很有必要在层析之前去掉，那么就有必要加入浓缩或换液这个步骤。用中空纤维把料液超滤浓缩，之后换液成下一步层析的上样缓冲溶液。慢病毒对剪切力的耐受力较低，使用超滤很容易降低病毒的收率，建议使用剪切力小的中空纤维，起到降低对产品的负面影响。离子交换层析，分子筛复合填料，可以参考之前VLP的描述。